肠道病毒71型VP1抗原表位多肽疫苗的实验研究

目的根据贵州省手足口病患儿肠道病毒71型(EV71)分离株的VP1结构蛋白序列研制多肽疫苗并研究其对小鼠的免疫保护作用。方法 2013年3月1日至2015年12月31日从贵州省手足口病患儿的咽拭子样本中分离到17株EV71毒株,其VP1氨基酸序列一致(共297个氨基酸),据此设计并合成多肽片段(除最后一段为27个氨基酸外,其余均为20个氨基酸);用感染EV71的手足口病病愈患儿的阳性血清,通过间接ELISA法筛选出免疫原性较好的多肽片段,制成多肽疫苗;用多肽疫苗免疫ICR健康雌鼠,并设未免疫的对照(Con);将雌鼠的子代小鼠随机分为注射和不注射EV71病毒颗粒的2个亚组;注射病毒2 d后处死所有小鼠,分别取小鼠的骨骼肌、小肠和脑组织,通过RT-PCR检测病毒感染情况,同时HE染色后在显微镜下观察病理改变。结果共设计并合成19段含交叉序列的多肽片段,从中筛选出3段免疫原性较好的(P2:VSRALTHALPAPTGQNTQVS;P4:ALQAAEIGASSNASDESMIE;P8:YANWDIDITGYAQMRRKVEL),制成多肽疫苗并免疫雌鼠,取雌鼠的子代小鼠进行后续试验。RT-PCR结果显示,各感染病毒亚组的骨骼肌、小肠和脑组织中均能检测到EV71病毒,而未感染病毒亚组均检测不到;病理结果显示,未接种多肽疫苗母鼠的子代小鼠在感染EV71病毒后,骨骼肌、小肠和脑组织均出现明显的炎性改变;接种多肽疫苗母鼠的子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织的炎性改变明显减轻,3种多肽疫苗对EV71所致炎症的改善作用无明显差异;接种多肽疫苗母鼠的未注射病毒亚组子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织中均未检测到EV71病毒,也未观察到明显的炎性改变。结论本研究成功制备VP1抗原表位多肽疫苗并在动物实验中证实了其有效性和安全性,可为今后相关疫苗的研制提供方法学借鉴。

建筑陶瓷厚抛釉的制备

以钾钠长石和石英等矿物为主要原料,采用正交试验对面釉的配方组成进行研究,并探究和分析了厚抛釉中面釉和抛釉结合情况。利用白度测试仪,扫描电镜和热膨胀系数测试仪等测试手段对坯釉性能进行表征,实验结果表明,当面釉配方为：钾长石23,石英15,高岭土5,硅酸锆18,烧氧化锌3,滑石28,碳酸钡3,方解石12;获得了釉面效果良好的厚抛釉,其白度达到69.5%,光泽度达到66.9%,硬度达到维氏硬度348 HV5（莫氏硬度4~4.5）。这主要是由于面釉的热膨胀系数介于坯和抛釉之间,使坯釉结合性能增强所致。

遵义地区1岁以下农村留守儿童蛋白质-能量营养不良状况调查及影响因素分析

背景蛋白质-能量营养不仅在认知发育,还在神经系统、生长发育、心血管系统等方面发挥重要作用,并且蛋白质-能量营养对0~1岁儿童体格、智力发育的影响可能是长期的、不可恢复的。因此,研究分析儿童蛋白质-能量营养不良(PEM)的状况及相关影响因素,对预防留守儿童的PEM及相关疾病具有重要意义。但是,遵义市农村留守儿童(≤1岁)的具体蛋白质-能量营养状况与健康问题还没有详细的资料。目的分析遵义地区1岁以下农村留守儿童PEM状况及相关影响因素。方法2017年8月—2019年9月采用分层随机抽样法选取遵义地区1岁以下农村留守儿童进行PEM筛查,采用问卷调查的方法收集儿童性别、月龄、看护人文化程度、吸收情况、饮食结构、父母平均身高、家庭人均年收入等情况,并测量儿童身高、体质量,采用多因素Logistic回归分析探讨1岁以下农村留守儿童PEM的影响因素。结果共发放问卷700份,回收有效问卷650份,问卷有效回收率为92.9%。650例遵义地区1岁以下农村留守儿童PEM患病率为32.5%(211/650)。不同月龄、看护人文化程度、吸收情况、饮食结构、父母平均身高、家庭人均年收入的遵义地区1岁以下农村留守儿童PEM患病率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,月龄[OR=9.562,95%CI(4.737,19.299)]、看护人文化程度[OR=0.482,95%CI(0.330,0.704)]、吸收情况[OR=2.508,95%CI(1.678,3.747)]、饮食结构[OR=0.298,95%CI(0.196,0.453)]、父母平均身高[OR=0.317,95%CI(0.208,0.481)]、家庭人均年收入[OR=0.367,95%CI(0.240,0.561)]是PEM的影响因素(P<0.05)。结论遵义地区1岁以下农村留守儿童PEM患病率较高,月龄、看护人文化程度、吸收情况、饮食结构、父母平均身高、家庭人均年收入是遵义地区1岁以下农村留守儿童PEM的影响因素。

