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人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用 被引量:21
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作者 司马妮 王薇 +5 位作者 徐茜 田训 罗爱月 卢运萍 王世宣 马丁 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期26-31,共6页
背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探... 背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。方法:利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞,利用RT-PCR和Westernblot技术检测转染后E6、E7基因的mRNA和蛋白的变化,利用MTT法检测SiHa细胞转染后细胞增殖活性,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡情况。结果:转染携带HPV16型E6、E7反义基因的质粒后,SiHa细胞的E6、E7基因的mRNA和蛋白表达均明显下调;MTT结果显示转染后细胞的增殖活性(0.50±0.05)与转染空载体细胞(1.01±0.06)和未转染细胞(1.28±0.06)比较明显降低(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示转染后细胞凋亡率(59.3±11.3)%与转染空载体细胞(9.4±1.8)%和未转染细胞(2.1±0.4)%比较有显著性差异(P<0.05)。激光共聚焦显微镜结果示转染后细胞凋亡明显增多。结论:HPV16型E6、E7基因反义RNA可降低宫颈癌细胞中E6、E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒16型 E6基因 E7基因 反义基因 EGFP 凋亡
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宫颈癌组织端粒酶表达与人乳头瘤病毒感染的相关性 被引量:3
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作者 司马妮 蔡丽萍 +3 位作者 朱元方 王薇 王世宣 马丁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期326-328,共3页
目的探讨宫颈癌组织中端粒酶活性表达与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法采用端粒重复序列扩增(telomere repeat amplification protocal,TRAP)-银染法对45例宫颈癌、30例慢性宫颈炎及20例正常宫颈组织的端粒酶... 目的探讨宫颈癌组织中端粒酶活性表达与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法采用端粒重复序列扩增(telomere repeat amplification protocal,TRAP)-银染法对45例宫颈癌、30例慢性宫颈炎及20例正常宫颈组织的端粒酶活性进行检测。同时,采用多聚酶链反应(PCR)技术测定上述组织HPV、HPV-16型及HPV-18型的感染情况。结果宫颈癌组织端粒酶阳性率、HPV和HPV-16检出率高于慢性宫颈炎和正常宫颈组织(P<0.05);宫颈癌组端粒酶表达与HPV感染(φ=0.44,P<0.01)、HPV-16型感染(φ=0.36,P<0.05)有关联性,与HPV-18型感染未发现关联性(P>0.05)。结论端粒酶的表达、HPV感染包括HPV-16型感染与宫颈癌发生密切相关。 展开更多
关键词 宫颈癌 端粒酶 人乳头瘤病毒
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HPV18 E6E7反义荧光真核表达载体的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的表达 被引量:1
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作者 司马妮 王薇 +6 位作者 田训 罗爱月 李春晓 王娟 卢运萍 王世宣 马丁 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期402-404,共3页
目的构建HPV18型E6E7反义荧光真核表达载体,并观察其对宫颈癌HeLa细胞中HPV18 E6和E7基因表达的影响,探索反义技术用于治疗临床HPV感染及宫颈癌的可能性。方法以HPV18型全基因质粒为模板,PCR法扩增HPV18型E6E7区716bp片段,利用基因重组... 目的构建HPV18型E6E7反义荧光真核表达载体,并观察其对宫颈癌HeLa细胞中HPV18 E6和E7基因表达的影响,探索反义技术用于治疗临床HPV感染及宫颈癌的可能性。方法以HPV18型全基因质粒为模板,PCR法扩增HPV18型E6E7区716bp片段,利用基因重组技术将目的片段反向插入荧光真核表达载体pEGFP-C1,EcoR I酶切并测序鉴定;采用脂转法将重组质粒pEGFP-HPV18 E6E7as(EGFP-18AS)转染宫颈癌HeLa细胞株,通过RT-PCR及western blot检测细胞中E6、E7 mRNA和蛋白的表达。结果成功构建HPV18E6E7反义荧光真核表达载体EGFP-18AS,经脂质体转染HeLa细胞,48h后在荧光倒置显微镜下可见明显的绿色荧光,且细胞中E6、E7 mRNA及蛋白表达水平均明显下调。结论反义荧光真核表达载体可以有效的抑制HPV18E6、E7癌基因的表达,为治疗HPV感染和宫颈癌提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒18型 E6/E7 反义 EGFP 宫颈癌
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反义HPV16 E6/E7-EGFP重组质粒的构建及其对宫颈癌SiHa细胞的促凋亡作用
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作者 司马妮 孔德波 +5 位作者 王薇 罗爱月 王娟 卢运萍 王世宣 马丁 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2006年第12期894-897,I0011,共5页
