紧密连接蛋白介导的十三味辛夷滴鼻剂对小鼠鼻腔黏膜修复机制探究

目的 探讨十三味辛夷滴鼻剂对鼻腔黏膜损伤小鼠的修复作用及其可能的干预机制。方法 制备小鼠鼻腔黏膜热损伤模型,随机分为空白对照组、模型对照组、滴通鼻炎水阳性对照组[1μl/(只·次·侧)]、十三味辛夷滴鼻剂高剂量[5μl/(只·次·侧)]、中剂量[2.5μl/(只·次·侧)]、低剂量组[1.25μl/(只·次·侧)],每组各10只,雌雄各半。给药7 d后,分级评价鼻黏膜红肿程度,苏木素-伊红(HE)染色观察鼻黏膜组织病理结构改变,免疫组化分析鼻黏膜上皮ZO-1、Claudin-1、Occludin表达水平。结果 给药7 d后,模型对照组红肿程度评分显著高于空白对照组(P <0.05),滴通鼻炎水阳性对照组、十三味辛夷滴鼻剂高、中、低剂量组均低于模型对照组;HE染色显示,十三味辛夷滴鼻剂各组随剂量增高,黏膜层逐渐变薄、黏膜结构趋于整齐;与模型对照组比较,十三味辛夷滴鼻剂高剂量组ZO-1、Claudin-1、Occludin蛋白表达量显著提高(P <0.05)。结论 十三味辛夷滴鼻剂可能通过上调鼻黏膜上皮紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin的表达,修复小鼠鼻腔黏膜损伤。

调脾承气汤改善食积小鼠胃部消化功能的转录组学研究

目的:基于转录组学探索调脾承气汤改善高热量和高蛋白食物导致积食小鼠的分子机制。方法:C57小鼠被随机分为正常对照组、模型组、调脾承气汤低剂量组(145 mg/mL)、调脾承气汤高剂量组(580 mg/mL)、多潘立酮组(0.15 mg/mL)。对实验小鼠进行一般状态观察和平均食量统计,测定各组小鼠胃排空及肠推进率。H&E染色观察胃组织病理变化;PAS染色观察胃组织糖元变化;比色法测定胃蛋白酶活力;酸碱滴定法测胃内容物的pH值。转录组测序分析胃组织差异基因,并对差异基因制作火山图和聚类热图,KEGG对差异基因进行信号通路富集分析。RT-qPCR验证筛选得到的差异基因。结果:积食小鼠在调脾承气汤治疗后小鼠体质量和平均食量增加(P<0.05),积食小鼠肠推进率和胃排空速度加快(P<0.05)。调脾承气汤能够保护胃组织结构和胃组织糖元降解,提升胃蛋白酶活力(P<0.05)和降低胃内容物pH(P<0.05)。转录组结果显示调脾承气汤可以调节Acox2和cilp2的表达,调节脂肪消化吸收、蛋白质消化吸收、胰腺分泌信号。RT-qPCR显示,相较于模型组,调脾承气汤上调Acox2(P<0.05),下调cilp2(P<0.05)的mRNA水平。结论:调脾承气汤可以改善高热量和高蛋白食物导致积食小鼠的消化功能障碍,其机制涉及到调节脂肪和糖类代谢基因Acox2和cilp2,以及胰腺分泌信号。

基于内皮细胞Ang/Tie2轴抗炎作用探讨化疗性静脉炎发病机制

化疗性静脉炎一般是指静脉内长期输入浓度较高、刺激性较强的药物,导致血管内皮及周围组织存在炎性细胞浸润的一种常见并发症。受损的血管内皮细胞和炎性细胞均可产生多种炎性因子,从而激活炎症相关的信号通路,介导炎症的发展。与此相反,有一类保护性细胞因子或其他蛋白可抑制炎症的发生发展,维持血管的稳定状态,例如酪氨酸蛋白激酶-2(Tie2)。Tie2是血管生成素家族蛋白(Ang)的受体,其介导的Ang/Tie2轴调节出生后的血管生成、血管重塑、血管通透性和炎症,以维持血管的稳态。本文描述了Ang/Tie2信号传导的生物学功能,总结了Ang/Tie2信号传导对血管内皮细胞的调节作用,以此来探讨Ang/Tie2轴在化疗性静脉炎中的抗炎机制。

