紫花地丁活性成分、药理作用及其在畜禽生产方面的应用前景

紫花地丁作为我国传统的药食同源的多年生草本植物,主治目赤肿痛、疔疮肿毒、乳房炎、毒蛇咬伤的疾病,内含丰富的黄酮苷类、香豆素类化合物,具有抗炎抗菌,抗病毒等多种药理活性。本文主要就近年来国内外对紫花地丁的物质基础及应用于畜禽生产上的研究成果进行综述,为下一步提取紫花地丁有效成分以及用于家禽养殖创新用药的试验研究、开发和利用提供参考依据。

伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立

【目的】为了区分伪狂犬病病毒疫苗免疫猪和自然感染猪,建立快速诊断的方法.【方法】利用PCR方法从伪狂犬病病毒中扩增出糖蛋白E(g E)基因的主要抗原表位区,用Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组表达质粒p ET-g E184,并转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,用纯化后的g E184蛋白作为包被抗原,建立间接g E184-ELISA检测方法.【结果和结论】用该方法检测290份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为93.1%.

伪狂犬病病毒gB基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

为了建立评价伪狂犬病疫苗免疫效果的方法,应用PCR方法扩增gB基因的主要抗原表位区序列,大小为768bp,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pETgB768,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,通过IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白的表达情况及其反应原性。用纯化的gB768蛋白作为包被抗原建立间接gB768-ELISA检测方法,试验结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性、重复性。用该方法检测128份临床送检猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率为93.8%。该方法的建立为猪伪狂犬病疫苗免疫效果的评估奠定了基础。

伪狂犬病病毒EP0基因的克隆及原核表达

为研究伪狂犬病病毒EP0蛋白与病毒粒子中其他蛋白的相互作用,应用PCR方法从伪狂犬病病毒基因组中扩增EP0基因的编码区并克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0;用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因,并将其亚克隆至pGEX-4T-1中,构建带有GST标签的重组质粒pGEX-EP0;重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。结果表明,扩增到EP0基因的编码区序列大小为1 227bp;重组表达菌经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约71.4ku,且能与伪狂犬病病毒EP0单克隆抗体发生特异性反应。该蛋白的成功表达为进一步研究EP0蛋白与宿主细胞及病毒粒子中其他蛋白的相互作用奠定了基础。

伪狂犬病病毒gB蛋白抗原表位基因串联构建及原核表达

本试验通过自行设计两段引物,利用重叠延伸PCR方法,将伪狂犬病病毒(PRV)gB基因两段优势抗原表位序列串联,克隆至pMD18-T载体,测序正确后双酶切连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒;重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白表达情况。经检测,诱导后的重组蛋白获得表达,重组蛋白大小约为54ku,其中串联蛋白大小约为34ku。该重组蛋白可与伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体发生特异性反应,表明重组蛋白的抗原性良好。

裸花紫珠颗粒对罗非鱼源无乳链球菌体外抑菌活性研究

无乳链球菌是导致罗非鱼链球菌病的主要病原菌。为探讨裸花紫珠颗粒对无乳链球菌体外抑菌活性,采用肉汤二倍稀释法测定裸花紫珠颗粒对无乳链球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),同时进行标准无乳链球菌和临床分离无乳链球菌对常用抗菌药的敏感性试验。结果表明,裸花紫珠颗粒对罗非鱼源无乳链球菌的最低抑菌浓度(MIC)为10.000 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为20.000 mg/mL;药敏试验结果显示临床分离株无乳链球菌对四环素、环丙沙星、氟苯尼考的敏感性降低。该结果为下一步开展裸花紫珠对罗非鱼临床保护试验研究奠定了基础。

伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析

为了研究伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）立即早期180基因（immediate early 180，IE180）及其功能，试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增，并成功构建了IE180克隆载体，经序列测定后，用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明，HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp，编码1474个氨基酸，与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%～99.1%,氨基酸同源性为97.8%～98.4%。系统进化树分析结果表明，该毒株与毒株TNL（登录号：AF352564.2）的亲缘关系较近。

猪伪狂犬病病毒新流行株主要糖蛋白的分子特征分析

【目的】进一步了解猪伪狂犬病毒新流行株的遗传特征。【方法】对从安徽某猪场分离的1株猪伪狂犬病病毒(PRV)AH株进行遗传进化分析及主要糖蛋白gB、gC、gD、gE的序列分析。【结果】PRV AH株与国内2011年以来的流行毒株非常相似,但与Bartha株及其他国外毒株遗传关系较远;国内流行毒株与Bartha株及其他国外毒株相比,其主要糖蛋白均存在明显的连续氨基酸的缺失和插入,且部分突变位点位于这些糖蛋白的重要功能区。【结论】从分子水平上解析了PRV新流行株与疫苗株Bartha株的遗传差异,为进一步深入研究Bartha株疫苗免疫失败的原因提供了理论依据。