目的:构建HPV16早期基因E6/E7的反义重组质粒,探讨其对SiHa细胞的促凋亡作用。方法:将HPV16E6/E7基因片段反向克隆于真核表达载体pEGFP-C1并转染SiHa细胞,用RT-PCR方法检测转染后SiHa细胞E6、E7基因mRNA的表达,West-ernblot方法检测转染... 目的:构建HPV16早期基因E6/E7的反义重组质粒,探讨其对SiHa细胞的促凋亡作用。方法:将HPV16E6/E7基因片段反向克隆于真核表达载体pEGFP-C1并转染SiHa细胞,用RT-PCR方法检测转染后SiHa细胞E6、E7基因mRNA的表达,West-ernblot方法检测转染后E6/E7蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率。结果:成功构建携带HPV16E6/E7基因反义片段的真核表达载体,转染该质粒后,SiHa细胞E6、E7基因的mRNA和蛋白均明显下调;转染后细胞凋亡率为(59.3±11.3)%,明显高于转染空载体组[(9.4±1.8)%]和未转染组[(2.1±0.4)%](P<0.05)。结论:反义HPV16E6/E7基因可下调宫颈癌细胞中E6/E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒16型 E6/E7癌基因 细胞凋亡 宫颈肿瘤
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人乳头瘤病毒感染、端粒、端粒酶与宫颈癌 被引量:1
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作者 司马妮 《江西医学院学报》 2005年第2期111-113,共3页
关键词 人乳头瘤病毒 端粒 端粒酶 宫颈癌
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cFLIP在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中表达的意义 被引量:1
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作者 罗爱月 王薇 +3 位作者 司马妮 卢运萍 马丁 王世宣 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期504-507,共4页
目的研究cFLIP在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的表达及其临床意义。方法应用SP免疫组化染色法检测40例宫颈癌,40例CIN和20例正常子宫颈组织中cFLIP的表达情况,并与病理类型、组织学分级、临... 目的研究cFLIP在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的表达及其临床意义。方法应用SP免疫组化染色法检测40例宫颈癌,40例CIN和20例正常子宫颈组织中cFLIP的表达情况,并与病理类型、组织学分级、临床分期和是否有淋巴结转移等生物学行为进行相关分析。结果宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中cFLIP的表达阳性率分别为92.5%、70%和10%,三组间两两比较有显著性差异(P<0.05)。CINⅠ级组与CINⅡ-Ⅲ级组及宫颈癌组比较有显著性差异(P<0.05),宫颈癌组与CINⅡ-Ⅲ级组比较差异无显著性(P>0.05)。cFLIP表达阳性率与宫颈癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关。结论cFLIP的特异性高表达是宫颈癌变的一个早期事件,可能在宫颈癌癌前病变向宫颈癌的发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 CIN CFLIP 免疫组织化学技术
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肺耐药蛋白与卵巢癌顺铂耐药表型的相关性
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作者 王薇 鲍丽萍 +7 位作者 邢辉 杨晓葵 翁丹惠 田训 司马妮 王世宣 卢运萍 马丁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期228-231,235,共5页
目的探讨肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)与人卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP顺铂耐药表型的关系及其分子机制。方法应用LipofectamineTM介导反义寡核苷酸(AsODN)体外转染人卵巢癌细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后... 目的探讨肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)与人卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP顺铂耐药表型的关系及其分子机制。方法应用LipofectamineTM介导反义寡核苷酸(AsODN)体外转染人卵巢癌细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后细胞中LRP基因的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测顺铂对转染前后细胞的杀伤效应;通过高效液相色谱仪(HPLC)检测经LRP AsODN或抗LRP单克隆抗体作用后,顺铂在A2780/DDP细胞质、核中的吸收和排泄情况。结果与非耐药亲本细胞A2780相比,A2780/DDP细胞内LRP表达明显增高。LRP AsODN能明显降低A2780/DDP细胞中LRP表达水平,逆转其顺铂耐药表型。经LRP AsODN或抗-LRP单克隆抗体作用后,A2780/DDP细胞中顺铂含量明显增高,尤以胞核中的含量上升为甚,而其从核中的排泄受到显著性抑制。结论LRP可能参与介导人卵巢癌细胞顺铂耐药表型的产生,并可能与顺铂在卵巢癌细胞胞质囊泡以及细胞核质交换中的代谢过程密切相关。 展开更多
关键词 肺耐药蛋白 多药耐药 卵巢癌 顺铂
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子宫肌瘤介入栓塞治疗的临床分析
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作者 蔡丽萍 司马妮 《江西医学院学报》 2003年第5期60-63,共4页
