具有分离功能的生物反应器

在生物工程的领域中,生物反应器是着重研究的内容之一。由于它利用了生物催化剂优良的功能,使它在很多方面不同于化工中使用的反应器,从而成为一个独立的部分;

葡萄糖传感器及其应用

着重阐述了二种固定化酶膜的制备方法:一种是明胶包埋的固定化葡萄糖氧化酶膜;一种是白蛋白共交联的固定化葡萄糖氧化酶膜。介绍了葡萄糖传感器在临床血糖测定、发酵工业中葡萄糖含量测定、油菜籽中硫代葡萄糖甙测定上的应用。

利用重组Pichia pastoris生产腺苷甲硫氨酸

为改造甲醇利用型酵母Pichiapastoris来生产腺苷甲硫氨酸 (SAM ,S adenosyl L methionine) ,我们将一个带有SAM合成酶基因的胞内表达质粒转化入Pichiapastoris菌株GS115 ,经过G418抗性筛选得到一株有两个基因拷贝的转化子。该菌在含有甲醇和甲硫氨酸的培养基中生长 5d后 ,其细胞内的SAM的产量比原始菌株提高了 30余倍。对该菌生产SAM的培养基中的碳源与氮源进行了优化 ,结果显示碳源的控制对该菌SAM产量的影响很大。在试管水平 ,该菌在含有 0 .75 %的L methionine并且碳源和有机氮源经过一定程度优化的培养基中 ,生长 6d后SAM产量达到 1.5 8g L。

人p53蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

将人ｐ５３ 基因装入 Ｐｉｃｈｉａ 分泌型质粒ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ１ 中，酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合，经筛选得到一高表达ｐ５３ 蛋白的克隆。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示表达量约占分泌总量的３０ ％ 。 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 验证重组人ｐ５３ 存在免疫学活性。在诱导时就降低 Ｐｉｃｈｉａ 酵母系统水解酶活力等方面进行优化，经 Ｆ Ｐ Ｌ Ｃ 分离纯化得到约２００ ｍ ｇ／ Ｌ 表达量。

壳聚糖微囊的部分特性研究

以壳聚糖为主要材料，制备壳聚糖微囊。微囊直径在０．５～０．８ｍｍ间，微囊在ｐＨ４～１１的缓冲液中稳定，能耐受３０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ以上。用牛血清白蛋白和γ－球蛋白测其通透性，表明随着微囊所在溶液ｐＨ的升高，微囊通透性降低。壳聚糖的分子量在一定范围内对微囊通透性几乎无影响而脱乙酰度对通透性影响很大。升高壳聚糖的脱乙酰度，微囊通透性明显降低，而其机械强度无明显变化。用该微囊固定化丝孢酵母细胞，结果酶活力回收达８０％以上，操作半衰期达２．５～３月。

蛹皮壳聚糖的制备及其用作酶固定化载体的研究

利用换碱洗脱法，可以从蚕蛹皮中提取到较高分子量的白色养壳聚糖，脱乙酰度送９１％以上；经Ｈ２Ｏ２降解，可制备从４．３１＊１０＾４－１．３２＊１０＾６间不同分子量的壳聚糖；不同分子量的壳聚糖可以制成相 的适宜载体用于酶的固定化，所得固定化酶具有较高的活力和国产好的操作稳定性。

甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶

表达有活性的辣根过氧化物酶（ＨＲＰ） 不仅可以深入揭示ＨＲＰ 结构与功能及其生理作用规律， 而且为ＨＲＰ的广泛需要提供新的来源． 为了在甲醇酵母Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ 中成功表达， 将编码ＨＲＰＣ成熟肽的ｃＤＮＡ 构建到ｐＰＩＣ９ 上， 再转化到Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ 中， 筛选到了分泌表达非糖基化ＨＲＰ 和高糖基化ＨＲＰ（ 分子质量超过１００ ｋｕ） 两种主要产物的重组细胞株． 优化表达条件， 目标产物在摇瓶发酵液中高效表达， 可达４～６ ｇ／Ｌ． 并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化ＨＲＰ， 每毫升发酵液中酶活力约有２ Ｕ， 经初步的纯化ＨＲＰ具有最大吸收峰４０３ ｎｍ ．

