ROCK2-shRNA转染对VaD大鼠海马神经元的保护作用

目的探讨不同滴度ROCK2-shRNA腺相关病毒(AAV9-ROCK2-shRNA)转染对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经元的保护作用。方法选取成年SPF级健康雄性SD大鼠40只,随机分为正常组、PBS对照组、低滴度组、中滴度组、高滴度组(n=8)。采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备VaD模型,将AAV9-ROCK2-shRNA按原液(高滴度)、2倍(中滴度)、10倍(低滴度)稀释后,采用脑立体定位术注射至大鼠海马组织周围。于1周及4周后,进行Morris水迷宫测试大鼠学习和记忆能力变化,并于第4周行为学观察后取材,采用HE与尼氏染色观察神经元形态、分布及数量变化,免疫组化检测IL-1β阳性细胞数,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的转染情况。结果与正常组比较,PBS对照组术后1周与4周逃避潜伏期延长、跨越平台次数显著减少,神经元损伤明显,尼氏小体显著减少,差异有统计学意义(均P<0.05);与PBS对照组比较,术后1周,低、中、高滴度组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数差异无统计学意义(均P>0.05);术后4周,低、中、高滴度组较PBS对照组逃避潜伏期时间缩短、跨越平台次数增加,神经元排列整齐、形态更规则,尼氏小体增多,IL-1β阳性细胞数明显减少(均P<0.05);与中滴度组比较,术后1周,低、高滴度组的潜伏期、跨越平台次数差异无统计学意义(均P>0.05);术后4周,低、高滴度组大鼠逃避潜伏期延长、跨越平台次数减少,海马神经元受损更严重,尼氏小体数减少,IL-1β阳性细胞数增多,GFP转染率显著降低(均P<0.05)。结论中滴度AAV9-ROCK2-shRNA能高效、稳定、低毒地转染大鼠海马组织,对VaD大鼠海马神经元保护作用最优。

温阳复元方对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗机制

目的:观察温阳复元方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠JNK1、Bax表达的影响,探究其相关的作用机制。方法:将32只雄性大鼠随机分为五组,模型组、假手术组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,温阳复元方低剂量组、温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组分别按1.5、3、6 ml剂量给予温阳复元方灌胃。观察成模后各组大鼠TTC染色及第1、3、7天的神经功能缺陷评分;Nissl染色观测组织病理学;IF和RT-qPCR检测脑组织中JNK1、Bax阳性细胞和mRNA表达。Western blotting检测大鼠脑组织中JNK1、Bax蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺陷评分较高,差异有统计学意义(P<0.01)。造模后,大鼠脑组织出现明显的白色梗死灶,缺血侧神经元轮廓模糊,部分胞质自溶,颗粒脱失,着色不均匀,胞核碎裂消失,尼氏小体含量明显减少,结构不清。与模型组比较,第1、3、7天温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组的神经功能缺陷评分均低,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,温阳复元方低剂量组、温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组JNK1、Bax阳性细胞数和mRNA表达均低,且温阳复元方高剂量组最低,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,温阳复元方低剂量组、温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组p-JNK1、Bax、p-Bax蛋白表达均低,且温阳复元方高剂量组最低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤可能与大脑组织中的JNK1、Bax蛋白增多有关,温阳复元方通过抑制JNK1、Bax蛋白活化,减少神经细胞凋亡,延缓疾病进展,且以高剂量效果较好。

温阳复元方联合miR-137模拟剂调控线粒体铁死亡对脑缺血再灌注损伤大鼠的作用机制

目的:阐明大鼠脑缺血再灌注(I/R)后miR-137对转铁蛋白受体(TFR)和胸腺癌抵抗蛋白(BCRP)表达的调控作用及温阳复元方的干预效应。方法:75只SD大鼠分为五组,假手术组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃,余组予温阳复元方灌胃,miR-137模拟组和miR-137模拟对照组大鼠使用脑立体定位法分别将miR-137模拟剂和miR-137空载体注射到缺血侧MCA区,成模后再灌注24 h、7 d、14 d大鼠取材;评价各组大鼠的神经功能缺损评分以及TTC染色;分别通过RT-qPCR、Western blot检测各组大鼠脑组织中相关蛋白和mRNA的表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺陷评分较高(P<0.01);成模后大鼠脑组织出现明显的白色梗死灶。与模型组比较,温阳复元方组、miR-137模拟组和miR-137模拟对照组大鼠脑组织中miR-137以及TFR mRNA和蛋白表达量均明显降低,其中miR-137模拟组降低最为显著(P<0.01);同时,大鼠脑组织中BCRP mRNA和蛋白表达均明显升高,其中miR-137模拟组升高最为明显(P<0.01)。结论:miR-137可能通过下调TFR、上调BCRP的表达,从而达到对大鼠神经元的保护作用,温阳复元方能进一步增强其保护作用。

