雪灵芝水提物对淋巴细胞增殖及Th1型细胞因子表达的影响

目的：探讨雪灵芝水溶性提取物对淋巴细胞增殖及其Th1型细胞因子表达的影响。方法：体外培养的小鼠脾淋巴细胞及人外周血单个核细胞（PBMC）经不同浓度雪灵芝水提物处理。采用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平;应用ELISA双抗体夹心法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2和IFN-γ水平;RT-PCR与实时定量PCR检测人PBMC中NF-кB p65、IL-2及IFN-γ的mRNA表达。结果：雪灵芝水提物在0.025~0.2 mg/ml浓度范围,对小鼠脾淋巴细胞增殖具有浓度依赖性的促进作用;0.05 mg/ml和0.1 mg/ml雪灵芝处理组IL-2水平高于对照组（P〈0.05）,0.4 mg/ml雪灵芝处理组IFN-γ水平高于对照组（P〈0.05）;相对于对照组,0.2 mg/ml雪灵芝处理组人PBMC的NF-кB p65、IL-2及IFN-γmRNA相对表达系数分别为204.76、4.31和40.46。结论：雪灵芝水提物对小鼠脾淋巴细胞增殖以及小鼠脾淋巴细胞、人PBMC中Th1型细胞因子的表达具有促进作用。

雪灵芝水提物对人胃癌MGC-803细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雪灵芝水溶性提取物（arenaria kansuensis aqueous extract，AKAE）对人胃癌细胞株MGC-803细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养的MGC-803细胞经不同浓度AKAE处理，采用MTT法检测受试细胞增殖水平；应用流式细胞术检测AKAE处理12h后各组细胞的细胞周期；Western blot检测不同浓度、不同时间AKAE处理组MGC-803细胞中cyclin D1蛋白表达水平；实时定量PCR检测各组MGC-803细胞中cyclin D1、p16和p21基因的mRNA相对表达量。结果AKAE对体外培养的MGC-803细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用（P〈0．05），IC50为（0．134±0．005）mg／ml；经AKAE处理12h，0．8mg／ml组MGC-803细胞的G1期细胞比例高于对照组、S期细胞比例低于对照组（P〈0．05）；（0．2～0．8）mg／ml浓度的AKAE处理，对MGC-803细胞中cyclin D1的蛋白及mRNA表达具有明显抑制作用（P〈0．05）；AKAE促进MGC-803细胞中p16、p21基因mRNA表达，0．2mg／ml处理组p16、p21mRNA相对表达量分别为对照组的3．3倍和18．5倍。结论雪灵芝水提物（AKAE）对MGC-803细胞增殖具有抑制作用，其机制与G1期阻滞和对G1期相关因子表达的影响有关。

LPS对大鼠骨髓MSC NF-κB p65及抗炎性细胞因子mRNA表达的影响

目的观察LPS模拟的炎性刺激对体外培养大鼠BM-MSC细胞的NF-κB活化与抗炎性因子IL-10、TGF-β3及IDO mRNA表达的影响。方法以体外培养P2代大鼠BM-MSC为受试细胞,按空白对照、PDTC(100μmol/L)、PDTC(100μmol/L)﹢LPS(5μg/mL)、LPS(1μg/mL)、LPS(5μg/mL)、LPS(10μg/mL)分组处理4 h。提取细胞总RNA,RT-PCR两步法测定NF-κB亚基p65与抗炎性因子IL-10、TGF-β3及IDO的mRNA表达。结果与对照组及PDTC﹢LPS组相比,LPS处理组NF-κB p65亚基、抗炎因子IL-10和TGF-β3 mRNA表达升高(P<0.05),而LPS处理组中IDO的mRNA表达降低(P<0.05);抗炎因子IL-10、TGF-β3表达变化与NF-κB p65亚基表达变化间呈正相关,相关系数分别为0.844(P<0.05)、0.837(P<0.05);而IDO与NF-κB p65亚基在表达变化上呈高度负相关,相关系数为-0.942(P<0.05)。结论 (1)LPS作用于MSC,可通过活化NF-κB而诱导抗炎性细胞因子IL-10、TGF-β3的mRNA表达;(2)正常培养的MSC组成性表达IDO,LPS模拟的炎性刺激对IDO表达具有抑制作用。提示在炎性和非炎性微环境下,MSC发挥负性免疫调节的机制有所不同。