临床病理科住院医师规范化培训中病理技术教学的探索

目的为了对现有教学体系进行优化改进,完善住院医师规范化培训(简称住培)中病理技术教学体系,提升住院医师的临床病理科基础知识及指导医师的专业技能,促进病理技术学科在住培中的发展,同时也为住院医师今后临床工作奠定良好的基础。方法该文结合住培中病理技术相关培训内容的要求,通过制定相对完善的教学内容及教学方式对病理技术教学模式进行初步探索,并以问卷调查形式找出现有问题,从规范教学计划、强化师资队伍及个性化教学三方面进行优化。结果通过问卷调查统计显示,住院医师对病理技术教学体系总体评价较好[满意(5/20),非常满意(15/20)];在理论教学中反馈要注意各部分教学内容的衔接;在实训带教中反馈指导医师操作标准的统一性;对临床病理科新技术的介绍[满意(8/20),非常满意(12/20)]以及应用方面[满意(6/20),非常满意(14/20)]则反馈较好。结论临床病理科住院医师通过在病理技术室的集中学习和培训,对病理技术有更深入的了解,能够独立完成简单的技术工作。

牛源多杀性巴氏杆菌交叉保护性抗原的筛选

为筛选牛源多杀性巴氏杆菌(Pm)交叉保护性抗原,本研究以A型Pm CQ2株基因组为模板,对其omp A、omp H、plp E、pm0979、P6和pfh B基因分别进行扩增,克隆于相应表达载体并进行原核表达,同时对表达产物进行纯化及western blot鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,分别测定其对2 LD50剂量的A型和B型Pm的攻毒保护效果。结果表明,重组蛋白r Omp A、r Omp H、r Plp E、r Pm0979、r P6和r Pfh B对A型Pm CQ2株的攻毒保护率分别为20%、60%、70%、40%、20%和10%,对B型Pm CVCC450株的攻毒保护率分别为0、30%、40%、20%、10%和0,表明重组蛋白r Plp E、r Omp H和r Pm0979可以针对不同血清型的Pm提供较好的交叉保护作用。本研究为牛源Pm新型疫苗的研制奠定了基础。

不同切片厚度免疫组化标记Ki-67对惰性淋巴瘤和侵袭性淋巴瘤鉴别诊断的影响

目的通过比较弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)和黏膜相关淋巴组织(mucosa associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤中Ki-67免疫组化染色情况,探索不同切片厚度对Ki-67表达的影响,以筛选出临床免疫组化工作中最优切片厚度。方法收集DLBCL 28例,MALT淋巴瘤18例,分别设定2、4、6、8μm四种切片厚度进行Ki-67染色,并用SPSS 22.0软件对Ki-67平均阳性染色面积百分比(average positive staining area percentage,APSAP)进行统计分析。结果不同切片厚度之间Ki-67阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。随着切片厚度的增加,淋巴瘤病变部位细胞核Ki-67染色逐渐加深,同时Ki-67 APSAP也随之增加。当淋巴瘤组织切片厚度4μm(±1μm)时,细胞结构清晰,染色对比鲜明,背景值低,更利于细胞计数和对染色结果进行准确分析。结论Ki-67增殖指数处于区分惰性淋巴瘤和侵袭性淋巴瘤的临界值45%左右时,切片厚度建议采取4~6μm,该范围内APSAP误差较小,与临床诊断吻合率最高,可获得较为稳定可靠的结果。

不同染色条件对COVID-19 Nucleocapsid抗体免疫组化染色的比较

目的探讨新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)Nucleocapsid抗体在不同平台、不同操作条件下的染色情况,筛选该抗体的最佳染色条件,为COVID-19的病理诊断和临床治疗提供参考。方法将8例COVID-19尸检肺组织石蜡样本制成切片,分别使用全自动免疫组化染色仪和手工免疫组化进行染色。全自动免疫组化染色仪一抗稀释浓度分别为1∶2000、1∶4000、1∶8000;手工免疫组化修复分别采用EDTA和柠檬酸修复,经37℃孵育1 h和4℃孵育过夜,一抗稀释浓度分别为1∶2000、1∶4000、1∶8000。结果两种染色结果均显示非特异性着色,与一抗浓度呈正相关;手工免疫组化条件下柠檬酸修复后免疫组化染色特异性较高;且经4℃孵育过夜染色特异性较高,阳性信号明确。结论采用全自动免疫组化染色仪进行染色时,一抗稀释浓度为1∶8000时染色效果最佳;手工免疫组化染色建议采用柠檬酸修复,一抗稀释浓度为1∶4000,并经4℃孵育过夜染色效果最佳。