miR-137通过调控血红素铁输出蛋白FLVCR、BCRP对大鼠I/R损伤的保护作用

目的探讨大鼠脑缺血/再灌注(I/R)后血红素铁输出蛋白猫白血病病毒C亚组受体(FLVCR)、乳腺癌抗性蛋白(BCRP)的表达变化及miR-137对其表达的调控作用。方法选取SD大鼠60只,随机分为假手术(SO)组、模型(MCAO/R)组、miR-137模拟物(Mimic)组、miR-137模拟对照(Mimic对照)组、miR-137抑制物(Inhibitor)组、miR-137抑制对照(Inhibitor对照)组,每组10只。采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分别于再灌注后12、24 h取材。通过qRT-PCR测定大鼠脑组织FLVCR、BCRP及miR-137的mRNA表达,免疫组化检测FLVCR、BCRP蛋白的表达水平。结果MCAO/R组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01),Mimic组评分显著下降(P<0.01),Inhibitor组评分显著升高(P<0.05)。MCAO/R组miR-137 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),与Mimic对照组同时间比较,Mimic组miR-137 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),且24 h升高更显著(P<0.05);与Inhibitor对照组同时间比较,Inhibitor组miR-137 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),且24 h降低更显著(P<0.05)。与SO组比较,MCAO/R组FLVCR mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组FLVCR mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高(P<0.05),24 h最高(P<0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组FLVCR mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01),在24 h降低更明显(P<0.05)。与SO组比较,MCAO/R组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组BCRP mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高(P<0.01),24 h最高(P<0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论miR-137过表达可能促进FLVCR和BCRP的表达以保护大鼠脑缺血再灌注损伤。

铁死亡在缺血性中风中的作用及中医药干预的研究进展

综述缺血性中风铁死亡的发生机制及中医药干预的研究进展,为缺血性中风的预防和治疗提供新的理论依据及策略。铁死亡是近年来研究发现的一种全新的细胞程序性死亡方式,是一种因铁依赖性的脂质过氧化物积累引起细胞死亡的调节形式。近年来,对铁死亡这一以铁依赖性脂质过氧化积累为特征的调节性细胞死亡与中风关系的研究越来越多,铁死亡的发生导致机体正常的组织器官损伤或功能丧失,这一过程直接参与疾病的发生、发展与转归。因此,针对缺血性中风,抑制铁死亡的发生可以有效地预防及延缓缺血导致的脑组织损伤。一些中药提取物及中药复方均可抑制铁死亡,起到神经保护作用。

近3年线粒体介导细胞凋亡的研究进展

线粒体是细胞活动的"动力工厂",在调节细胞生存凋亡过程中发挥关键性的作用。在细胞凋亡过程中,线粒体膜通透性转换孔过度的开放会促使线粒体跨膜电位降低,导致一些相关的促凋亡因子,如细胞色素C凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)家族以及膜间隙中的Caspase前体蛋白(procaspase)等从线粒体中释放进入胞质,共同参与对细胞的调节。研究线粒体对细胞凋亡的机制,对于研究调控细胞凋亡具有极其重要的理论意义。本研究以线粒体对细胞凋亡作用近3年研究为基础,对线粒体介导细胞凋亡中的作用机制进行综述。

