茎瘤芥光敏色素PHYB基因片段的克隆与序列分析

通过RT-PCR技术在茎瘤芥幼苗叶片中克隆了茎瘤芥光敏色素PHYB基因片段,命名为BjPHYB1(GenBank登录号:JQ178243)。结果表明,该片段长1 544 bp,编码514个氨基酸;该氨基酸序列包含两个完整的PHYB保守结构域PHYTOCHROMEREGION和PAS DOMAIN,且与甘蓝和拟南芥PHYB同源性分别为98%和96%;系统进化树分析表明BjPHYB1与同科植物的PHYB亲缘关系较近。茎瘤芥PHYB基因片段为首次克隆,为今后对该基因功能研究奠定了基础。

茎瘤芥酸性核糖体蛋白P1基因的克隆与序列分析

以茎瘤芥幼苗叶片总RNA为模板,通过SMART RACE技术进行反转录和PCR扩增,克隆到瘤芥酸性核糖体蛋白P1基因(命名为BjARPP1,GenBank登录号:JX282179),并利用ProtParam、DNAMAN等生物信息学工具对其核酸序列和蛋白序列进行分析。结果表明,茎瘤芥酸性核糖体蛋白P1基因开放阅读框为342 bp,编码113个氨基酸,等电点为4.27,相对分子质量为11.25 ku;二级结构预测显示α-螺旋占53.98%、不规则卷曲占33.68%、延伸链占12.39%,还含有5个磷酸化位点;同源进化树预测分析其与拟南芥的同源性为96%,与其他物种同源性低。茎瘤芥酸性核糖体蛋白P1基因为首次克隆,为进一步研究该基因的结构、功能、遗传变异规律以及其与生产性能的关系提供科学依据。

有机化学实验教学方法研究与实践

笔者针对有机化学实验课堂中存在的问题,对教学方法进行探索和尝试,采用了多媒体与板书、实物展示结合教学法、提问式教学法、比较式教学法、设计性实验教学法和微型实验教学法,提高了学生实验兴趣,提升了学生实验能力,培养了学生创新意识和环保意识,促进了学生综合能力的培养。

生物处理技术使秸秆变废为宝

我国农业每年产生的大量农作物秸秆使得剩余秸秆处理难问题十分突出,往往一烧了之,但焚烧秸秆严重污染环境,危害当地百姓安全和健康,生物处理技术将秸秆进行分解处理,极大地提高了其实用价值,真正实现秸秆的变废为宝,具有广阔的研究价值。

结直肠癌中FAK、FAK pY397、Akt、NF-κB表达及相关性研究

目的:检测黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(FAK pY397)、Akt和细胞核因子(NF-κB)在结直肠癌组织中的表达,并探讨其相关性。方法:采用免疫组织化学SP法,检测74例结直肠癌组织与10例正常结肠组织中FAK、FAK pY397、Akt和NF-κB的表达。结果:结直肠癌组织标本中FAK、FAK pY397、Akt和NF-κB的阳性率分别为82.43%、45.95%、52.70%和59.46%,除FAK pY397外,FAK、Akt、NF-κB均与正常结肠壁组织表达的差异显著(P<0.05)。FAK表达与分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置、Dukes分期的影响。Akt阳性表达与分化程度显著相关(P<0.05),NF-κB表达与淋巴结转移显著有关(P<0.05),并且Akt、NF-κB表达与FAK表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:FAK、Akt、NF-κB在结直肠癌组织中均高表达,且Akt、NF-κB表达与FAK有显著正相关性,提示生存信号传导通路FAK/Akt/NF-κB在结直肠癌的发生、演进中起重要作用。

独一味化学成分的研究

目的研究独一味Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo的化学成分。方法独一味的50%乙醇提取液采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到10个化合物,分别鉴定为去咖啡酰基类叶升麻苷(1)、markhamioside A(2)、gentioside(3)、6-O-乙酰山栀苷甲酯(4)、phloyoside I(5)、7,8-dehydropenstemoside(6)、phlorigidoside C(7)、β-胡萝卜苷(8)、咖啡酸(9)、棕榈酸(10)。结论化合物1~3首次从该植物中分离得到。

