新疆牛羊布鲁氏菌流行株种及生物型鉴定

【目的】掌握新疆畜间布鲁氏菌病流行株的流行病学特征,为新疆制定切实可行的布鲁氏菌病综合性防控措施提供科学依据和技术支撑。【方法】应用传统分离病原方法从牛羊病料中获得疑似布鲁氏菌11株,应用分子生物学方法对分离菌株进行布鲁氏菌属与种型鉴定,应用常规生化试验对AMOS-PCR鉴定的羊种Brucella进行生物亚型鉴定。【结果】9株分离株均为布鲁氏菌,而且经AMOS-PCR分型方法鉴定均为羊种菌。进一步采用传统细菌分类鉴定,9株布鲁氏菌均为羊种生物3型。【结论】新疆近两年人感染布鲁氏菌的流行菌株为羊种生物3型,应用AMOS-PCR方法可以安全、快速对布鲁氏菌流行株进行种型鉴定而确定传染源,为新疆制定布鲁氏菌病的综合防制策略莫定基础。

牛乳样品中布鲁氏菌的分离和鉴定

为进一步改良布鲁氏菌(Brucella)的分离和鉴定方法,本研究于2010年～2012年对新疆部分奶牛场进行Brucella病的监测,采用改良Brucella选择添加剂培养分离的方法,从试管凝集试验(SAT)检测阳性的25头奶牛的牛乳样中分离到9株分离菌,经VirB8-PCR方法扩增Brucella的VirB8基因对分离株进行鉴定,结果表明9个分离株均为Brucella。同时采用Brucella分子分型PCR及生物学分型方法进一步対分离株鉴定,结果显示其中7个分离株为牛3型,另外2个分离株为羊3型。本研究为奶牛Brucella病的检疫与防控提供了快速分离及鉴定方法。

布鲁菌病研究进展

布鲁菌病是目前世界上流行最广、危害最大的人兽共患病之一,在全世界170多个国家和地区有人、畜布鲁菌病存在和流行。我国25个省(市、区)有人、畜布鲁菌病存在和流行。随着畜牧业的快速发展,布鲁菌病在多数疫区明显有回升趋势。2005年全国新发病19 664人,发病率为1.504/10万,超过历史最高记录。布鲁菌是细胞内寄生的革兰氏阴性菌,主要引起人的波状热和慢性感染以及动物睾丸炎和流产等,直接危害公共安全,造成严重的经济损失。近年来从多种海洋哺乳动物(海豹、海豚、鲸等)中也分离出布鲁菌。通过DNA同源性比较,发现海洋与陆地哺乳动物布鲁菌DNA的同源性高达90%以上。随着分子生物学的发展,对布鲁菌分子结构的研究不断获得新的发现,为进一步认识和控制布鲁菌病提供了可能。文章从布鲁菌病流行的历史与现状、布鲁菌的抗原分子生物特性、布鲁菌病的检测方法和布鲁菌病疫苗的现状等方面对布鲁菌病的研究进展做了介绍。

布鲁氏菌分离株MLVA分子分型鉴定

目的对牛奶、羊奶以及羊流产胎儿中分离布鲁氏菌进行分型鉴定。方法采集新疆4个地区牛奶20份,羊奶20份,羊流产胎儿10份,分离培养后,运用VirB8-PCR和布鲁氏菌分子分型PCR(AMOS-PCR)方法对分离株进行布鲁氏菌属、种的鉴定,同时采用MLVA方法对分离株进一步鉴定,并将测定结果与http://mlva.u-psud.fr/数据库提供的布鲁氏菌数据进行比较,结合软件BioNumerics 6.6进行聚类分析。结果 6株分离株均为羊种3型布鲁氏菌,与辽宁省分离羊种3型布鲁氏菌在聚类分析中关系较近。结论 MLVA作为布鲁氏菌基因分型鉴定的一种快速、可靠的方法,为今后布鲁氏菌传染源的追溯及防控措施的制定提供依据。

猪繁殖与呼吸综合征新疆株ORF2-7基因的克隆及序列分析

[目的]研究新疆PRRS流行毒株的ORF2-7基因的变异及进化情况,为揭示PRRSV在新疆的流行特点提供参考,为新疆PRRS的防控提供理论依据.[方法]将新疆某规模化和散养户猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的猪肺脏病料进行处理,提取病毒RNA,应用PT-PCR技术扩增出4株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF2-7基因序列,并进行序列测定.[结果]PRRSV ORF2-7基因核苷酸长度为3 206bp.序列分析表明,新疆分离株XJTK-02株、XJERG-03株、XJ-04株和XJFCH-05株之间核苷酸的同源率较高,为90.3％～98.6％;XJTK-02株与经典PRRSVCH-1a株核苷酸同源率最高为93％;而其它3株新疆分离株与高致病性PRRSV JXA1、HuN4、JXwn06、pJX143和HPBEDV苷酸同源率较高,为95.1％～98.9％;4株新疆分离株ORF2-7与美洲型代表株VR-2332核苷酸同源性为88.9％～90.5％;而与欧洲型代表株LV4.2.1的核苷酸同源性仅为54.2％～54.6％.[结论]新疆分离株为PRRSV美洲型.