早期血液灌流结合连续静脉-静脉滤过在重症急性胰腺炎合并高脂血症患者中的临床研究

目的研究早期血液灌流+连续静脉-静脉滤过应用于重症急性胰腺炎合并高脂血症中对患者血脂、炎症及血尿淀粉酶指标的影响。方法选取2020年4月至2022年6月广西中医药大学第一附属医院收治的50例重症急性胰腺炎合并高脂血症患者,通过随机数字表法进行分组,每组25例。对照组患者进行禁食水、抗休克、营养支持、胃肠减压、预防感染、抑酸抑酶、改善胰腺微循环等常规治疗,研究组患者早期联合应用血液灌流+连续静脉-静脉滤过治疗。患者临床症状显著缓解,脏器功能恢复正常,生命体征平稳即可停止治疗。对比两组患者的禁食、症状缓解、住ICU及住院时间,治疗前后三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、血和尿淀粉酶指标水平。结果研究组患者禁食、症状缓解、住ICU、住院时间均短于对照组;与治疗前比,治疗后两组患者血清TG、TC及LDL-C水平均降低,且研究组低于对照组;治疗后两组患者血清hs-CRP、TNF-α、PCT、IL-6水平均降低,且研究组低于对照组;治疗后两组患者血淀粉酶、尿淀粉酶水平均降低,且研究组低于对照组(均P<0.05)。结论早期血液灌流+连续静脉-静脉滤过在治疗重症急性胰腺炎合并高脂血症中可缩短患者住院时长,同时降低血脂水平,减轻机体炎症程度,并促进血尿淀粉酶水平改善,治疗效果更为理想。

温肺降浊方联合ROCK2-shRNA转染对血管性痴呆大鼠的神经保护作用

目的基于ROCK2-shRNA转染技术,探讨温肺降浊方对血管性痴呆大鼠学习、记忆能力及海马组织病理形态的影响。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、ROCK2干扰组、阴性对照组、中药+ROCK2干扰组,每组10只。除假手术组外,其余组均采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型。造模成功后,ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组将AAV9-ROCK2-shRNA注射至大鼠海马组织,ROCK2干扰组同时给予生理盐水灌胃4周,中药+ROCK2干扰组同时给予温肺降浊方2 g/(kg·d)灌胃4周;阴性对照组同法注射空载体腺相关病毒,同时给予生理盐水灌胃4周;中药组给予温肺降浊方2 g/(kg·d)灌胃4周,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃4周。分别于术后1周及4周,采用Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力;术后4周处死各组大鼠,电镜观察海马神经元突触超微结构,尼氏染色法观察海马组织中神经元的分布、形态及尼氏小体数量,Tunel染色检测海马神经元凋亡情况。结果术后1周,模型组与各干预组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数比较差异均无统计学意义(P均>0.05);术后4周,与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05);与模型组比较,中药组、ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组大鼠逃避潜伏期均明显缩短(P均<0.05),跨越平台次数均明显增加(P均<0.05);与ROCK2组及中药组比较,中药+ROCK2干扰组大鼠逃避潜伏期更短(P均<0.05),穿越平台次数更多(P均<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠神经元分布散乱,突触形态紊乱,细胞器破裂消失,尼氏小体数目明显减少(P<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显增加(P<0.05);与模型组比较,中药组、ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组大鼠神经元损伤明显改善,海马神经元突触形态及细胞器结构较完整规则,尼氏小体数量明显增加(P均<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显减少(P均<0.05);与ROCK2组及中药组比较,中药+ROCK2干扰组大鼠神经元突触形态更规则、细胞器更完整,且尼氏小体数目明显增多(P均<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显减少(P均<0.05);中药组与ROCK2干扰组各观察指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论温肺降浊方能明显改善血管性痴呆大鼠的学习与记忆能力,机制可能与其能降低ROCK2表达,进而抑制RhoA/ROCK2信号通路的传导,改善海马神经元结构损伤,减少神经细胞凋亡有关。

试述胡跃强教授从“温阳益肺”法论治抑郁症理论探讨

中医治疗抑郁症通常从五脏论治,胡跃强教授认为抑郁症亦可从肺论治,用中医经典理论及现代生物物理学的认识对温阳益肺法论治抑郁症进行探讨,以此来论证温阳益肺论治抑郁症的可行性。

机械振动对Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn镁合金组织和性能的影响

通过金相组织分析、X射线衍射分析、扫描电镜分析和力学性能测试,研究了机械振动对Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn镁合金显微组织和力学性能的影响。试验结果表明,在镁合金凝固过程中施加机械振动,导致最初形成的枝晶破碎,形成游离晶核,游离晶核作为异质形核质点增加了晶核的数目,有效地细化了合金组织,铸造缺陷也明显地得到了改善。机械振动使合金的力学性能得到显著提高,合金的最大抗拉强度和屈服强度分别提高了17.3%和15.4%,伸长率也得到一定的提高。