目的 超选择双侧子宫动脉栓塞术治疗子宫肌瘤 ,测定栓塞后肌瘤缩小情况、血流动力学改变、性激素水平、肌瘤组织病理改变以评价其临床疗效。方法 采用Seldinger’s插管方法对 2 7例子宫肌瘤行子宫动脉栓塞 (u terinearteryembolizatio... 目的 超选择双侧子宫动脉栓塞术治疗子宫肌瘤 ,测定栓塞后肌瘤缩小情况、血流动力学改变、性激素水平、肌瘤组织病理改变以评价其临床疗效。方法 采用Seldinger’s插管方法对 2 7例子宫肌瘤行子宫动脉栓塞 (u terinearteryembolization ,UAE)并行彩超检测肌瘤缩小情况、子宫血流动力学改变、性激素含量水平及病检结果分析。结果 介入栓塞治疗成功率 96 .3%(2 6 / 2 7) ;随访 3~ 17月 (平均 10 .6月 ) ,术后 3月B超示肌瘤缩小 5 0 %以上占 30 .77%(8/ 2 6 ) ,术后 6月B超示肌瘤缩小 5 0 %以上占 44 %(11/ 2 5 ) ,术后 12月以上B超示肌瘤缩小 5 0 %以上占 6 0 %(12 / 2 0 ) ,术后 12月内肌瘤完全消失 4例 ;栓塞后 2 4h、三月检测血流动力学改变 ,见动脉血流图象消失 ;性激素含量介入前后比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;介入后肌瘤组织病检为透明样坏死改变。结论 UAE治疗子宫肌瘤创伤小 ,痛苦少 ,并发症少 ,住院时间短 ,恢复快 ,是一种安全、有效的治疗手段。 展开更多
关键词 子宫肌瘤 介入栓塞治疗 血流动力学 性激素 组织病理学
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卵巢癌介入化疗和腹腔静脉双途径化疗疗效观察 被引量:1
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作者 朱元方 司马妮 蔡丽萍 《江西医学院学报》 2003年第5期64-66,共3页
目的 比较中晚期卵巢癌患者超选择髂内动脉插管化疗和腹腔静脉双途径给药化疗两种治疗方法的疗效。方法  40例确诊的中晚期卵巢癌患者 ,介入组 19例行DSA下Seldinger法插管至肿瘤供血血管 ,灌注化疗药物后明胶海绵栓塞 ,对照组 2 1例... 目的 比较中晚期卵巢癌患者超选择髂内动脉插管化疗和腹腔静脉双途径给药化疗两种治疗方法的疗效。方法  40例确诊的中晚期卵巢癌患者 ,介入组 19例行DSA下Seldinger法插管至肿瘤供血血管 ,灌注化疗药物后明胶海绵栓塞 ,对照组 2 1例接受腹腔及静脉双途径给药化疗。结果 介入化疗组 19例中 ,CR +PR15例 ,有效率78.95 %;对照组 2 1例 ,CR +PR10例 ,有效率 47.6 2 %,两者比较差异有显著性。介入化疗组在获得有效肿瘤细胞减灭术方面亦明显高于腹腔静脉联合化疗组 ,两种化疗方法在症状缓解率上无统计学差异 ,在副反应方面前者明显低于后者 ,有统计学意义。结论 介入化疗是中晚期卵巢癌理想的辅助治疗 ,可重复操作 ,疗效满意且副作用小 ,优于腹腔静脉联合化疗。 展开更多
关键词 卵巢癌 超选择髂内动脉插管化疗 腹腔静脉化疗 疗效
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氨甲喋呤局部及静脉注射治疗宫颈妊娠一例
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作者 乐爱文 蔡丽萍 +1 位作者 朱元方 司马妮 《实用临床医学(江西)》 CAS 2003年第6期97-97,共1页
关键词 氨甲喋呤 宫颈妊娠 治疗
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Relationship between the Expression of Telomerase and Human Papillomavirus Infection in Invasive Uterine Cervical Carcinoma 被引量:3
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作者 司马妮 蔡丽萍 +3 位作者 朱元方 王薇 王世宣 马丁 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2007年第4期451-453,共3页
Telomerase activity was examined in invasive cervical carcinoma to assess whether it is activated during cervical malignant transformation and to look for its possible association with human papillomavirus (HPV) inf... Telomerase activity was examined in invasive cervical carcinoma to assess whether it is activated during cervical malignant transformation and to look for its possible association with human papillomavirus (HPV) infection. Histologically confirmed invasive cervical carcinomas and benign cervices were assayed for telomerase activity by using a modified telomere repeat amplification protocol (TRAP). The same cases were subjected to polymerase chain reaction (PCR) detection of HPV by using consensus primers and type-specific (HPV types 16 and 18) primers. Telomerase activity was detected in 40 of 45 (88.9%) invasive cervical carcinomas and 2 (all chronic cervicitis) of 50 (4%) benign cervical lesions. HPV was detected in 36 (24 HPV-16 and 4 HPV-18 cases) of 45 (80%) invasive cervical carcinomas and 20 (11 HPV-16 and 1 HPV-18 cases) of 50 (40%) benign cervical changes. There was a significant correlation between the expression of telomerase with histological grade (φ=0.44, P〈0.005), but no correlation was found between telomerase expression and HPV-18 (P〉0.05). Although larger sample studies are needed, there seems to be a clear association between telomerase upregulation and HPV status, mainly HPV-16 infection. 展开更多
