小鼠抗人呼吸道合胞病毒磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗人类呼吸道合胞病毒(HRSV)磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法以原核表达系统表达的HRSV P蛋白重叠肽段作为免疫原,采用杂交瘤技术筛选P蛋白单克隆抗体,Western blot法验证筛选获得的单克隆抗体与P蛋白的结合活性,免疫荧光细胞化学染色确定获得的单克隆抗体能否用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的检测。结果筛选出反应性好、特异性识别HRSV P蛋白的单克隆抗体P181-15A3、P211-16D8。获得的单克隆抗体通过Western blot法验证可与P蛋白结合,并可用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的免疫细胞化学检测。结论成功制备了小鼠抗HRSV P蛋白的单克隆抗体。

呼吸道合胞病毒在不同龄期BALB/c小鼠上的感染差异

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是全世界范围内引起下呼吸道感染的主要病原体,主要高危人群为六个月以下新生儿及65岁以上人群。目前BALB/c小鼠是RSV感染的有效动物模型,但不同周龄BALB/c小鼠感染RSV后的差异性尚未有报道。本研究分别选择10、30、60周龄BALB/c小鼠,在鼻腔接种106及107PFU RSV后,对不同龄期小鼠临床一般症状、体重、鼻/肺部病毒滴度及肺组织炎症病理变化进行检测及比较。结果显示感染106PFU RSV后小鼠未出现明显的体重下降,而107PFU RSV感染后能有效引发小鼠在感染后6-11天出现明显的体重下降。检测结果显示,在107PFU感染的小鼠的鼻、肺组织能够检测到明显的病毒复制,肺部免疫组化显示病毒主要定位于肺泡周围,炎症观察结果显示出明显的肺部炎症细胞浸润及组织病理损伤。同时本研究还观察到随着小鼠周龄的增大,感染后体重下降越明显,并能检测到更为明显的肺部病毒及验证损伤。这些结果显示出本研究成功建立了不同周龄BALB/c小鼠RSV感染差异模型,为不同年龄人群RSV感染免疫机制的深入探讨及RSV相关抗体和疫苗药物的选择、评估提供依据。