山羊传染性胸膜肺炎和巴贝斯虫混合感染的诊治

1 发病情况 新疆某公司山羊群（共有山羊300只）2013年9月共计有82只山羊发病，发病率27．3％，前后共死亡24只，病死率29．3％，病羊主要表现精神状态差、消瘦、后躯无力、卧地不起、食欲减退或废绝、高热，咳嗽、流铁锈色鼻液、呼吸困难等症状。

新疆奶牛乳源大肠杆菌毒力相关基因eaeA的克隆及序列分析

从采自新疆乌鲁木齐市周边的5个奶牛场疑患隐性乳腺炎奶牛乳样,分离、纯化、鉴定出34株牛乳源大肠杆菌。根据GenBank发表的大肠杆菌16S rRNA序列和eaeA基因序列,用Oligo 6.0软件分别设计两对特异性引物,对分离菌株进行复检,并利用聚合酶链式反应(PCR)对eaeA基因进行扩增,结果10株为阳性,阳性率为29.4%(10/34)。将阳性样品进序列分析,结果与已发表的序列同源率为65%以上。与FJ609802株同源性较高,同源性75%。将阳性菌株用大肠埃希氏菌O抗原定型血清标定,以O21血清型的菌株eaeA基因阳性率较高。

新疆奶牛乳源大肠杆菌Irp2毒力岛的克隆及序列分析

采集新疆奶牛隐性乳腺炎乳样,经分离、鉴定,从中得到乳源大肠杆菌,并将大肠杆菌菌株用大肠杆菌O因子血清标定。根据GenBank已发表的Irp2基因序列,用Oligo 6.0生物软件设计一对特异性引物。对分离得到的大肠杆菌菌株提取基因组DNA,利用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增。结果表明,所分离大肠杆菌中Irp2基因阳性率为35.3%(12/34),阳性样品的测序结果与已发表的Irp2基因序列高度同源,同源率在98%以上。同时发现Irp2基因的阳性率与血清型并没有相关性。

羊种布鲁氏菌Rev.1突变株在BALB/c鼠中的免疫保护评价

为评价Rev.1-ΔKan-Vir B12突变株在BALB/c鼠中的免疫保护力,以Rev.1为参照,用Rev.1-ΔKanVir B12接种BALB/c小鼠,免疫45 d后用布鲁氏菌16M强毒株攻毒,15 d后取BALB/c鼠脾脏进行克脾指数测定和病理组织学检测。结果显示:BALB/c鼠免疫攻毒15 d后,Rev.1-ΔKan-Vir B12免疫组和Rev.1免疫组的克脾指数与对照组之间有显著性差异(P<0.05),而Rev.1免疫组与Rev.1-ΔKan-Vir B12免疫组之间的克脾指数差异不显著(P>0.05)。结果表明,羊布鲁氏菌Rev.1-ΔKan-Vir B12突变株与其亲本Rev.1株的免疫保护性无明显差异,具备作为布鲁氏菌病标记疫苗的潜力。

牛布鲁氏杆菌斑点酶联快速诊断新技术的研究

目的建立一种快速诊断牛布鲁氏杆菌病抗原的新方法。方法应用斑点酶联免疫吸附试验原理,将牛布鲁氏杆菌单克隆抗体与待检样品集成于一张纤维素膜上,与酶标二抗反应,再与底物液作用,通过肉眼观察底物液的颜色变化来判断待检样品中是否含有布鲁氏杆菌。结果该方法最低检测样品中活菌数为1万个菌落形成单位,整个检测过程需4.5个小时。结论牛布鲁氏杆菌斑点酶联快速诊断技术是一种简单、易行、特异(与标准大肠杆菌、沙门氏杆菌菌株没有交叉反应)、敏感(检测1万个单个菌)、省时(整个过程只需4.5个小时)的检测牛布鲁氏杆菌菌体的新方法,便于各级检验部门和基层广大农村牧区推广和应用。

绵羊链球菌病的诊断与防治

绵羊链球菌病是由溶血性链球菌引起的一种严重危害绵羊的急性、热性传染病,多发于季节交替时节,本文介绍了一例绵羊链球菌病发病的临床症状、剖检变化、实验室诊断等情况,并对防治措施进行了总结,以供参考。