依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞氧化应激的保护作用

目的研究依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法以500μmol.L-1硝普钠诱导PC12细胞氧化应激损伤,MTT法测定细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹检测Bax和Bcl-2表达变化。结果依达拉奉在25μmol.L-1能增加氧化应激损伤细胞活力,在75μmol.L-1其保护作用达到峰值,能明显改善细胞形态结构,减少早期凋亡细胞数目,升高细胞Bcl-2/Bax比值。结论依达拉奉对硝普钠诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与依达拉奉清除NO,抑制线粒体凋亡通路有关。

基于胃食管反流病探讨中医梅核气本质

对中医梅核气的实质从胃食管反流病角度进行探讨。故先从中医梅核气病名来源介绍、分析了"炙脔"的涵义,然后列举了梅核气的中医病机、胃食管反流病的西医诊断及发病因素,进一步筛理出两者在症状、病因、治疗方面的一致性,最后提出现代医学胃食管反流病就是中医梅核气的本质。本文为临床医师对梅核气从西医角度采用质子泵抑制剂治疗及从中医角度采用平肝抑酸治疗梅核气提供了理论支撑,丰富了中医脾胃学说。

一测多评法同时测定扶正固本颗粒中6种成分的含量

目的:建立扶正固本颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等6种成分含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Dikma Diamonsil C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为275 nm(0~8 min)、320 nm(8~9 min)和275 nm(9~33 min),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。以黄芩苷为基准物,采用多点校正法和斜率校正法分别计算另外5种成分的相对校正因子(fk/s),并采用保留时间差值法对待测成分进行色谱峰定位,比较上述两种一测多评法所得计算值与外标法实测值的差异。结果:2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素检测进样量的线性范围分别为0.053~2.12、0.163~6.52、0.059~2.36、0.021 6~0.864、0.03~1.2、0.021~0.84μg(r>0.999),精密度、稳定性(12 h)、重复性试验的RSD均小于3%;平均加样回收率为98.72%~99.82%(RSD为0.89%~1.24%,n=9)。以黄芩苷为基准物,2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素多点校正法的f_(k/s)分别为1.172、0.528、1.479、1.820、2.534,斜率校正法的f_(k/s)分别为1.234、0.550、1.559、1.939、2.664;3种方法测得10批扶正固本颗粒中6种成分含量的RSD为0.29%~2.77%(n=10);两种一测多评法测得结果与外标法的Pearson相关系数均不低于0.999 9(P<0.001)。结论:成功建立了可用于同时测定扶正固本颗粒中6种成分含量的一测多评法。

扶正固本颗粒HPLC指纹图谱建立

目的建立扶正固本颗粒(黄芩、淫羊藿、女贞子等)HPLC指纹图谱。方法该药物80%甲醇提取液的分析采用Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相甲醇⁃0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长250、260、275、285、320 nm;柱温25℃。结果10批样品HPLC指纹图谱中有36个共有峰,相似度均大于0.99,并确定了其中8种成分(2,3,5,4′⁃四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、淫羊藿苷、汉黄芩素、宝藿苷I、大黄素)的结构。结论该方法分离度、精密度、稳定性、重复性良好,可用于扶正固本颗粒的质量控制。

基于UPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术检测扶正固本颗粒化学成分

目的基于超高效液相色谱-电喷雾离子源-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-ESI-QTOF-MS/MS)检测扶正固本颗粒中的化学成分并进行确认。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速0.2 mL/min,柱温40℃,同时联合XEVO G2-XS ESI离子源进行正、负离子模式测定,通过比对保留时间、分子精确质量数及二级质谱碎片等参数,结合UNIFI软件分析各成分碎片裂解方式并参考化学成分数据库及文献数据对检测到的化学成分进行确认鉴定。结果初步鉴定出56个化合物,其中包括黄酮类化合物29个,蒽醌类化合物9个,二苯乙烯苷类化合物2个,萜类化合物6个,皂苷类化合物3个及7个其他成分。结论该方法可快速、准确的鉴定出扶正固本颗粒中的多种化学成分,为寻找其药效物质基础及进一步建立全面质量控制方法提供了依据。