血管性痴呆大鼠不同时间点模型的建立与评估

目的建立各时间点均稳定的、易操作的、可复制的血管性痴呆(VD)大鼠模型。方法分别采用缺血再灌注组(A组),双侧颈总动脉结扎组(B组),再灌注配合双侧结扎组(C组)三种方法制作VD模型;运用Morris水迷宫和TUNEL法分别评估大鼠行为学变化和海马神经细胞凋亡情况。结果①各组模型大鼠术后死亡率以B组最高,A组最低。②行为学变化:各组模型大鼠术后1 w学习记忆能力均明显下降(P<0.05),以B、C两组下降最为严重;4 w以后发现A组与假手术组无统计学差异(P>0.05),但与B、C两组比较出现明显差异(P<0.05);B、C两组与假手术组仍有明显差异(P<0.05),同时B与C组之间无统计学差异(P>0.05);B、C两组进行组内比较也无明显差异(P>0.05)。③细胞凋亡情况:术后1 w各组模型大鼠神经细胞凋亡的数量明显增多(P<0.05),以C组最为严重。术后4 w开始A组大鼠的细胞凋亡数目明显改善,与术前1 w比较有明显差异(P<0.05),而与假手术组比较无统计学差异(P>0.05)。B、C两组细胞凋亡情况整体稳定,与假手术组有明显差异(P<0.05)。结论 A组大鼠随着时间推移脑功能恢复明显,模型结构不稳定,可能不利于长期动态的观察,可考虑用于短期药物与病理研究;B、C两组模型术后结构稳定,因此都可用于VD的长期动态研究。但B组大鼠的死亡率明显高于C组,因此C组模型可能更值得在实验VD大鼠模型中的运用。

熔体处理对Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn镁合金组织的影响

通过重力铸造法制备了Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn合金熔体,采用机械振动、机械搅拌、超声波不同方式对合金熔体进行了处理。研究了熔体处理对Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn合金微观组织的影响。结果表明:不同方式处理的合金熔体,合金晶粒都得到了细化,第二相分布弥散。超声波处理后铸造缺陷消失。

Rho激酶抑制剂介导Rho A/ROCK2通路对VaD大鼠海马神经元的保护机制

目的探讨基于腺相关病毒为载体构建的Rho蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经元的保护机制。方法SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、ROCK2干扰剂组(shROCK2)、阴性对照组(空载体shROCK2)。采用双侧颈总动脉永久结扎术制作VaD大鼠模型,将AAV9-ROCK2-shRNA通过脑立体定位术注射至大鼠海马组织,阴性对照组注入等量空载体腺相关病毒。4 w后,采用Morris水迷宫测定大鼠学习、记忆能力,RT-PCR、Western blot检测各组大鼠Rho A/ROCK2通路Rho A、ROCK2、MLC、MLCP的mRNA及蛋白表达水平,电镜观察大鼠海马突触超微结构变化。结果术后4 w,与模型组及阴性对照组比较,ROCK2干扰组大鼠空间学习及记忆能力显著改善,海马中上述4个指标mRNA及其蛋白表达显著减少(P<0.01),且海马组织内突触前后囊泡正常、细胞器更加完整。结论Rho蛋白激酶2抑制剂通过抑制Rho A/ROCK2信号通路降低下游相关蛋白表达,进而起到促进神经轴突再生,减轻VaD大鼠认知功能障碍的作用。

Bi对镁合金热浸镀铝镀层组织和厚度的影响

采用热浸镀方法在AZ31镁合金表面镀覆一层铝合金层。利用光学显微镜和配有能谱分析的扫描电镜等对镀层微观组织、元素分布等进行了研究;测定了试样在不同浸镀条件下的镀层厚度。结果表明:镀液添加Bi后,在浸镀温度不变情况下,镀层厚度增加速度加快,过渡层厚度变大,镀层中粗大的树枝晶增多,但是Bi在镀层中含量极少。通过对试验结果分析得出:Bi元素对Mg、Al液态互扩散具有显著的促进作用,使得镀层形成速度加快,但是也造成镀层组织粗大。