裸花紫珠颗粒对靶动物犬血液生理生化指标的影响的研究

为研究裸花紫珠颗粒对靶动物犬血液生理生化指标的影响,该文将20只犬(中华田园犬)按完全随机方法分成4个组,每组5只,分别为第1组(空白对照组)、第2组(裸花紫珠颗粒0.1 g/kg·bw)、第3组(裸花紫珠颗粒0.3 g/kg·bw)、第4组(裸花紫珠颗粒0.5 g/kg·bw),采用口服给药的方法,每天给药1次,连续给药10 d,在试验期间观察试验犬临床体征表现,并评价不同剂量裸花紫珠颗粒对试验犬的体重和血液生理生化指标的影响。结果显示,试验犬口服不同剂量裸花紫珠颗粒连续10 d,临床体征表现正常,未见明显的影响,犬只血液生理生化指标与空白对照组相比无显著差异(P>0.05)。结果表明,裸花紫珠颗粒对试验犬只的临床体征、体重和血液生理生化指标无明显影响,安全性较好。

基于STM32和ZigBee的水产养殖水质监测系统设计

针对水产养殖水质监测操作复杂、监测周期长、监测参数单一等问题,设计了一套基于STM32和ZigBee的水产养殖水质参数监测系统。该系统主要由STM32F103微控系统、ZigBee无线通讯模块、多路传感器模块、信号调理模块、显示模块、蜂鸣器报警模块、按键模块和电源模块等组成,能够同时实现采集、传输,显示水体温度、酸碱度、溶解氧和氨氮,以及异常报警等功能。测试结果表明,该系统运行稳定、安全可靠,实用价值极高。

裸花紫珠提取物对鸡源大肠杆菌的体外抑菌效果

为研究裸花紫珠提取物对鸡源大肠杆菌体外抑菌试验,采用牛津杯法和肉汤二倍稀释法测定裸花紫珠提取物抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,裸花紫珠提取物对大肠杆菌属于中度敏感,平均抑菌圈直径为16 mm,最小抑菌浓度(MIC)为32.0 mg/mL。试验结果表明,裸花紫珠提取物对鸡源大肠杆菌具有良好的抑菌效果,为下一步动物试验研究裸花紫珠提取物在动物肠道内抑菌作用提供参考。

饲料中霉菌毒素对猪免疫系统的影响

一直以来霉菌毒素严重影响着我国饲料行业发展,给畜牧业发展带来巨大损失,针对当前霉菌毒素广泛存在并影响畜牧业健康发展的情况下,从霉菌毒素对动物机体免疫系统造成损害的机理、造成疫苗免疫失败现象及霉菌毒素预防等方面进行阐述。

现代化养殖模式下的人工授精技术

人工授精技术具有降低疾病传播、共享优质基因、提高繁殖性能、降低公猪饲养成本等显著优势,在现代化养殖模式下可大范围的推广应用。本文旨在阐述现代化养殖模式下的人工授精技术,比对不同的人工授精方法对母猪繁殖性能的影响,并针对影响人工授精的主要因素进行简要概述。

黏膜免疫在疫苗中的应用

黏膜免疫系统是动物机体免疫系统中的重要组成部分,主要包括肠道黏膜免疫和呼吸道黏膜免疫。近年来随着畜牧业快速发展,传统疫苗免疫方式弊端愈发明显,黏膜免疫方式在疫苗接种中应用越来越广泛,本文阐述了黏膜免疫在猪用疫苗和禽用疫苗上的应用,并提出影响黏膜免疫的因素及未来黏膜免疫和中兽药配合应用的发展前景。

鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验

研究2株分离自广东博罗地区某养鸡场和梅州地区某养鸡场的鸡源大肠杆菌进行分离鉴定和药物敏感试验,根据细菌培养特性试验与分子生物学的鉴定,确定分离菌株为鸡源性大肠杆菌并分别命名为ECGD2010-1株和ECGD2010-2株。对分离鉴定所得菌株进行红霉素、青霉素、氨苄西林、头孢唑林、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、氯霉素、庆大霉素和丁胺卡那霉素的药物敏感试验。结果显示,ECGD2010-1株高度耐药,仅对庆大霉素和丁胺卡那霉素敏感;ECGD2010-2株除对氨苄西林耐药外,对其他抗生素均表现出高度敏感。

猪伪狂犬病活疫苗Bartha-K61株对流行毒株的免疫效力研究

本研究通过对不同的免疫剂量免疫仔猪和母猪免疫后所产仔猪进行攻毒,以评估该疫苗对伪狂犬病毒(PRV)流行强毒株的保护效果。取3~4周龄PRV抗体阴性仔猪,以106.0组织半数感染量(TCID50)、106.5TCID50、107.0TCID50剂量接种猪PRV活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源),免后10d连同条件的对照组和母源抗体阳性组用PRV流行强毒(GD株)攻毒,检测免疫后的抗体水平,记录攻毒后的体温、临床症状和病理变化。结果显示:免疫组试验猪在免后7dPRVgB抗体均转阳;各种剂量免疫组和母源抗体阳性组试验猪在PRV流行强毒攻击后,均未出现临床症状和病理变化,而对照组则出现明显的神经症状,体温升高,发病率100%(5/5),死亡率80%(4/5),剖检可见肝脏有白色坏死点和脑充血水肿。研究表明高病毒滴度的猪伪狂犬病活疫苗(BarthaK61株,传代细胞源)免疫猪后可对PRV流行强毒株提供良好的免疫保护。