黄芪甲苷对免疫低下糖尿病大鼠的影响

目的:研究黄芪甲苷对免疫低下糖尿病大鼠的影响。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素1次,环磷酰胺3次,造成免疫低下糖尿病模型动物,持续给药4周后,腹主动脉取血,分离血清,测定血糖、血常规、IgG、IL-2、INS水平,并进行胰腺组织形态学观察及胰岛素样生长因子(IGF)的检测。结果:免疫低下糖尿病动物模型造模成功,黄芪甲苷各剂量组的各项指标均有所改善。结论:黄芪甲苷可以使模型动物血糖降低,免疫力增强,是黄芪功效发挥的重要成分之一。

决明子降脂保肝胶囊的CO2超临界萃取工艺研究

目的研究CO2超临界萃取决明子降脂保肝胶囊中有效成分之一的蒽醌类化学物质的最佳工艺条件,考察各工艺参数对蒽醌类化学物质的影响。方法以决明子降脂保肝胶囊中蒽醌类化学物质的含量为主要指标,采用L（3）4正交设计优选CO2超临界萃取的蒽醌类化学物质最佳工艺条件。结果CO2超临界萃取温度、萃取压力及萃取次数均对蒽醌类化学物质有较大影响,以萃取温度为60℃,萃取压力为60mPa,萃取2次,每次1.5h时,蒽醌类化学物质的萃取最佳。结论CO2超临界萃取可用于决明子降脂保肝胶囊的生产,且工艺条件简单、稳定、可行。

地黄饮子对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及神经元c-fos神经型一氧化氮合酶表达的影响

血管性痴呆(VD)是由脑缺血、缺氧引起血管内皮损伤,以认知、记忆功能缺损为临床表现的获得性智能障碍综合征,严重影响患者生活质量,对家庭和社会造成了巨大负担[1]。地黄饮子(DHYZ)滋肾阴、补肾阳、开窍化痰,治肾气虚厥、语言不出、足废不用。本实验探讨DHYZ对VD大鼠学习记忆障碍的改善作用,及对神经元c-fos、神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。

朝鲜当归提取物对小鼠脑缺血-再灌注损伤神经的保护作用及其机制

目的探讨朝鲜当归提取物对小鼠脑缺血-再灌注(I/R)损伤影响及其机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型对照组和朝鲜当归(10,25,50,100 mg·kg-1)组(n=9)。I/R小鼠采用大脑中动脉阻塞(MCAO)方法使小鼠短暂缺血90 min,再灌注24 h。应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法和伊文思兰染色评价大鼠脑梗死体积和血-脑屏障通透性变化;利用蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测血管生成诱导蛋白如血管生成素1(Ang-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,紧密连接蛋白如ZO-1和Occludin表达;同时检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt磷酸化表达。结果朝鲜当归提取物可显著缩小I/R小鼠脑梗死体积(P<0.05),降低I/R小鼠血-脑屏障通透性(P<0.05),还可激活PI3K/Akt通路,增加Ang-1、VEGF、ZO-1和Occludin蛋白表达(P<0.05)。结论朝鲜当归可能通过降低血脑屏障通透性及促进血管生成在小鼠I/R损伤中发挥神经保护作用。

一标多测法同时测定参苓白术颗粒中5种成分的含量

目的建立参苓白术颗粒中甘草苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、甘草酸铵5种成分的含量测定方法。方法方法:采用超高效液相色谱-蒸发光检测器(UPLC-ELSD)联用的方法,以甘草苷为参照物,建立其与人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、甘草酸铵之间的相对校正因子;采用外标法测定甘草苷的含量,通过相对校正因子计算人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、甘草酸铵的含量,对一标多测法的计算值与外标法实测值进行比较。结果各相对校正因子重现性良好,各成分利用相对校正因子计算的量值与外标法测定值之间无显著差异。结论该方法准确可靠,简便可行,且节约对照品及检测成本,一标多测法可作为参苓白术颗粒的多指标成分测定质量控制方法。

