华中部分地区发病猪群血清样品PCV-2病原学检测

为探究华中地区临床发病猪群猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV-2)感染状况及特点,2018—2019年,从湖北省的武汉、随州、咸宁、荆州,湖南省的常德、衡阳、汨罗、株洲等8个地市的40个规模化猪场,采集临床发病猪群血样1 550份,利用本实验室建立的巢式PCR诊断技术进行PCV-2病原学检测,并采用SPSS 24.0卡方检验,对结果进行不同地区、不同养殖阶段、不同季节统计分析,同时追踪与其他繁殖障碍性疾病病原的混合感染情况。结果显示:湖南、湖北两省8个地区发病猪群的PCV-2平均检出率为31.68%(491/1550),所有检测地区均有不同程度的PCV-2感染,病原检出率在8.79%~49.01%之间波动,差异显著(P <0.05);不同养殖阶段发病猪群均有PCV-2阳性检出,检出率在12.17%~60.84%之间波动,差异显著(P <0.05),其中育肥猪和保育猪检出率较高,而哺乳仔猪、经产母猪和后备猪偏低;PCV-2一年四季均有检出,检出率在5.98%~49.81%之间,但有一定的季节性,夏冬季节检出率偏高,而春秋季节偏低(5.98%),差异显著(P <0.05);PCV-2和其他繁殖障碍性疾病病原的多重感染较为常见,其中以PCV-2+PRRSV双重感染和PCV-2+PRRSV+PRV三重感染为主,而四重以上感染较为少见。结果表明,湖南、湖北两省的PCV-2病原分布较为广泛,是导致该区域猪群发病的重要病因,但其流行有一定的地区、猪群和季节差异。建议加强高流行地区、高发季节、重点猪群的免疫、检测和生物安全管理,逐步控制和净化PCV-2。本研究初步了解了华中地区PCV-2的流行特点,为其流行控制和净化制定提供了参考。

一株变异型猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的免疫效力试验

本研究旨在分离猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株,通过悬浮培养工艺制备成高效价的PEDV灭活疫苗。2017年从中国多个规模化猪场采集腹泻病死仔猪的小肠及其内容物200份,通过RT-PCR方法进行PEDV检测并测序,筛选一株PEDV变异株,将其在2 L反应器里悬浮培养的Vero细胞上进行病毒分离与传代培养,收获的病毒液鉴定后测定TCID50,经甲醛灭活后加入氢氧化铝胶佐剂配制成PEDV灭活疫苗,对其物理性状、稳定性、黏度、无菌等进行检验,检验合格后免疫妊娠母猪及所产仔猪,对其安全性和免疫效力进行研究。结果显示,200份病料中有86份为PEDV阳性,将筛选的PEDV变异株病料在Vero细胞上传至第5代时出现细胞病变,传至第10代收获病毒液,经鉴定后确定为PEDV变异毒株,并命名为PEDV-GF10株。收获的病毒液浓缩后测得病毒滴度可达1×108.0 TCID50/mL。疫苗检验合格后在母猪产前40和25 d时试验组后海穴肌内注射4 mL疫苗,空白组不免疫,结果显示试验组与空白组母猪的生产情况无明显差异,所产3日龄仔猪分别免疫不同剂量后体温无显著差异,表明该疫苗对母猪和仔猪均安全性良好。随机挑选试验组与空白组母猪所产3日龄仔猪各20头,分别口服4 mL PEDV-F10病毒培养物,空白组母猪所产仔猪在攻毒24 h后PEDV发病率为100%,抗体均为阴性;试验组母猪所产仔猪只有10%出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达90%保护率,且仔猪被动免疫后抗体能持续至35 d以上。以上结果表明,PEDV-GF10变异株通过悬浮细胞培养后病毒滴度显著提高,研制的PEDV-GF10株灭活疫苗安全有效,能够对中国的PEDV变异株达到有效防控,为国内PED防控提供了理论依据。

湖北地区猪细小病毒流行病学调查

[目的]探究猪细小病毒在湖北省的流行情况。[方法]2018—2019年,从湖北省荆州、随州、黄冈、恩施、咸宁5个地区的规模化猪场收集出现繁殖障碍症状和有繁殖障碍史猪群的病料共1407份,采用巢式PCR法和PCR检测试剂盒进行检测,并分析PPV阳性率与不同地区、年龄段及季节之间的感染差异,最后对PPV阳性样品进行猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)3种猪繁殖障碍性疾病的检测。[结果]1407份样品中,巢式PCR法检出率为16.70%(235/1407),PCR检测试剂盒的检出率为16.35%(230/1407),2种检测方法的符合率为97.87%(230/235)。湖北各地区均有不同程度的感染,其中恩施地区的阳性率最高,为30.48%(57/187);其次为咸宁、黄冈、荆州地区,阳性率分别为20.60%(62/301)、17.41%(47/270)、14.04%(33/235);随州地区阳性率最低,为8.70%(36/414)。对不同年龄段猪群的检测结果表明,育肥猪的阳性率最高,为30.95%(65/210);其次为后备猪和初产母猪,阳性率分别为17.97%(78/434)、15.71%(55/350);经产母猪、0~30日龄仔猪的阳性率分别为9.05%(21/232)、8.84%(16/181)。PPV一年四季均流行,但春季(23.14%,121/523)和秋季(17.39%,68/391)是PPV感染的高峰期,而夏季(11.04%,33/299)和冬季(6.70%,13/194)感染率较低。PPV与其他繁殖障碍性疾病二重感染(42.13%,99/235)和三重感染(11.49%,27/235)较为常见,其中与PRRSV二重感染(21.70%,51/235)最为严重,三重感染以PPV+PRRSV+PCV2(5.53%,13/235)较多,四重感染在此次采集的样品中未检测到。[结论]该研究对湖北省PPV的流行情况及特点进行了调查,为PPV的防控提供了参考数据。