地五养肝方对非酒精性脂肪肝小鼠循环外泌体溶血甘油磷脂的调控作用

目的研究地五养肝方对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠循环外泌体溶血甘油磷脂(Lyso-GPLs)的调控作用。方法采用尺寸排阻色谱法分离血液中循环外泌体,运用透射电镜观察外泌体的外观、粒径仪检测外泌体直径分布、Western blotting法检测外泌体表面特异性蛋白CD9,CD63及TSG101的表达;将24只雄性KM小鼠随机分为正常组、模型组和复方给药组,8只/组,正常组给予标准饲料,模型组和复方给药组饲喂高脂饲料,喂养1周后,各给药组小鼠按剂量给予地五养肝胶囊内容物,正常组和模型组给予等量生理盐水,灌胃给药4周。末次给药后,各小鼠麻醉后取血分离血清,检测总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),观察其对NAFLD的改善作用并提取血清中循环外泌体;同时,结合多元统计分析,筛选NAFLD小鼠循环外泌体中Lyso-GPLs类成分生物标志物,观察地五养肝方对标志物的调控作用。结果透射电镜结果显示外泌体大小在100 nm左右,形状为典型的具有清晰双层膜的茶托样结构;粒径结果显示循环外泌体粒径分布均匀,平均粒径为137.5 nm;Western blotting检测结果表明外泌体表面特异性蛋白CD9,CD63及TSG101的存在;模型组小鼠血清中TC、HDL-C、LDL-C和AST水平显著高于正常组(P<0.01),经地五养肝方治疗后,TC、LDL-C、AST、ALT水平显著回调(P<0.01),并筛选出43个经地五养肝方治疗后呈现显著回调趋势(P<0.01)的Lyso-GPLs标志物成分。结论地五养肝方防治NAFLD的作用机制涉及对循坏外泌体溶血甘油磷脂的改善和调控作用,为其防治慢性肝病的作用机制研究提供了新的科学视角。

四川省遂宁和乐山地区姜黄中微量姜黄素含量的差异性研究

目的:对道地产地四川省两个不同地区(遂宁和乐山)中药材姜黄中的微量姜黄素类成分进行相对定量分析。方法:应用LC-QTRAP-MRM靶标性特征轮廓谱技术,根据已建立的姜黄素轮廓谱,对其中93种微量姜黄素类成分含量进行测定。结果:88种微量姜黄素类成分差异有统计学意义(P<0.05),3种无统计学差异(P>0.05),2种化合物未被检测到。结论:微量姜黄素中具有统计学差异的微量姜黄素类成分可为区分遂宁和乐山地区道地药材姜黄提供理论依据;无统计学差异的3种成分可为遂宁和乐山地区微量姜黄素共有指标质量控制提供理论依据。

UPLC-QTOF-MS/MS对乌药中阿朴菲类生物碱炮制前后差异的研究

目的通过UPLC-QTOF-MS/MS对乌药中阿朴菲类生物碱进行鉴别和表征,并考察不同炮制方法对其影响。方法采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm),柱温40℃;流动相甲醇-水,梯度洗脱;采用电喷雾离子源,正离子模式下MSE(全信息串联质谱技术)扫描采集,分析生品及炮制品中阿朴菲类生物碱类化合物。结果共鉴别出36种阿朴菲类生物碱。与生乌药比较,经炒制后,阿朴菲类生物碱相对含量下降18个,增加9个;经醋制后,相对含量下降21个,增加6个;经酒制后,相对含量下降21个,增加6个;经盐制后,相对含量下降23个,增加7个。结论炮制后乌药中大多数阿朴菲类生物碱的含量变化显著,可为乌药炮制后功效变化物质基础提供依据。

竹叶黄酮中的抗炎有效成分及其对不同小鼠炎症模型的药效学研究

目的研究竹叶黄酮中的抗炎有效成分及其对不同小鼠炎症模型的药理活性作用,初步阐明竹叶黄酮抗炎的药效物质基础。方法利用小孔吸附树脂(MCI-GEL CHP20P)、聚酰胺树脂纯化、富集竹叶黄酮不同部位;建立小鼠耳廓肿胀、气囊滑膜炎、小鼠肉芽肿试验模型,研究竹叶黄酮不同部位的抗炎活性并筛选其有效抗炎成分;最后用高分辨飞行时间液质联用仪(LC-QTOF-MS/MS)对已筛选的部位进行化学成分分析。结果筛选出最佳的竹叶黄酮抗炎活性部位,并从中鉴定出7个主要的黄酮类成分。结论初步阐明了竹叶黄酮抗炎的药效物质基础,为竹叶的抗炎作用提供了详实的数据支撑,同时为其开发和利用提供了一定的科学依据。