牛布鲁氏杆菌单克隆抗体的制备及部分特性鉴定

目的制备牛布鲁氏杆菌单克隆抗体(单抗),并对其部分特性进行鉴定。方法选用布鲁氏杆菌地方株牛三型菌S85A抗原免疫BALB/c鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞并与SP2/O骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA筛选,得到能稳定分泌抗牛布鲁氏杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定其抗体亚类。结果经3次有限稀释法克隆,间接ELISA筛选,得到4株能稳定分泌抗牛布鲁氏杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类分别为3株IgG 2b和1株IgG3。结论间接ELISA方法证实这些单抗仅与牛种布鲁氏杆菌呈阳性反应,而与其他种的布鲁氏杆菌菌株均无交叉反应。证明得到的细胞株是牛种布鲁氏杆菌单克隆抗体分泌细胞株。

山羊破伤风的诊断与防治

由于山羊羔阉割过程中消毒不严,感染破伤风梭菌所致破伤风。根据其发病症状及流行病学调查结果,较易作出诊断,但由于该病的病程急剧,病死率高,有效防控和治疗等综合措施是控制本病的关键。该病的对因治疗不仅要考虑彻底清除伤口内的坏死组织,还要配合早期注射破伤风毒素血清;对症治疗则要采取抗炎、解痉、保护心肺等措施,以提高对该病的治愈率。

布鲁菌分型方法研究进展

布鲁菌病是一种呈世界性流行并严重影响畜牧业发展和人类公共卫生安全的人兽共患病。布鲁菌属细菌是布鲁菌病的病原菌。目前已发现的布鲁菌有10个种23个亚型。建立快速、可靠的布鲁菌分型技术对于布鲁菌病的追根溯源、判断毒力、免疫力、遗传变异、流行病学特征及其防控具有重大意义。目前用于布鲁菌属细菌分型的方法主要分为生物分型和分子分型两类。

绵羊巴氏杆菌病的诊断与治疗

巴氏杆菌病也称出血性败血症，是由多杀性巴氏杆菌和溶血性巴氏杆菌引起的家畜和家禽危害比较严重的一种传染病，临床上以败血症和炎性出血为主要特征。

三种血清学方法检测牦牛布鲁氏菌病的比较

采集牦牛血清237份,用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)进行布鲁氏菌病抗体检测。结果表明,RBPT和SAT与iELISA检测法阳性符合率分别为64.3%和57.1%,但iELISA与SAT和RBPT检测法总符合率达95%以上。本结果表明iELISA试剂盒检测法快速、简便,敏感性和特异性高于RBPT和SAT法。

响应面法优化葫芦多糖提取条件

【目的】采用响应面法优化葫芦多糖提取工艺,为葫芦多糖的深入研究提供参考依据。【方法】以葫芦为原材料,在单因素试验的基础上,以提取温度、水料比及提取时间为自变量,采用响应面法进行3因素3水平的中心组合试验,分析3个因素及其交互作用对多糖提取率的影响,确定最佳提取工艺条件。【结果】二次元回归方程为:Y=5.54+0.14A+0.43B+0.36C十0.016AB-0.081AC-0.13BC-0.34A^2-0.23B^2-0.21C^2(R^2=0.9956;A为提取温度,B为水料比,C为提取时间,Y为葫芦多糖提取率)。葫芦多糖提取率影响因素排序为:水料比>提取时间>提取温度,3个因素及水料比与提取时间的交互作用对多糖提取率影响极显著(P<0.01),提取温度与提取时间的交互作用影响显著(P<0.05)。葫芦多糖最佳提取工艺条件为:提取温度82℃、水料比24:1(mL/g)、提取时间2.3 h、提取次数2次,在此条件下,多糖提取率可达(5.810±0.240)%,与模型预测值5.820%接近。【结论】通过响应面法优化的葫芦多糖提取工艺模型具有可行性,优化后的工艺条件可提高葫芦多糖提取率。

一例卡他性奶牛乳房炎的诊治

介绍了一例卡他性奶牛乳房炎的发病原理、临床检查、临床诊断,并提出了相应的治疗方法,以期为奶牛乳房炎的防治提供参考。

驴缺钙继发阴道脱出的诊疗

2011年4月13日,临床遇到新疆科创畜牧繁育中心的1头奶驴就诊,该驴15岁,体重400kg,奶驴在产后6个月出现病症,主要表现为卧地不起,食欲下降或废绝。经调查,患驴长期饲喂粗饲料,配合少量精料。1临床症状初期病奶驴兴奋性增高,食欲减退,精神不振,喜欢卧地,不愿起立或起立困难,然后出现异嗜癖,患驴嗜啃舐墙壁和饲槽,进而消化机能紊乱,先由前肢开始骨变形,继发至后肢。