不同条件下四种脱钙液脱钙效果的对比分析

在病理制片过程中常会遇到骨组织或钙化组织,由于其含有丰富的骨盐,导致制片效果不佳,需使用脱钙液进行脱钙预处理。在日常工作中,对脱钙液的要求包括:脱钙时间短,能较好地保存骨组织形态以及各类抗原等。目前,各实验室常用的脱钙液效果参差不齐,影响病理诊断的准确性。因此,迫切需要一种较为理想的脱钙条件应用于日常骨组织的处理^([1-3])。根据以往研究结果,本实验将10%EDTA、5%盐酸氯化钠.

肺大组织切片制作体会及问题分析

肺炎是由细菌、病毒、衣原体和支原体等微生物引起的感染性疾病,在普通人群中存在较高的发病率,并可由于误诊、治疗不及时等原因导致患者死亡。目前,临床肺炎的病理诊断和研究主要采用传统病理切片方法,存在取材部位较为局限的缺点。大组织切片技术可以将肺组织水平切面完整地展现在一张切片上,有利于对肺部炎症的发生部位及周围微环境进行全面观察与评估,并可将相关技术应用到肺部肿瘤的临床诊断和研究中[1]。本研究从固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等过程就肺大组织切片的制作方法及注意事项进行梳理,为其在临床诊断及科学研究中的应用奠定基础。

病理学专业学位研究生病理技术教学的探索

本研究结合教学实践,对病理学专业学位研究生病理技术教学内容、方式及效果评价进行总结。根据研究生基础条件制定病理技术培训方案,采用翻转课堂等多元化教学方法开展以学生为中心的启发式教学,利用智能化教学平台开展互动式理论教学,以问题导向学习模式开展实践教学,旨在提高病理学专业学位研究生的病理技术理论素养和实践水平,提升临床科研思维,为其将来开展临床病理诊断和科研工作奠定基础。

牛源多杀性巴氏杆菌pm0979-ompH融合表达及免疫效果

分析获得pm0979、ompH基因的主要抗原表位,并将2种基因以3种不同长度的疏水性linker进行拼接融合(标记为pm0979-L6-ompH、pm0979-L10-ompH、pm0979-L15-ompH),分别克隆于pet-30a中构建原核表达载体,并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行表达获得融合蛋白。以融合蛋白免疫小鼠后进行牛源多杀性巴氏杆菌(Pm)CQ2株、Pm B型攻毒试验,分别测定小鼠体内抗体产生情况以及对小鼠的交叉保护效果。结果显示:3种融合蛋白在小鼠体内都能诱导较高的抗体水平,但不同长度的linker对小鼠保护性不同,其中融合蛋白rPM0979-L10-OMPH、rPM0979-L15-OMPH对Pm CQ2株攻毒的小鼠保护率达70%,对Pm B型攻毒小鼠保护率为30%。结果表明:重组的pm0979-ompH融合基因疫苗具有良好的交叉免疫保护力;同时,不同长度linker的基因疫苗对小鼠的保护率有一定影响。

牛A型多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白免疫保护性的研究

为研究多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白(TAAs)的免疫保护效果,在对牛A型多杀性巴氏杆菌Pm CQ2株假定TAAs编码基因Pm1g0001的黏附基序分析基础上,对其黏附基序进行PCR扩增,并与质粒p ET-32a(+)连接,将重组质粒转入BL21(DE3)诱导表达获得重组蛋白,纯化后与佐剂混合免疫小鼠,三免后收集小鼠血清检测抗体效价,并用Pm CQ2菌液进行攻毒保护性试验。结果显示,Pm1g0001的黏附基序具有TAAs的典型结构,重组蛋白r Pm1g0001免疫小鼠后可以刺激机体产生高效价抗体,对Pm CQ2的保护率达60%,具有良好的免疫保护效果,提示牛A型多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白可以作为研究新型亚单位疫苗的候选靶标。