抗人心肌单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

本文以人心肌抗原免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获2株(2F_1和1F_6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。免疫印迹试验证明,细胞培养上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为55KD蛋白带结合。抗原阻断试验结果,证明获得的两株单抗是人心肌抗原特异的。染色体数分别为102条和96条。1F_6和2F_1的Ig亚类型均为IgG_1。间接免疫荧光呈肌束膜型,ABC免疫组化显示肌束膜和肌原型(胞浆)。

抗牛心肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

血清肌酸激酶(CK)及其同工酶在诊断急性心肌梗塞及骨胳肌损伤有重要的临床价值。近年来国内外已广泛应用,其方法有离子交换柱层析法,电泳法和定量的动力学法(DTT对CK-MB选择活性作用)以及免疫学方法等。前三种方法均较繁琐且有的特异性差。免疫学方法较为省时省力,尤其特异性、敏感性均较高,但目前使用的均为多克隆抗体。为进一步提高CK检测中特异性和敏感性,且由于人心CK-MM抗原来源较困难,我们制备了抗牛心CK-MM单克隆抗体。

抗人心肌单克隆抗体的制备及其生物学特性

各种原因引起的心肌病,均可在病人体内产生抗心抗体,尤其在青少年中易患心肌炎,目前这种病的早期诊断尚无特异的、早期诊断手段,抗心抗体的检测也无敏感的方法。心肌炎的早期诊断及时治疗对于防止心肌炎后遗症有重要意义。 抗人心肌单克隆抗体的研制,有助于建立敏感的检测手段,用于早期诊断。为此,我们应用B淋巴细胞杂交瘤技术,获得两株抗人心肌单克隆杂交瘤细胞系,并对其生物学特性作了初步研究。

穴注黄芪治疗乙型肝炎病毒表面抗原慢性携带者的临床研究

穴注黄芪治疗乙型肝炎病毒慢性携带者７２例，并设两个对照组，即肌注黄芪组２０例和穴注生理盐水组１９例。结果，穴注黄芪组的ＨＢｓＡｇ的阴转率为２７６９％～３７５０％，ＨＢｅＡｇ的阴转率为７０００％～８４２１％，疗效优于对照组，经统计处理Ｐ＜００１或Ｐ＜００５，通过对治疗组和对照组的６个月和１２个月的疗效随访观察，治疗组仍优于对照组。通过对治疗组的乙肝病毒血清学各项指标的近远期疗效比较，无显著性差异（Ｐ＞００５），说明治疗组的疗效比较稳定。

白癜风患者血清抗黑素细胞抗体的免疫荧光检测

目的建立抗黑素细胞抗体免疫荧光检测方法,测定白癜风患者血清中抗黑素细胞抗体。方法取外科手术后人眼睑正常皮肤,用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液,在M2黑色素细胞选择性培养基中培养,每周传代1次,经4～5次传代,以免疫荧光和多巴胺染色检测培养细胞的纯度和生物学特性,转移到明胶包被的玻璃片上生长至70%融合,丙酮固定后,与不同稀释度的白癜风患者和正常对照血清反应,加入FITC标记的兔抗人抗体,观测荧光染色效果。结果黑素细胞能在培养基中选择性生长,经4～5w培养获得纯的黑素细胞,无成纤维细胞和角质形成细胞的污染。19例发展期患者抗黑素细胞抗体阳性15例,抗体阳性率79%;10例高于1:50,5例抗体滴度为1:10。稳定期15例中,抗黑素细胞抗体阳性4例,抗体阳性率27%。结论建立了抗黑素细胞抗体免疫荧光检测方法,白癜风患者血清中有抗黑素细胞抗体,且其滴度与病情发展相关。

自体黑素细胞培养移植治疗白癜风的长期随访观察与研究

目的：观察白癜风患者接受自体黑素细胞培养移植治疗的长期临床疗效与安全性。方法：对6例白癜风患者进行自体黑素细胞培养移植治疗后即随访观察了6～9．5年，并评价其临床疗效与安全性。结果：自体黑素细胞培养移植后的皮损肤色均匀一致，色泽度与周边正常皮肤一致，并且与皮损周边皮肤融合较好，未见明显的不良反应，安全可靠。结论：白体黑素细胞培养移植治疗白癜风患者临床疗效好且无不良反应，安全性可靠，值得临床推广和应用。