橄榄中三萜类化学成分研究

目的:研究橄榄(Canarium album(Lour.) Raeusch)干燥果实化学成分。方法:对橄榄80%乙醇提取物醋酸乙酯部位进行色谱分离,根据光谱数据和理化性质确定各化合物的结构。结果:从橄榄中分离得到5个三萜类化合物,分别为α-香树脂醇(α-amyrin,Ⅰ)、α-香树脂醇乙酸酯(α-amyrin acetate,Ⅱ)、β-香树脂醇(β-amyrin,Ⅲ)、齐墩果酸(oeanlicacid,Ⅳ)和β-香树脂酮(β-amyrenone,Ⅴ)。结论:化合物Ⅰ和Ⅲ为首次从橄榄果实中分离得到,化合物Ⅱ,Ⅳ和Ⅴ为首次从橄榄植物中分离得到。

反相高效液相色谱法测定清益康乳膏中苦参碱的含量

目的通过反相高效液相色谱法建立清益乳膏中苦参碱的含量测定方法。方法依利特SinoChrom ODS—BP柱（416mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0．02mol／LKH2PO4 溶液-0．02mol／L十二烷基硫酸钠（20：40：40），流速：1．0ml／min，检测波长为210nm。结果苦参碱在40、00—200．0μxg·ml^-1呈现良好的线性关系（r=0.9998），在清益康乳膏中的平均回收率为98．44％，RSD为1．97％（n=6）。结论该法灵敏、准确、专属性强、重现性好，可作为清益康乳膏的质量控制方法。

短发夹RNA干扰黏着斑激酶对结肠癌多细胞球氟尿嘧啶敏感性的影响

目的探讨抑制黏着斑激酶(FAK)在结肠癌HT29细胞中的表达能否提高HT29多细胞球对氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。方法构建带有短发夹RNA(shRNA)靶向干扰FAK的重组体pGenesil-l-FAK,抑制FAK在HT29中的表达,采用实时定量PCR和Western blotting检测其在单层细胞和多细胞球中的干扰效率。采用血球计数板计数法检测多细胞球在各时间点的增殖速度,流式细胞术检测干扰对5-FU诱导的多细胞球凋亡的影响,CCK-8法检测单层细胞和多细胞球对5-FU的敏感性的变化。结果用重组体pGenesil-l-FAK靶向干扰FAK能显著抑制单层细胞FAKmRNA,并能抑制单层细胞和多细胞球FAK蛋白的表达。多细胞球的增殖速度并不受FAKshRNA干扰的影响,各组间在各时间点均无显著性差异(P>0·05)。流式细胞术结果显示,FAKshR-NA干扰能够使多细胞球的自发凋亡率(16·48%±1·18%)和5-FU诱导的凋亡率(21·50%±2·62%)显著增加(P=0·000、P=0·001),且两者之间差异显著(P=0·003)。CCK-8法检测结果显示,FAKshRNA干扰提高了单层细胞和多细胞球对5-FU的敏感性,且两者无显著差异(P>0·05),从而逆转了因三维球体结构产生的多细胞耐药性。结论FAK靶向RNA干扰虽不影响多细胞球的增殖,但能促进多细胞球凋亡,并增加多细胞球对5-FU的敏感性;FAK可能介导了结肠癌的多细胞耐药。

复方蜂胶乳膏对皮肤刺激性的研究

目的研究复方蜂胶乳膏对家兔皮肤的刺激性实验。方法观察复方蜂胶乳膏对健康家兔单次涂药及多次涂药的皮肤刺激性的影响。结果对完整皮肤无刺激性;对家兔破损组皮肤多次涂药有轻度刺激性。结论复方蜂胶乳膏是一种安全性较好的外用制剂。