壳聚糖的脱乙酰度、分子量和浓度对微囊制备和特性的影响（英文）

用不同规格的壳聚糖与海藻酸钠和羧甲基维素钠制备了各种微囊．研究了壳聚糖的脱乙酰度、分子量及溶液浓度对微囊形成和特性的影响．确定了微囊制备的最佳参数，并发现壳聚糖的分子量在一定范围内对微囊通透性无影响而脱乙酰度显著地影响微囊通透性．降低壳聚糖的脱乙酰度可明显增加微囊的通透性，而不影响微囊机械强度．这种微囊制备方法简便、通透性可调。

辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

无论从应用还是从理论研究角度，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是一种非常重要的酶．ＨＲＰ基因克隆与表达将有利于更深入研究ＨＲＰ的结构与功能．利用反转录ＰＣＲ从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶Ｃ（ＨＲＰ－Ｃ）一个ｃＤＮＡ，并测定其序列．结果发现，从基因推导出的氨基酸序列与Ｗｅｌｉｎｄｅｒ报道的辣根过氧化物酶序列有９０．６％的同源性．将该基因连接到表达载体ｐＥＴ－２４ｂ上，利用抗ＨＲＰ多克隆抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，检测有少量目标产物表达．在诱导表达过程中。

固定化酵母不对称水解布洛芬乙酯制备S（＋）－布洛芬

用多种固定化载体对含有不对称水解布洛芬酯的脂肪酶的丝孢酵母进行固定化。海藻酸钙、卡拉胶、聚丙烯酰胺凝胶和ＰＶＡ固定化酵母后，酶活力回收分别为６％、１６％、１８％和７％；用自制的高脱乙酰度、高分子量的壳聚糖，通过成囊装置包埋酵母细胞，并用戊二醛交联，制得直径１．０ｍｍ左右的固定化酵母细胞壳聚糖多孔微球，酶活力回收达８０％以上，操作半衰期７５天以上，而且每次反应所产生的布洛芬的比旋光度均为［α］２０Ｄ＝＋５５°左右。固定化酶的最适温度从未固定化时的３５℃提高到４５℃。每克干重的壳聚糖可固定化１～５倍干重的酵母，固定化壳聚糖微球有较高机械强度。

醋酸纤维素膜为基础的葡萄糖生物传感器的研制

采用共价法将酶固定在醋酸纤维素膜上,方法简便易行,制造的酶膜稳定,比活力高。同时采用该方法制备了葡萄糖氧化酶酶膜,与氧电极组装成测定葡萄糖的生物传感器,线性范围为50～800mg/dl,仪器工作的最适pH为6.0,最适温度为40℃。将该膜与过氧化氢电极组装得到的传感器具有以下特性:线性范围为10～200mg/dl,最适pH为6.0,测定结果与酶试制盒有良好相关性。

丝素蛋白膜作为葡萄糖氧化酶载体的研究

采用戊二醛共价交联法将葡萄糖氧化酶（GOD）固定在丝素膜上，探讨了酶的固定化方法，研究了固定化酶膜的动力学性质，并与包埋法制备的酶膜进行了比较。共价法可获得高活力的酶膜（534u／cm2），固定化过程中使用甲醇或戊二醛处理对酶活力有轻微影响。固定化GOD最适pH值向中性偏移（pH7．0），最适温度为50℃，热稳定性提高，表观米氏常数比溶液酶降低，酶膜的贮存稳定性良好。

在甲醇酵母Pichia pastoris胞内表达有活性的辣根过氧化物酶

为了开辟在甲醇酵母 Pichia pastoris中表达 HRP的新途径 ,将编码成熟 HRP同功酶 C基因克隆到表达载体 p PIK3.5K中 .p PIK3.5KHRP转化 GS1 1 5后 ,用 PCR筛选阳性 P.pastoris重组株 ,并用甲醇进行诱导 . Western印迹杂交分析表明目标蛋白 (约为 38k D)能被天然 HRP的多克隆抗体所识别 ,因此活性辣根过氧化物酶已在 P.pastoris胞内表达 .筛选菌株中显示了明显的过氧化物酶活性 ,同时诱导过程中血红素和 Ca Cl2