液质联用技术测定茯砖茶发酵前后儿茶素类成分含量

目的 利用高分辨飞行时间液质联用技术对茯砖茶发酵前后儿茶素类成分的含量变化进行研究。方法 利用儿茶素类成分对照品的色谱、质谱数据,比对保留时间、一级和二级精确质量数,定性分析茯砖茶中儿茶素类成分;基于各成分峰面积与内标物峰面积的比值,对发酵前后茯砖茶中儿茶素类成分进行定量分析,研究发酵后茶叶中儿茶素类成分的含量变化。结果 定性鉴定出茯砖茶叶中7个儿茶素类成分,分别为表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin-3-gallate,ECG),表没食子儿茶素(Epigallocatechin,EGC),没食子儿茶素(Gallocatechin,GC),表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG),儿茶素(Catechin,C),表儿茶素(Epicatechin,EC),没食子儿茶素没食子酸酯(Gallocatechin gallate,GCG);同时,定量数据结果表明,发酵后的7个儿茶素类含量显著减少。结论 茯砖茶发酵前后,儿茶素类成分含量变化显著,且均呈现减小趋势,可为其发酵工艺和质量标准研究提供参考依据。

响应曲面法优化苦丁茶总皂苷的提取工艺

目的:采用Box-Behnken响应曲面设计法确定苦丁茶总皂苷的最佳醇提工艺。方法:本研究在单因素实验的基础上,以药食同源中药苦丁茶中主要皂苷成分苦丁茶皂苷A(kudinoside A)为对照品,通过响应曲面法对影响苦丁茶中总皂苷得率的不同因素进行优化,以期研究乙醇提取苦丁茶总皂苷的工艺条件。结果:最佳提取工艺条件为加入乙醇浓度63%,料液比1∶16,提取时间90min。实验结果所得苦丁茶总皂苷得率为5.59%。结论:本实验结果与预测值高度拟合,为进一步开发和利用苦丁茶资源以及新药研发提供了科学依据。

液相色谱质谱联用技术在花生四烯酸代谢产物检测中的应用进展

花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢产物是多种疾病的生物标志物,精确的定性、定量分析在研究相关疾病的发展机制、诊断和预测中具有重要价值。目前,已经鉴定的AA代谢产物主要包括四大类:前列腺素、血栓素、白三烯和羟基脂肪酸。由于绝大多数AA代谢产物在生物样本中含量极低,因此常规检测技术无法准确对其进行定性和定量分析。近年来,液相色谱质谱联用(LC-MS)分析技术在内源性小分子的检测分析中显示出巨大的优势,分别表现为高分辨飞行时间质谱(Q-TofMS)和三重四极杆线性离子阱质谱(Q-TrapMS)强大的定性和定量能力。本文对近些年LC-MS技术在AA代谢产物检测中的应用展开综述。

苦丁茶对高胆固醇脂血症小鼠血清多不饱和溶血磷脂酰胆碱的改善作用

目的:研究苦丁茶水提取物对高胆固醇脂血症小鼠血清中多不饱和溶血磷脂酰胆碱的改善作用。方法:采用LCQTOF-MS/MS和LC-QTRAP-MS/MS建立小鼠血清中多不饱和溶血磷脂的液质联用定性和定量分析方法;采用高脂饲料喂养30 d诱发小鼠高胆固醇脂血症模型;以5,10,15 g·kg^(-1)·d^(-1)(按生药材量计算)苦丁茶水提取物连续灌胃给药4周,观察高胆固醇脂血症小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的变化;观察小鼠肝脏油红O染色后的病理切片;同时,利用上述建立的液-质联用分析方法检测给药后小鼠血清中多不饱和溶血磷脂酰胆碱相对含量的变化。结果:苦丁茶水提取物能够显著降低由高脂饲料诱发的胆固醇脂血症小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇;对小鼠肝脏的脂肪堆积具有明细的抑制作用;同时,与正常小鼠相比,模型小鼠血清中的多不饱和溶血磷脂酰胆碱的相对含量显著下降,而苦丁茶水提取物对该类脂质成分具有显著的回调作用。结论:苦丁茶水提取物对高胆固醇脂血症小鼠血清中多不饱和溶血磷脂的回调作用可能涉及苦丁茶降血脂的药效作用机制,值得深入研究。