基于磁共振技术对遵义地区1岁以下维生素D缺乏症留守儿童尿液的代谢组学研究

目的运用代谢组学磁共振(NMR)技术探讨遵义地区1岁以下维生素D缺乏症留守儿童尿液代谢产物特征性变化,以期为维生素D缺乏症早期诊断提供新的生物标志物。方法2018年1月至8月通过分层抽样的方法在遵义市下辖凤冈县、播州区、正安县等地区,对1岁以下留守儿童进行血液学检测及尿液采集,选取诊断为维生素D缺乏症的40例儿童为维生素D缺乏组,另选取血液检测正常的40例儿童为健康对照组。对其尿液取样处理,应用SIMCA-P+软件对氢谱图的积分值进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)以区分2组留守儿童尿液代谢物有无差异。采用正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异性代谢产物。结果健康对照组血清25羟基维生素D[25-(OH)D]水平[(32.0±3.6)nmol/L]高于维生素D缺乏组[(15.8±2.3)nmol/L],差异有统计学意义(P<0.05)。PCA和PLS-DA分析显示健康对照组与维生素D缺乏组尿液代谢物差异有统计学意义(P<0.05)。OPLS-DA提示R2X=0.365,Q2=0.978,进一步验证差异性代谢产物存在差异。与健康对照组比较,维生素D缺乏组尿液中甲基丙二酸、3-羟基丁酸酯、N-乙酰基糖蛋白信号、谷氨酸、二甲基甘氨酸、2-酮戊二酸、亚牛磺酸、延胡索酸盐水平明显升高,差异均有统计学意义(|r|>0.602,均P<0.05,df=39);而乙基丙二酸、肌酸、胆碱、甘油磷酰胆碱、马尿酸盐水平明显下降,差异均有统计学意义(|r|>0.602,均P<0.05,df=39)。结论遵义地区1岁以下维生素D缺乏留守儿童主要表现为能量代谢、脂类代谢、氨基酸代谢、肠道微生物代谢紊乱,其差异性代谢产物在维生素D缺乏早期诊断及发病机制中具有潜在的应用价值。

遵义市1岁以下维生素A缺乏留守儿童尿液氢核磁共振代谢组学研究

目的探讨氢核磁共振(1H-NMR)技术在维生素A缺乏(VAD)早期筛查中的应用价值。方法2019年1月至6月在遵义地区收集40例确诊VAD<1岁留守儿童为VAD组,另选取40例健康儿童为健康对照组,采集2组儿童尿液,测定1H-NMR波谱。应用代谢组学技术,结合多变量统计分析比较2组代谢产物,筛选出VAD患儿差异性代谢产物。结果健康对照组血清视黄醇水平[(1.35±0.18)μmol/L]与VAD组[(0.56±0.10)μmol/L]比较,差异有统计学意义(t=23.93,P<0.001)。尿液1H-NMR光谱图结果显示:与健康对照组比较,VAD组儿童尿液中甲基丙二酸、2-酮异戊酸酯、N-乙酰基糖蛋白、二甲基甘氨酸、三甲铵乙内酯水平明显升高,差异均有统计学意义(|r|>0.602,均P<0.05);异戊基丙基甘氨酸、2-羟基异丁酸酯、肌酸、磷酸胆碱/甘油磷酸胆碱、马尿酸盐水平明显下降,差异均有统计学意义(|r|>0.602,均P<0.05)。结论VAD患儿与健康儿童比较,尿液代谢产物存在差异,差异代谢产物与肠道微生态平衡、消化系统疾病、呼吸系统疾病、免疫相关疾病及能量代谢、生长发育密切相关,尿液1H-NMR代谢组学分析在VAD早期筛查中具有潜在应用价值。

遵义地区1岁以下留守儿童锌缺乏症生物标志物研究

目的运用氢核磁共振(1HNMR)技术对遵义地区1岁以下健康留守儿童和1岁以下锌缺乏症留守儿童尿液进行分析, 以期为锌缺乏早期诊断提供新的生物标志物。方法横断面研究。2018年1月至8月通过分层抽样的方法选取遵义地区1岁以下健康留守儿童40例[男22例、女18例, 年龄(7.78±3.62)个月, 身高(65.01±2.67) cm, 体质量(7.15±1.59) kg]和锌缺乏症留守儿童40例[男19例、女21例, 年龄(7.89±3.57)个月, 身高(64.25±2.95) cm, 体质量(7.02±1.68) kg]分为健康对照组和锌缺乏组, 并进行取样处理测定1HNMR波谱, 比较2组儿童年龄、身高、体质量、血清锌含量, 应用代谢组学技术, 结合多变量统计分析比较2组代谢产物, 筛选出锌缺乏患儿差异性代谢产物。结果 2组儿童年龄、身高、体质量比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05)。健康对照组血清锌水平[(54.3±3.06) mmol/L]高于锌缺乏组[(39.2±3.77) mmol/L], 差异有统计学意义(t=22.65, P<0.05)。尿液1HNMR光谱图结果显示:与健康对照组比较, 锌缺乏组儿童尿液中4-羟基苯丙酮酸、苯基乙酰甘氨酸、马尿酸盐水平均明显下降(r=-0.620、-0.689、-0.721), 差异均有统计学意义(均|r|>0.602, 均P<0.05)。结论遵义地区1岁以下留守儿童锌缺乏主要表现为尿液4-羟基苯丙酮酸、苯乙酰甘氨酸、马尿酸盐代谢产物水平下降, 提示肠道菌群代谢紊乱, 其差异性代谢产物在锌缺乏的早期诊断中具有潜在应用价值。