认知图式理论视角下的旅游资料翻译

试图运用认知图式理论来探索旅游资料翻译研究,主要探讨认知图式理论在文本处理过程中的作用机制,分析认知图式理论视角下旅游资料翻译过程中译者的角色和翻译策略的选择。本文根据旅游资料翻译的特点,从语言图式、内容图式和形式图式三方面例证了认知图式理论对旅游资料翻译的作用,以期为提高旅游资料翻译寻找新的视角和途径。

共振光散射法可直接表征蛋白质的溶解度

目的建立一种快捷、灵敏、成本低的蛋白质溶解度的共振光散射(RLS)表征方法,用于蛋白质突变体溶解度比较。方法同步扫描模式下,跟踪RLS信号强度对蛋白浓度的响应,根据响应曲线拐点预测蛋白质相应分散状态的最大浓度,据此定义该状态的溶解度。选择牛血清白蛋白(BSA,0~50.0 g/L),考察pH(6.5、7.0、7.4)、盐离子浓度(0.05、0.10、0.15、0.20 mol/L)对溶解度测定值的影响;并测定谷胱甘肽S-转移酶同工酶alpha(GSTA,0~27.0 g/L)、Mμ(GSTM,0~20.0 g/L),考察方法通用性。应用RLS测定季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶(MGU,0~0.4 g/L)溶解度并指导其突变体溶解度改进。结果所测蛋白质RLS响应曲线均出现两个拐点,低浓度拐点可近似蛋白质单分子分散状态的最大浓度,而高浓度拐点近似蛋白质多分子聚集状态的最大饱和浓度即热力学平衡溶解度。BSA(等电点4.6)两个拐点均随pH的增大(6.5~7.4)而增高,pH7.4 HEPES缓冲液中分别对应~1.2 g/L、~33 g/L,后者与相同条件下商品溶解度接近;加入NaCl使两个浓度拐点均降低,初步表明RLS可直接表征蛋白溶解度。GSTA、GSTM的RLS响应曲线低浓度拐点为~0.7 g/L,~0.8 g/L,高浓度拐点分别为~10 g/L、~11 g/L,均小于BSA,方法有通用性。MGU两个拐点分别对应0.24 g/L和0.30 g/L,而其突变体溶解度提高约2倍。结论共振光散射法可直接表征蛋白质溶解度,且简便、灵敏,蛋白用量少,尤其适用于表达丰度低的蛋白质突变体溶解度的快速比较。

兼性离子修饰亲水磁珠固定化谷胱甘肽-S-转硫酶P1及其表征

谷胱甘肽-S-转硫酶P1(Human glutathione-S-transferaseπ1,h GSTP1)为肿瘤耐药增敏药靶。为探索磁珠固定化h GSTP1的合适方案用于磁分离指数富集从混合物中筛选高亲和力配体,重组表达6×His-h GSTP1,分别用Ni^2+-NTA琼脂糖和GSH-Sepharose 4B层析柱纯化,采用亲水兼性离子修饰的羧基磁珠和Ni^2+-NTA磁珠固定化6×His-h GSTP1,表征其固定化容量、保留活性、稳定性以及对抑制剂响应性。羧基磁珠不能有效固定GSH-Sepharose 4B层析柱纯化h GSTP1,可有效固定Ni^2+-NTA层析柱纯化h GSTP1,但最大保留酶活仅约30%。Ni^2+-NTA磁珠可有效固定两种方法纯化蛋白,其饱和固载容量约为羧基磁珠的1.7倍且最大保留酶活均可达80%。Ni^2+-NTA磁珠固定化h GSTP1在pH 6.5 PBS中0℃振摇8 h活性未见明显改变,相同条件游离酶活性下降约20%;在筛选后甲醇80℃处理20 min不脱落。Ni^2+-NTA磁珠固定化h GSTP1和游离酶对抑制剂依他尼酸(Ethacrynic acid,EA)的IC50无显著性差异(P>0.05)。因此,Ni^2+-NTA磁珠固定化h GSTP1可适用于指数富集筛选混合物库中抑制剂。

双依他尼酸乙醇胺对谷胱甘肽S-转硫酶mu的选择性抑制作用

谷胱甘肽S-转移酶(GST)的同工酶mu (GSTM)高表达与卵巢癌顺铂耐药有关。以GST非选择性抑制剂依他尼酸设计二价潜抑制剂双依他尼酸乙醇胺(aminoethanol di-ethacrynic acid, ADEA),测定ADEA及其与还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)加合物对GST同工酶亚型A1、P1、M2的半抑制浓度(IC50)、抑制类型、结合比和结合动力学。ADEA本身对GSTM2的IC50比GSTA1低300倍,比GSTP1低3 000倍;ADEA与GSH在酶催化下反应10 min所得产物,对上述3种同工酶的IC50分别降低5、57、200倍。ADEA本身和产物对GSTM2相对于底物CDNB是反竞争性抑制剂,ADEA本身对GSTM2相对于底物GSH是混合性抑制剂,ADEA与GSH产物对GSTM2相对于底物GSH是反竞争性抑制剂。分析ADEA对GSTM2荧光静态淬灭表明ADEA及其产物是二价结合;分析荧光和酶活性随时间变化表明酶与ADEA本身结合速度比其产物CDNB慢10倍。ADEA是有效的GSTM2选择性二价潜抑制剂。