从线粒体相关凋亡蛋白表达探讨温肺降浊方对VD大鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织Cytc、Bax蛋白表达变化及大鼠学习记忆能力的影响。方法:雄性SPF级SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,每组各30只。采用双侧颈总动脉永久性结扎法制作VD大鼠模型,中药组给予温肺降浊方灌胃,西药组予盐酸多奈哌齐灌胃,其余两组则予以等量生理盐水灌胃。采用Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力,RT-PCR检测大鼠海马Cytc、Bax mRNA含量,Western blot检测大鼠海马Cytc、Bax蛋白表达水平。结果:(1)Morris水迷宫学习记忆能力测试结果证实与假手术组比较,模型组大鼠学习成绩与记忆成绩下降,各用药组大鼠的学习成绩与记忆成绩均有显著提高(P<0.05);(2)与模型组比较,中药组及西药组大鼠海马Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量含量显著下降(P<0.05),且药物组之间比较无统计学意义(P>0.05)。结论:温肺降浊方可明显改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与其抑制海马Cytc及Bax表达有关。

调理肺肾法治疗血管性痴呆的进展

从血管性痴呆的病机、辨证论治方面,对从肺肾论治血管性痴呆的有关文献进行了探讨,认为肾精亏虚、肺虚宣降失司是血管性痴呆产生的重要病机之一,血管性痴呆的治疗应重视调理肺肾法这一基本原则。

半固态搅拌对Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn镁合金显微组织的影响

首先采用差热分析确定了Mg-6Gd-3Y-0.4Zr-2Zn镁合金的固相点和液相点,然后在610.5~642.5℃温度区间对其进行半固态搅拌,研究了半固态搅拌对其显微组织的影响,并与未经半固态搅拌制备相同成分镁合金的组织进行了对比。结果表明:半固态搅拌处理镁合金的铸态组织相对未半固态搅拌处理的而言,晶粒尺寸有所减小,且较圆整均匀,第二相的连续网状结构有向断网状转变的趋势。

电针与干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

电针与干细胞移植联合修复脊髓损伤(SCI)是一种极具前景的治疗方法。从单一电针或干细胞移植发展到干细胞联合多种干预因素作用,以此促进受损神经功能的修复。本文就当前脊髓损伤病理表现及生物学标记、电针与干细胞移植及其联合治疗加以综述,并对SCI的治疗前景与存在问题进行展望。

腺病毒介导的RNAi对VaD大鼠脑内NgR/RhoA/ROCK2信号通路的影响

目的探讨基于腺相关病毒为载体构建的Nogo受体(NgR)抑制剂通过NgR/Ras基因家族成员(Rho)A/Rho相关激酶(ROCK)2信号通路改善血管性痴呆(VaD)大鼠学习记忆能力及轴突再生分子机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NgR干扰剂组(腺相关病毒)、阴性对照组(NgR空载体病毒),每组10只。采用双侧颈总动脉永久结扎术法制作VaD大鼠模型,模型成功后,将AAV9-NgR-shRNA通过脑立体定位术注射至大鼠海马组织,阴性对照组注入等量空载体腺相关病毒。4 w后,采用Morris水迷宫测定学习、记忆能力,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测各组NgR/RhoA/ROCK2通路NgR、RhoA、ROCK2 mRNA及蛋白表达水平,电镜观察大鼠海马突触超微结构变化。结果术后1 w,模型组、阴性对照组潜伏期时间与跨越平台次数与NgR干扰组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与假手术组比较有显著性差异(均P<0.05)。术后4 w,与模型组及阴性对照组比较,NgR干扰组潜伏期显著缩短,跨越平台次数显著增加,海马中NgR、RhoA、ROCK2 mRNA及其蛋白表达显著减少(均P<0.05),且海马组织内突触前后囊泡正常、细胞器更加完整;阴性对照组上述指标与模型组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论NgR抑制剂可能通过抑制NgR/RhoA/ROCK2信号通路起到促进神经轴突再生,改善海马突触结构,减轻VaD大鼠认知功能障碍的作用。

推动怀化柑橘高质量发展的建议与对策

怀化地处武陵山片区,土壤肥沃、气候适宜,可栽种并培育出品质优良的柑橘,享誉国内外。但柑橘产业发展整体仍存在一定不足和短板,制约了柑橘产业发展。基于此,研究和剖析怀化的柑橘产业现状,找准症结和解决办法,提质提效,科学规划产业布局,加大示范基地建设力度,坚定不移把柑橘产业培育成百亿特色产业。