纤维蛋白原降解产物在某些疾病中的观察

纤维蛋白原降解产物(简称FDP下同)是纤维蛋白原和纤维蛋白的裂解碎片、单体、多聚体的复合物,共聚同一抗原决定簇。因此,FDP包括纤维蛋白原和纤维蛋白及其降解产物X、Y、D和E等碎片。 纤维蛋白原在血液凝固中起关键的凝血作用,而其降解产物主要作用则是抗凝血。研究证明在肾炎发病过程中,有纤维蛋白沉积了肾小球,在肿瘤等病人的血清内FDP含量增加。FDP测定在血栓——栓塞性疾病中是有意义的,在其他疾病如癌症,风湿性关节炎,肾小球肾炎中测定不同体液中FDP含量也具有一定意义。本文报告在部分疾病中FDP含量的观察。

自体表皮与黑素细胞移植治疗白癜风疗效对比

目的:研究和比较自体表皮移植与黑素细胞移植治疗白癜风的临床效果。方法:自体表皮移植采用局部皮肤发疱后直接进行移植;黑素细胞移植是从疱壁上获取黑素细胞、纯黑素细胞培养与增殖、移植区刮除种植法进行自体黑素细胞移植治疗。结果:自体表皮移植与黑素细胞移植治疗白癜风对其皮损的评分分别为(7.97±2.36)分和(11.46±2.57)分,经统计学分析差异有统计学意义(P<0.01)。结论:自体表皮移植操作方法较简单,黑素细胞移植可治疗面积大的皮损,而且色素分布均匀,临床效果更好。

DnaJ类分子伴侣PBP基因的原核表达及兔抗PBP抗体的制备

目的:在原核系统中表达DnaJ类分子伴侣感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)基因,并制备兔抗PBP的抗体鉴定其特性。方法:应用RTPCR从人胎脑组织总RNA中扩增PBPcDNA。测序后将其克隆到表达载体pET28a中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。表达产物经NiNTA亲和层析柱纯化后,用SDSPAGE进行鉴定。以所获纯化的PBP免疫新西兰白兔,制备兔抗PBP抗体。抗体的效价及特异性用Westernblot进行测定和分析。结果:扩增和克隆出了720bp的PBP基因。构建的重组质粒pET28aPBP在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清中,纯化的PBP经SDSPAGE鉴定呈单一条带。以纯化的PBP免疫兔,制备了兔抗PBP抗体。Westernblot鉴定证实,该抗体可与原核表达的PBP特异性结合,抗体效价为1∶1600。结论:在原核细胞中表达了具有生物学活性的PBP,并以其为免疫原制备了兔抗PBP的抗体,为进一步研究PBP的结构与生物学活性奠定了基础。

穴注黄芪治疗乙型肝炎病毒慢性携带者的疗效观察

1 临床资料1.1 观察对象:HBsAg阳性携带者。1.2 病例选择:参照1990年上海第六届全国病毒性肝炎会议修订的《病毒性肝炎防治方案》的标准。凡无任何临床症状或体征,肝功能正常,HBsAg持续阳性6个月以上者。本组病例均为体检查出,观察半年以上复查确诊者。1.3 性别与年龄:穴注黄芪组72例中,男性59例,女性13例;年龄8～54岁,平均年龄34.2岁。

正常人黑素细胞的体外培养与观察

目的进一步探索人纯黑素细胞培养方法,观察黑素细胞体外培养后的形态与生物学功能性。方法在M2培养基条件下进行人纯黑素细胞培养,应用倒置显微镜观察细胞形态,采用TRP-75单克隆抗体检测生物学功能性。结果6例参与者进行了黑素细胞培养与研究,培养成功率为100%,培养后的黑素细胞形态正常,并显示良好的生物学功能。结论在M2培养基条件下进行人纯黑素细胞培养增殖,其培养效果好,培养后的黑素细胞具有良好的生物学功能。

白癜风患者正常表皮黑素细胞培养与生物学功能的研究

目的:进一步研究和探索白癜风患者正常表皮黑素细胞培养和生物学功能,为白癜风移植治疗提供实验依据。方法:从白癜风患者的皮肤发疱壁上获取黑素细胞,应用M2培养基进行纯黑素细胞培养与增殖,研究人黑素细胞体外培养后生物学功能。结果:10例白癜风患者自体黑素细胞培养成功率为100%,培养后获得的黑素细胞数量理想,生物学功能可靠。结论:在M2培养基条件下进行纯黑素细胞培养增殖,获得的黑素细胞数量比较理想,其生物学功能可靠,可以进一步应用于白癜风的移植治疗。