蛹皮脱乙酰几丁质作为微囊材料的研究

利用低分子量的脱乙酰几丁质可取代聚-L-赖氨酸制作做囊，所得脱乙酰几丁质微囊与聚赖氨酸微囊相比有相似的优红蛋白通透性和较强的机械强度。脱乙酰几丁质微囊能包埋葡萄糖氧化酶而不使之逸出。脱乙酰几丁质的脱乙酰度、分子量、浓度和复膜时间及溶液的pH值对微囊的通透性有一定的影响，以分子量的影响最大。

Al_2O_3-脱乙酰几丁质作为酶固定化载体的研究

Al2O3作核心的脱乙酰几丁质颗粒可用作酶固定化的载体。观察了脱乙酰几丁质的浓度、脱乙酰度和分子量对酶的固定化的影响。发现以浓度为2．0％、脱乙酰度为85．0％、分子量为1．34×106d的脱乙酰几丁质制得的载体用于固定化酶效果最好。所得固定化GOD具有较高的固定化酶活力、热稳定性和工作稳定性。

丝素蛋白葡萄糖氧化酶膜的储存稳定性

以共价交联法将葡萄糖氧化酶固定化在丝素蛋白膜上，探讨丝素酶膜在不同体系下的储存稳定性。研究结果表明：糖醇类小分子物质（乳糖、肌醇、甘露醇）和聚乙二醇、牛血清白蛋白等大分子物质组成的混合体系对酶膜存在着明显的稳定作用，聚乙二醇、牛血清白蛋白、乳糖等单一体系也能降低酶膜在储存过程中的失活作用。其中牛血清白蛋白＋肌醇＋赖氨酸这一体系稳定作用最为显著，７８ｄ储存后酶膜仍能保持原来活力的９２．１％（４℃）、８２．１％（室温）

虫萤光素酶固定化及其传感器

本文比较了戊二醛法，环氧法、重氮法和ＣＮＢｒ活化等方法固定虫莹光素酶，发现ＣＮＢｒ活化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ后固定该酶的交果最佳．获得较高比活性（７５０ｕ／ｇ）和良好稳定性的固定化虫萤光素酶．我们构建了一套利用光纤传导的虫萤光素酶的测活装置；并以ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ固定化酶为核心建成光纤生物传感器和柱式流动分析装置．可测定１０－１１～１０－８ｍｏｌ／ｍｌＡＴＰ．

葡萄糖生物传感器的研制

将葡萄糖氧化酶以共价连接法固定于醋酸纤维素制成的ｌ薄膜上，将酶膜紧贴于极谱式氧电极表面，制成可对葡萄糖进行定量测定的葡萄糖传感器。该传感器测定范围５０～８００ｍｇ／ｄｌ，响应时间１０ｓ，相关系数ｒ１０＝０．９９８，ＣＶ＜３％。

丝素蛋白葡萄糖氧化膜在FIA系统的应用研究

以家蚕丝素蛋白为载体 ,共价交联法制得葡萄糖氧化酶膜后组成酶电极 ,并引入到流动注射分析系统 (FIA)中 ,FIA系统测定葡萄糖的线性范围在 0 - 2 0 .0 mol/ L,样品分析速度为80份 /小时 ,酶膜使用寿命超过 30 0 0次 ,系统的准确性和抗干扰能力也得到了研究 。

胃蛋白酶的固定化及其在亲和层析法提纯Pepstatin上的应用

胃蛋白酶(pepsin)是人们较早认识(Spallanzani 1783)并命名(Schwann,1825)的单纯酶,在脲酶以后第二个得到了该酶的结晶。胃蛋白酶是胃液中的主要酶。