长春瑞滨诱导化疗性静脉炎大鼠模型的构建和评价

目的构建一种经大鼠足背静脉注射长春瑞滨注射液诱导的化疗性静脉炎动物模型及评价体系。方法大鼠随机分为空白组和4个不同浓度长春瑞滨模型组,经后肢足背静脉注射0.1 mL生理盐水设为空白组,其余大鼠则分别注射等体积的2、3、4和5 mg/mL长春瑞滨溶液,每日测量患肢体积并计算肿胀率,连续7 d,末次处死动物取病灶足背静脉组织,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察组织学改变,同时扫描电镜观察内膜表面微观结构变化。结果经足背静脉注射2、3、4、5 mg/mL长春瑞滨溶液可明显诱发大鼠后肢肿胀,且肿胀率随浓度递增而加剧,同时各浓度组均在第3天达峰值;第7天静脉炎分级显示2 mg/mL组50%大鼠成模,3 mg/mL组为83.3%,而4 mg/mL组和5 mg/mL组大鼠100%造模成功,其中4 mg/mL组Ⅲ级为66.6%,5 mg/mL组Ⅳ级占83.3%;HE染色可见静脉周围组织随长春瑞滨溶液浓度增加呈现炎性细胞浸润、管壁增厚、管腔狭窄及血栓,扫描电镜也显示静脉内皮细胞紧密连接破坏,内膜表面粗糙且粘附血细胞。结论经大鼠足背静脉注射0.1 mL的3~5 mg/mL长春瑞滨溶液可见局部红、肿及条索状静脉,甚至皮肤溃烂,静脉周围组织炎性细胞浸润,静脉壁增厚、管腔狭窄及血栓形成,静脉内膜表面粗糙且粘附血细胞,基本符合临床化疗性静脉炎特征。

基于转录组学补肾通络丸经MAPK通路保护软骨细胞的作用

目的探究补肾通络丸(BSTLW)对软骨保护作用的分子机制。方法从新生C57BL/6J乳鼠肋软骨中获得原代软骨细胞,加入不同浓度(0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mg/ml)的BSTLW提取物培养,CCK-8检测细胞活力。将软骨细胞分为BSTLW组和对照组,分别用BSTLW提取物和空白DMEM/F12培养基作用24 h后,提取各组总RNA进行RNA测序和转录组学分析。将差异基因进行GO生物学分子功能富集和KEGG通路富集分析,选择Dusp8、Bdnf、Egf、Fgfr4进行qRT-PCR验证。结果CCK-8检测结果显示,BSTLW能够提高软骨细胞的增殖活性,浓度为0.8 mg/ml时,促进软骨细胞增殖的能力最强(P<0.01)。RNA-Seq分析结果显示,与对照组比较,BSTLW组软骨细胞中差异基因共709个,其中上调344个,下调365个(P<0.01)。KEGG富集分析显示BSTLW对MAPK通路关键因子的调控丰度最高,整体呈下调趋势(P<0.01)。qRT-PCR验证结果提示BSTLW可以抑制MAPK通路中Dusp8、Bdnf、Fgfr4、Egf关键基因的表达(P<0.01),这与RNA-Seq测序结果一致。结论补肾通络丸能够对MAPK通路上Bdnf等多基因进行调控发挥软骨保护作用。

蛇床子素对佐剂性大鼠关节炎模型治疗作用研究

目的:探讨蛇床子素对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用,并对其作用机理进行初步研究。方法:采用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎模型,测量大鼠左后足体积,检测血清TNF-α和IL-10水平,观察大鼠关节滑膜病理改变,对外周血进行T淋巴亚群分析。结果:与模型组比较,蛇床子素高剂量组大鼠左后足体积显著降低(P<0.05);蛇床子素治疗组CD4+/CD8+升高,继发侧关节滑膜表面光滑,血清中炎症相关因子TNF-α和IL-10水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:蛇床子素具有改善佐剂性关节炎的作用,这可能与其具有抗炎作用相关,为研究与开发治疗类风湿性关节炎的药物提供一定的参考。