关键词 cervical neoplasms TELOMERASE human papillomavirus
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人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用
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作者 司马妮 王薇 徐茜 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期369-369,共1页
通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞。利用RT-PCR和Western blot技术检测转... 通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞。利用RT-PCR和Western blot技术检测转染后E6、E7基因的mRNA和蛋白的变化,利用MTT法检测SiHa细胞转染后细胞增殖活性,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡情况。 展开更多
关键词 HPV16型E6 SIHA细胞 反义RNA 人乳头瘤病毒16型 E7基因 逆转作用 人宫颈癌 诱导细胞凋亡
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利用反义技术抑制人乳头瘤病毒18 E6/E7的表达及其对宫颈癌HeLa细胞增殖凋亡的影响
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作者 司马妮 孔德波 +3 位作者 王薇 卢运萍 王世宣 马丁 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期1618-1621,共4页
目的构建人乳头瘤病毒(HPV)18型 E6/E7反义荧光真核表达载体,研究其对宫颈癌 HeLa 细胞增殖凋亡的影响。方法以 PCR 法扩增 HPV18型 E6/E7区716bp 片段并反向克隆到荧光真核表达载体 pEGFP-C1,构建重组体 pEGFP-HPV18E6E7as(EGFP-18AS)... 目的构建人乳头瘤病毒(HPV)18型 E6/E7反义荧光真核表达载体,研究其对宫颈癌 HeLa 细胞增殖凋亡的影响。方法以 PCR 法扩增 HPV18型 E6/E7区716bp 片段并反向克隆到荧光真核表达载体 pEGFP-C1,构建重组体 pEGFP-HPV18E6E7as(EGFP-18AS)并转染人宫颈癌 HeLa细胞。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western 印迹技术检测转染后 E6、E7基因在 mRNA 和蛋白水平的变化;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测转染后细胞的的增殖活性;用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率;荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学改变。结果转染 EGFP-18AS 重组体后,HeLa 细胞中 E6、E7基因的 mRNA 表达和蛋白合成均明显下调;细胞增殖受到抑制;流式显示细胞 G_1期明显阻滞;同时在荧光显微镜下经 Hoechst 染色凋亡细胞出现染色质凝集、边集、碎裂等形态学改变。结论重组质粒 pEGFP-HPV18E6E7as 能有效地抑制人宫颈癌 HeLa 细胞的生长和增殖,诱导其凋亡,证明了反义 RNA 技术的有效性,为宫颈癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 乳头瘤病毒 凋亡
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子宫内膜异位症患者血清糖类抗原125、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1的表达及意义 被引量:14
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作者 周青平 罗红艳 司马妮 《中国妇幼保健》 CAS 2017年第9期1841-1844,共4页
目的探讨血清中糖类抗原125(CA125)、血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法选择子宫内膜异位症患者70例作为观察组,输卵管性不孕、卵巢畸胎瘤患者(非子宫内膜异位症)70例作... 目的探讨血清中糖类抗原125(CA125)、血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法选择子宫内膜异位症患者70例作为观察组,输卵管性不孕、卵巢畸胎瘤患者(非子宫内膜异位症)70例作为对照组,采用ELISA法检测血清中CA125、VEGF和IGF-1水平。结果观察组患者血清CA125、VEGF和IGF-1水平均高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜异位症Ⅰ~Ⅱ期组患者血清CA125、VEGF和IGF-1水平均低于子宫内膜异位症Ⅲ~Ⅳ期组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者血清VEGF和IGF-1呈正相关(r=0.521,P=0.000),血清VEGF和IGF-1与血清CA125无相关性(P>0.05)。CA125诊断子宫内膜异位症的灵敏度为58.76%,特异度为80.54%;VEGF诊断子宫内膜异位症的灵敏度为81.02%,特异度为89.78%;IGF-1诊断子宫内膜异位症的灵敏度为75.78%,特异度为83.24%;CA125+VEGF+IGF-1联合诊断子宫内膜异位症的灵敏度为76.78%,特异度为96.21%。结论子宫内膜异位症患者血清CA125、VEGF和IGF-1升高,CA125、VEGF、IGF-1水平和子宫内膜异位症的严重程度有关,三者联合检测有助于子宫内膜异位症的诊断。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 糖类抗原125 血管内皮生长因子 胰岛素样生长因子-1
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