成年和老龄大鼠催产素及加压素系统的对比研究

目的:探讨成年和老龄大鼠外周和中枢内催产素和加压素的含量变化。方法:采用健康成年SpragueDawley(SD)雄性大鼠和一年半的老龄化雄性SD大鼠各4只,应用免疫组织化学方法对下丘脑视上核(SON)及室旁核(PVN)中催产素(OXT)及加压素(VP)进行染色研究;同时应用ELISA方法检测两组动物血浆中的激素浓度水平。结果:与成年大鼠相比,老龄大鼠下丘脑视上核和室旁核中的OXT及VP神经元数量变化不明显,但其免疫反应染色强度显著降低,灰度分析显示单个神经元和整个核团的光密度值明显下降(P<0.05);正中隆起处VP和OXT纤维终末及膨体的免疫反应性也明显减弱。与此相对,Elisa检测显示老龄鼠血浆中的VP和OXT水平高于正常大鼠,且以VP的升高更为明显。结论:老龄鼠外周血和中枢神经元中的OXT、VP含量水平呈相反变化趋势,这可能与老龄鼠中的激素释放增加、储存减少有关,而这一变化可能参与某些老年相关疾病如水盐代谢障碍、高血压、学习记忆障碍的发生发展过程。

非小细胞肺癌分子靶向治疗标志物研究进展

肿瘤分子靶向治疗是指以肿瘤发生发展相关的关键分子作为靶点,利用抑制剂、阻断剂、抗体等药物进行抗肿瘤治疗的手段.分子靶向治疗具有特异性强、副作用小等特点,已成为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗领域的研究热点之一.目前针对NSCLC已上市的分子靶向药物主要包括癌基因分子靶向药物、抗血管生成药物、免疫靶向治疗药物以及多靶点抑制剂等.本文主要阐述不同分子靶向药物的作用机制、疗效及获益人群.

感恩之心

人贵有一颗感恩之心。

浅谈小学英语课堂教学的实效性

摒弃已有的填鸭式的教学,改变教师教得累、学生学得累的现状,探讨怎样使课堂教学更有效就显得有现实指导意义。激发学生的学习兴趣,提高课堂教学实效性。建立平等的师生关系,提高课堂教学实效性。小组合作,自主学习,提高课堂教学实效性。

NCLX介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响

目的探讨线粒体钠钙交换体(mitochondrial Na+/Ca2+exchanger,NCLX)介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响。方法真核表达载体pSliencer3.0-shNCLX、pcDNA3.1(+)-NCLX分别转染肝癌细胞SNU-739和SNU-368,构建稳定干涉和过表达NCLX肝癌细胞。采用免疫印迹法检测转染后肝癌细胞中NCLX蛋白的表达,Rhod-2-AM染色检测肝癌细胞线粒体钙水平,MTS和EdU实验检测肝癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡情况。结果免疫印迹法检测结果显示成功构建干涉和过表达NCLX的SNU-739和SNU-368肝癌细胞。与转染空载体肝癌细胞比较,干涉NCLX后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体钙明显增多(P<0.01),细胞增殖率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.01);而过表达NCLX后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体钙明显减少(P<0.05),细胞增殖率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率明显上升(P<0.01)。结论干涉NCLX诱导的线粒体钙水平升高可促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡,而过表达NCLX诱导的线粒体钙水平下降抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡,NCLX可能是肝癌的潜在治疗靶点。

Ratiometric-pericam-mt慢病毒的构建及其线粒体钙检测功能的验证

目的:基于由环状异构黄色荧光蛋白(Circularly Permuted EYFP)改造的具有线粒体定位功能的Ratiometric-pericam-mt(rp-mt)荧光蛋白构建携带有rp-mt基因的慢病毒载体,验证其在线粒体钙检测中的功能,为进一步研究线粒体钙稳态在细胞生命活动中发挥的作用提供参考依据。方法:采用慢病毒载体EF-1αF-puro和rp-mt质粒构建携带有rp-mt基因的重组慢病毒载体,经脂质体法在293T细胞中与包装质粒共转染,收集构建好的重组慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt并体外感染人肝癌细胞SNU-739,验证重组慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt的活性功能。结果:以慢病毒载体EF-1αF-puro为骨架质粒,成功构建了携带有rp-mt基因的重组慢病毒载体(EF-1αF-puro-rp-mt),收集获得的重组慢病毒滴度为4×10~6TU/m L。将携带有rp-mt基因的慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt感染SNU-739细胞48小时后,在荧光显微镜下观察到有超过85%的细胞发出绿色荧光,定位于细胞线粒体内,且对SNU-739细胞进行Ru360和CGP37157处理后,细胞荧光强度随线粒体内钙水平改变而增强或减弱。结论:采用脂质体包装法成功构建了携带有rp-mt基因的重组慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt,细胞经该慢病毒转染后可稳定表达具有线粒体定位功能的荧光蛋白rp-mt,准确地检测细胞线粒体钙离子水平。