仔猪猪瘟母源抗体的消长规律及免疫程序制定

选择广东梅州地区3个规模化猪场A、B、C场,通过采用ELISA抗体检测法对产后母猪进行0、7、14、21 d猪瘟抗体检测,对新生仔猪进行0、1、7、14、21、28、35、42、49日龄猪瘟母源抗体检测,研究其消长规律,据此确定仔猪的首免日龄,通过二免后免疫效果的观察,制定有针对性的免疫程序。结果表明:未吃初乳的0日龄仔猪无母源抗体,7日龄仔猪母源抗体较高,之后逐渐降低,A猪场猪瘟母源抗体对21日龄仔猪仍有保护,随后母源抗体水平骤减;B猪场和C猪场猪瘟母源抗体对35日龄仔猪仍有保护,随后母源抗体水平骤减;而且母源抗体对仔猪保护持续时间和母猪自身的抗体呈正相关。确定3个猪场不同的首免时间,首免后30 d进行二免,其较高的免疫抗体水平可以维持到二免后4个月,因此生产中建议应根据科学的监测跟踪依据,制定合理的首免日期,以有效保护仔猪免受猪瘟的威胁。

芪楂口服液对黄羽肉鸡新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影响

为了研究芪楂口服液对鸡新城疫(ND)和禽流感疫苗(AI)的效果,本试验采用完全随机法将6000只1日龄快大黄羽肉鸡随机分成两组,分别为对照组和试验组,试验组分别在1~10,15~21,29~35,43~49日龄时按照0.2 mL/只在饮水中添加芪楂口服液,各组鸡只在7日龄时皮下注射鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗,15日龄时皮下注射重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗,在免疫后18,28,38,48天分别测定鸡只平均体重、血清IgA含量、外周淋巴细胞增殖情况和HI抗体水平。结果表明:在免疫后28,38,48天时,试验组鸡只平均体重显著高于对照组(P<0.05);在免疫后38,48天时,试验组鸡只血清IgA含量显著高于对照组(P<0.05);在免疫后18,28,38,48天时,试验组鸡只外周淋巴细胞OD570 nm值与对照组相比差异显著(P<0.05);免疫后试验组鸡只血清ND和AI􀆼H9抗体水平差异不显著(P>0.05),但在免疫后38,48天时,血清AI-H5抗体水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。结果表明不同饲养阶段,在饮水中添加芪楂口服液对细胞免疫应答功能具有显著提升作用,显著提高血清IgA含量,促进外周淋巴细胞增殖,促进鸡只生长。

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)最小免疫剂量的研究

为了确定猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的最小免疫剂量,本研究将3批猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)分别稀释成10TCID_(50)/mL、102.0TCID_(50)/mL、103.0TCID_(50)/mL,每批疫苗各个稀释度分别免疫仔猪1.0 mL/头,并设攻毒对照组和阴性对照组。免后10 d连同攻毒对照组用伪狂犬病病毒GD1株进行攻毒保护试验,阴性对照组不攻毒。结果表明,10TCID_(50)/头和102.0TCID_(50)/头的免疫剂量在免疫后10 d依然无法提供完全的免疫保护,保护率为20%～80%(1/5～4/5);103.0TCID_(50)/头的免疫剂量能够保护仔猪抵抗PRV强毒的攻击,保护率为100%(5/5);攻毒对照组发病率为100%(5/5),死亡率为80%(4/5);阴性对照组全部健活。由此确定猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)最小免疫剂量为103.0TCID_(50)/头。

水提工艺对裸花紫珠主要有效成分的影响

本文主要进行水提工艺对裸花紫珠主要有效成分的影响研究,在考察料液比、煎煮次数对木犀草苷和毛蕊花糖苷含量影响的基础上,设计正交试验,研究裸花紫珠最佳水提工艺。试验结果表明,料液比对木犀草苷和毛蕊花糖苷含量无显著影响(P>0.05);煎煮次数对木犀草苷和毛蕊花糖苷含量的影响显著(P<0.05),其中煎煮次数为3次时提取液中毛蕊花糖苷和木犀草苷的含量最高。正交试验结果表明,提取次数对毛蕊花糖苷和木犀草苷含量的影响最大,其次是提取时间,料液比对其的影响最小,最佳水提工艺为14倍水提取3次,每次1小时。