5hmC及其Tet 氧合酶在小鼠视网膜成熟过程中的调控

目的:通过两个不同年龄段的小鼠视网膜组织来探究小鼠视网膜成熟过程中5hmC表达的稳定性及Tet氧合酶的调控情况。方法:选取2周龄及2月龄健康雄性野生型C57BL6J小鼠各39只,采用免疫荧光技术分别检测2周龄和2月龄小鼠视网膜组织中5hmC表达情况以及通过qRT-PCR技术和蛋白免疫印迹技术检测Tetl,Tet2和Tet3的表达水平。进一步选取2月龄体重相近健康的雄性小鼠45只,使用视神经夹以相同的力度夹持小鼠右眼球后视神经1 s,夹伤后第7天小鼠右眼为实验组,左眼为空白对照组。探究视网膜神经节细胞损伤过程中5hmC及Tets的变化情况。结果:(1)免疫荧光技术检测显示在小鼠发育过程中2周龄和2月龄小鼠视网膜组织中5hmC均有表达,相较2周的小鼠视网膜组织,2月的小鼠视网膜组织5hmC在视网膜各层细胞(GCL,IVL和ONL)均表达。此外,5hmC表达位于视网膜神经节细胞,并且与Brn3a在细胞内共定位。(2)无论是出生后2周还是2个月的小鼠视网膜组织中,Tet3蛋白含量最高,Te3次之,Tetl最低。随后,qRT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示随着年龄的增加,Tetl与Te3蛋白表达呈现下降趋势,而Tet3蛋白的表达增加,差异有统计学差异(P<0.05)(3)视神经夹伤第7天,视网膜神经节细胞中5hmC及Tet3的表达出现明显降低。结论:5hmC参与小鼠视网膜成熟过程,Tet3是小鼠视网膜成熟过程中的主要调节蛋白。此外,5hmC及Tet3是视网膜神经节细胞成熟过程中稳定的标志物,可能是视网膜神经节细胞保护的新靶点。