黏着斑激酶表达下调对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的研究抑制黏着斑激酶(FAK)表达对裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其中的分子机制。方法将结肠癌细胞株HT29按以下3种方法进行处理:常规培养,转染对照短发夹RNA(shRNA),转染FAKshRNA。将进行上述处理的单层细胞进行多细胞培养,分别接种A、B、C组(n=5)裸小鼠,经腹腔注射200μl生理盐水;D、E、F组(n=5)裸小鼠除将生理盐水替换为200μl的氟尿嘧啶(5-FU,2.5mg/ml)以外,其余操作分别与A、B、C组相同。观察抑制FAK表达对结肠癌移植瘤生长及其对化疗药物5-FU敏感性的影响;Western blotting检测裸鼠移植瘤中FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、Akt、NF-κB、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达。结果A、B组移植瘤的瘤重较D、E组显著增加(P<0.05);与A组相比,C、D、E、F组的瘤重均显著减轻(P<0.05),且F组与C组差异显著(P<0.05)。Western blotting检测显示,无论是否采用5-FU处理,FAKshRNA抑制均可使瘤体中p-FAK、Akt、NF-κB、Bcl-2的表达下调,Caspase-3表达上调。结论FAKshRNA抑制FAK表达能抑制裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体对5-FU的敏感性,有效逆转其多细胞耐药。FAK介导结肠癌多细胞耐药的机制可能与FAK-Akt-NF-κB信号通路的激活有关。

抑制黏着斑激酶经Akt/NF-κB信号通路逆转结肠癌多细胞耐药

目的探讨抑制黏着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)在结肠癌HT29细胞中的表达能否逆转结肠癌多细胞耐药。方法采用免疫细胞化学和Westernblot检测单层细胞中FAK、FAKp的抑制情况,用MTT法检测单层细胞和多细胞球对5-FU敏感性的变化,采用流式细胞术检测抑制FAK对多细胞球5-FU诱导凋亡和自然凋亡的影响,免疫细胞化学检测单层细胞、Westernblot检测多细胞球中FAKshRNA干扰对Akt、NF-κB、Bcl-2、Caspase-3的影响。结果靶向干扰FAK能显著抑制单层细胞FAK、FAKp蛋白表达。MTT结果显示,FAKshRNA干扰增强了单层细胞和多细胞球对5-FU的敏感性,特别是后者,且二者差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术结果显示,FAKshRNA干扰能够使多细胞球的自发凋亡率和5-FU诱导凋亡率显著增加(P=0.001,P=0.000),且两者之间差异显著(P=0.003)。在单层和多细胞球细胞中,FAKshRNA干扰后,Akt、NF-κB、Bcl-2的水平明显下调,而Caspase-3水平上调。结论抑制FAK表达能增强结肠癌多细胞球细胞对5-FU的敏感性,逆转其多细胞耐药性,其分子机制是通过FAK/Akt/NF-κB信号通路实现的。

一种新的心电图测量方法与实现

背景:现有心电图测量或者依赖于专业医生,或者依靠不够准确的自动识别方法,难以满足检测速度快、测试结果准确以及便于普通百姓应用等需求。目的:提出一种新的简便易行的心电图测量方法,并探讨其可行性。方法:采用delphi7.0软件开发平台编程实现算法和测试软件,将心电数据图形或心电图图像显示在屏幕上,用鼠标点击或触屏选取心电图上各波的顶点、启始点、终止点以及J点,测试软件根据点击或触屏信息计算出各波的参数,并作出初步诊断。结果与结论:心电图波形深度高度、时间、P-R间期、S-T段、Q-T段、P-P或R-R时间以及心电轴等参数测量准确,心率、心律和心电轴偏转诊断无误。提示该方法简单易学、实施便捷、高效准确快速,可明显改善专业医生的测量分析效率,并满足一般医生甚至普通老百姓的应用要求。