计算机图像分析对自体黑素细胞移植治疗白癜风的疗效评价

目的研究黑素细胞培养移植治疗白癜风的疗效及评价方法。方法采用从发疱壁上获取黑素细胞、纯黑素细胞培养与增殖、移植区刮除种植法治疗白癜风;应用计算机皮肤数字图像分析系统进行疗效评价。结果20例白癜风患者的28块皮损进行了自体黑素细胞培养移植,移植后的平均灰度与正常皮肤平均灰度接近。结论黑素细胞培养移植治疗白癜风操作简单、治疗面积大,色素分布均匀;计算机图像分析系统的疗效评价更具有客观性。

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ，纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带，分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ，人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７Ｕ／ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近，在ｐＨ７．５－８．０之间，酯酶活性底物ＡＴＣｈ对其芳基酰胺酶活性有抑制作用。ＩＣ_（５０）分别为１０．２×１０^（－３）及３×１０^（－３）ｍｏｌ／Ｌ。梭曼对其酯酶及酰胺酶活性均有明显抑制作用，说明二者均需活性中心丝氨酸参与。

特异性转移因子治疗银屑病的临床观察

本文介绍了用乙肝疫苗免疫猪,致敏后提取特异性转移因子治疗42例银屑病患者的临床观察。治疗的总有效率为92.86％,与对照组用双盲法进行对比分析,结果表明 TF-P 组显著高于对照组(P<0.01)。证明 TF-P 是一种较理想治疗银屑病的有效药物,无明显副作用。

自体黑素细胞培养移植治疗白癜风疗效评价

目的:评价黑素细胞培养移植治疗白癜风的疗效。方法:采用从发疱壁上获取黑素细胞、纯黑素细胞培养与增殖、移植区刮除种植法,进行自体黑素细胞培养移植治疗白癜风;应用计算机皮肤数字图像分析系统进行疗效评价。结果:23例白癜风患者中28块皮损进行了自体黑素细胞培养移植,总有效率为89.29%;移植后的平均灰度与正常皮肤平均灰度相接近。结论:此操作方法较简单,治疗面积大,色素分布均匀,值得临床参考应用;计算机图像分析系统的疗效评价更具有客观性。

从银屑病皮损处鳞屑和组织中检出乙型肝炎病毒成份

应用免疫学及核酸杂交技术和VECTOR、ENZO两公司生产之试剂,从银屑病皮损处鳞屑和组织中检出了乙型肝炎病毒成份。鳞屑中HBsAg和HBV-DNA阳性例数为74/288,占25.6％;组织中HBsAg、HBeAg、HBeAg和HBV-DNA阳性例数为15/75,占20％;有6例在组织中存在两种以上成份。上述成份分布在表皮各层和真皮中,血清HBV感染标志检测结果表明,鳞屑和组织中检出的HBV成份,不是全身感染所致,而是局部存在的。本文首次提出具体病毒和确切定位,并认为乙型肝炎病毒在银屑病发病中可能起主要作用或者是部分病人的发病原因。

c-Jun氨基末端激酶1和2在角质形成细胞系Hacat细胞中的作用

目的研究同工酶JNK1和JNK2在Hacat细胞中的功能差异,探讨其在皮肤肿瘤治疗中的潜在价值。方法分别将JNK1和JNK2的siRNA导入Hacat细胞,通过Western Blot技术在蛋白质水平对其敲低效果进行鉴定。CCK-8法检测细胞增殖曲线,流式细胞术检测细胞周期,不同剂量的Taxol进行凋亡诱导实验,分析正常Hacat细胞与JNK1/2敲低细胞的区别。结果细胞增殖实验表明,JNK1或JNK2敲低均可导致增殖变缓,JNK1敲低效果更明显。细胞周期结果显示,JNK1敲低可导致S期细胞减少,G2/M期升高。Taxol凋亡诱导实验表明,JNK2敲低组凋亡显著增加,而对照组和JNK1敲低组凋亡变化不明显。结论在细胞增殖方面,JNK1作用强于JNK2;而在抗凋亡方面,JNK2作用强于JNK1。