大鼠脑多梗死性痴呆模型的建立

目的建立大鼠脑多梗死性痴呆（MID）模型。方法从大鼠颈内动脉逆行注入4mg/ml、8mg/ml葡聚糖凝胶微粒。术后24h对大鼠行行为学评分,术后26~30d行Morris水迷宫实验以及尼氏染色。结果 8mg/ml组动物行为学评分显著高于4mg/ml组;后续试验中模型组选取8mg/ml组。水迷宫实验模型组大鼠逃避潜伏期与空白组以及假手术组相比明显延长（P〈0.01）,穿越目标区域的次数明显减少（P〈0.01）。尼氏染色可观察到模型组固缩凋亡的尼氏体。结论葡聚糖凝胶能制备大鼠多梗死性痴呆。

间充质干细胞治疗慢性皮肤溃疡研究进展

慢性皮肤溃疡是一种临床常见难治性疾病,目前尚无有效治疗方法。间充质干细胞是来源于中胚层的一种成体干细胞,具有自我复制和定向分化潜能特点,其可通过旁分泌效应和向类皮细胞分化参与创伤愈合的各个阶段促进慢性伤口愈合。本文针对皮肤创伤愈合机制及慢性皮肤溃疡治疗现状、间充质干细胞生物学特性及其治疗慢性皮肤溃疡的研究等方面予以综述,有助于间充质干细胞治疗慢性皮肤溃疡的基础和临床研究。

靶向血管生成素/酪氨酸蛋白激酶-2(Ang/Tie2)通路的脓毒症治疗药物的研究进展

脓毒症是一种由细菌等病原微生物侵入机体引起的全身炎症反应综合征,常伴有器官功能障碍、组织灌注不良、低血压甚至脓毒性休克。血管功能障碍与脓毒症之间存在明确的关系。血管生成素/酪氨酸蛋白激酶-2(Ang/Tie2)通路可以作为控制炎症、防止血管渗漏药物研发的重要靶点,为脓毒症治疗提供新的可能性。靶向Ang/Tie2通路的脓毒症治疗药物有重组人Ang1腺病毒、Ang1类似物、Ang2抑制剂、重组人Ang2和Tie2激动剂。总结了靶向Ang/Tie2通路的脓毒症治疗药物的研究进展,以期为脓毒症治疗药物的开发提供思路。

中药复方SQQT对胃黏膜解痉多肽表达化生细胞干预作用及其系统生物学机制解析

目的:研究中药复方SQQT对胃黏膜解痉多肽表达化生(SPEM)细胞病理表型的影响,探讨其干预SPEM细胞病理演变的可能效应机制。方法:回顾性分析以SQQT为主方的中药辨证方对临床不同部位胃黏膜癌前病变的干预效果和SPEM细胞分布情况;评估SQQT对小鼠模型SPEM细胞病理表型的影响;利用超高效液相色谱、单细胞RNA转录数据挖掘和网络药理学分析等系统生物学方法构建“成分-靶点”网络图谱,并进行拓扑分析。结果:(1)中药辨证方可有效减轻胃癌前病变患者胃体黏膜萎缩、肠化、异型增生的程度,抑制胃体黏膜基底部SPEM细胞的形成;(2)SQQT可显著降低他莫昔芬复合法诱导的增殖型SPEM小鼠胃体黏膜SPEM细胞数量,并有效抑制SPEM细胞Ki67和CD44v9标记蛋白的异常表达;(3)本研究从复方中共鉴定出27种成分和118个靶点与增殖型SPEM细胞的病理转变密切关联。拓扑分析显示,SQQT主要通过调控细胞能量代谢、核糖体功能、细胞通讯、凋亡信号通路等,影响SPEM细胞的增殖和分化功能。有6种化学成分(柠檬酸、根皮酚、去甲基吴茱萸酰胺、吴茱萸黄碱、橙皮苷和人参皂苷Re)同时参与调节SPEM细胞的线粒体ATP合成电子转运、氧化还原膜转运体活性以及核糖体功能,可能是SQQT调控SPEM细胞病理演变的潜在物质基础。结论:中药复方SQQT通过多种成分对应多个靶点的整体调控作用,实现抑制胃黏膜SPEM细胞异常增殖和分化。