FAK靶向RNAi重组体的构建及其抗多细胞球体形成效应

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制黏着斑激酶(FAK)表达,并探讨其对结肠癌多细胞球体(MCSs)形成的影响。方法针对FAK cDNA序列设计并合成1对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其对照序列,经退火后插入pGenesil-1中构建重组体。经双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染结肠癌HT29细胞,并用G418稳定筛选,采用Real-time PCR和Western blot检测干扰前后FAK在HT29内的表达变化,并作细胞悬浮培养观测靶向干扰FAK对MCSs形成的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;靶向干扰FAK后,其mRNA和蛋白表达分别显著下调(79.20±2.97)%和(78.47±4.39)%,且细胞不易聚集形成MCSs。结论成功构建FAK靶向RNAi重组载体,显著地抑制FAK表达,并能有效地抑制MCSs的形成。

高校通识课程思政教育教学改革的实践与思考——以“饮食与养生”课程为例

高校通识课程具有知识面宽、辐射面广、选课学生众多、潜在影响大等特点,具备课程思政的良好基础。教学实践发现,要做到对学生知识传授和思想政治教育的协调平衡,取得潜移默化、润物细无声的课程思政效果,开展教学内容、教学方法、师资培养、新媒体应用等相关的课程体系建设就显得尤为重要。本文以我校通识课程《饮食与养生》为例,探寻课程思政的设计思路、实施方法,对深化通识课程思政教育教学改革具有重要的参考价值。

中药专业中医学基础教学中的几点体会

《中医学基础》（简称《中基》）是中医中药专业最重要的基础课之一，也是学生入学后初学中医药的第一门主干课程，它的学习质量的好坏直接影响到中药学、方剂学等一些后续课程的学习，因此，提高《中基》的教学质量就显得格外重要。基于这样的想法，笔者结合自身的教学实际，对《中基》的教学方式与方法作了一些有益的探索，现总结如下。

“饮食与养生”课程翻转课堂教学模式改革的实践与探索

在“饮食与养生”课程翻转课堂教学模式改革的实践中,我们要求学生课前自主选择学习内容、完成知识理解与把握,课堂上在老师引导和同伴互助下探究、解决疑难问题,开展深度学习,完成知识内化。结果表明,该教学方法能够增强学生的学习兴趣,激发学习热情,提高学习效率,培养团队协作精神,还有助于开阔教师的专业视野和思考维度,更新教学观念,达到教学相长的目的。

虚实一体化的实验室安全及应急处理演训虚拟仿真平台研发

实验室安全应急处理能力应该是每个高校师生必具的素养,乃至每个公民必备的技能。本文在对当前应急能力演训方面存在的问题分析基础上,提出了一种虚实一体化的实验室安全及应急处理演训虚拟仿真平台开发思路、研发具体内容及其实现路径,全面有效解决应急处理演训条件缺失不足问题,助推 “平安中国”的建设发展。虚实一体化的实验室安全及应急处理演训虚拟仿真平台开发可有效弥补当前应急处理演训平台缺乏的问题,可大大利于促进安全教育“五进”工作。

茎瘤芥PHYA基因与茎瘤芥茎膨大关系的初步研究

从茎瘤芥基因组中克隆了全长PHYA基因,构建了植物超表达载体,通过农杆菌GV3101转化茎瘤芥——永安小叶,得到PCR反应呈阳性的转基因株系。结果发现,在自然生长环境下,转基因植株发生了多种形态变异,如植株矮化、花期提前、叶片变大且色泽浓绿、转基因植株茎膨大延缓等。初步推断PHYA基因参与调控茎瘤芥植物茎膨大过程,过量表达PHYA基因可能会抑制茎膨大过程。

棉花WRKY转录因子研究进展

植物在生长发育过程中会受到体内转录因子的调控以适应环境的变化,而WRKY家族是植物中数量排名第二的转录因子大家族,该家族每个成员都有一个高度保守的WRKY结构域,能与W盒特异性结合,调控下游目标基因的表达,参与植物的胁迫反应、生长发育等。棉花在我国是仅次于粮食的第二大农作物,随着棉花全基因组测序完成,近年来棉花WRKY转录因子的全基因组分析和基因功能研究得以开展,本文对棉花WRKY转录因子研究进展的综述将对棉花WRKY转录因子的后续研究方向提供新视角。