miR-10b-5p在腹主动脉瘤患者血清的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-10b-5p(miR-10b-5p)在腹主动脉瘤(AAA)患者血清中的表达及临床意义。方法回顾性分析40例AAA患者(AAA组)和40例健康体检者(对照组)的临床资料,采用定量RT-PCR检测血清miR-10b-5p、IL-6和IL-10表达,分析miR-10b-5p表达与相关临床指标的相关性,并评估miR-10b-5p表达对AAA发生的诊断价值。结果与对照组相比,AAA组淋巴细胞计数、IL-10表达、TC和HDL-C水平降低,中性粒细胞计数、白细胞计数、miR-10b-5p和IL-6表达以及TG、LDL-C、脂蛋白a、D-D、CRP水平升高(P<0.05)。AAA组miR-10b-5p表达与LDL-C水平和IL-6表达呈正相关(r=0.271、0.642,P<0.05),而与HDL-C水平和IL-10表达呈负相关(r=-0.549、-0.456,P<0.05)。miR-10b-5p诊断AAA发生的AUC为0.909[95%CI(0.841~0.976),P<0.05],当取最佳诊断界值为1.007时,其对应的诊断灵敏度和特异度分别为80%和95%。结论miR-10b-5p在AAA患者血清中表达增高,与部分血脂及炎症因子指标相关,对AAA具有较高的诊断效能。

苦参碱通过miR-25-3p介导Klf4途径抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞炎症反应

研究苦参碱对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)炎症反应的影响,探讨其机制是否与miR-25-3p介导Krüppel样转录因子4(Krüppel like transcription factor 4,Klf4)途径有关。以TNF-α诱导建立HUVECs炎症模型。不同浓度苦参碱(0.625、1.25、2.5 mmol·L^(-1))作用24、48 h后,CCK-8方法检测细胞增殖。2.5 mmol·L^(-1)苦参碱处理48 h后采用实时荧光定量PCR检测TNF-α、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、Klf4 mRNA表达和miR-25-3p表达,免疫印迹法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、Klf4蛋白表达。转染anti-miR-25-3p至HUVECs,上述方法检测miR-25-3p对TNF-α诱导的细胞增殖及相关炎症因子的表达。进一步转染miR-25-3p至细胞,与苦参碱共同孵育,检测增殖及炎症因子、miR-25-3p和Klf4表达的变化。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与Klf4靶向关系。结果显示,苦参碱能抑制TNF-α诱导的HUVECs增殖,降低TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA和蛋白表达,提高Klf4 mRNA和蛋白表达、降低miR-25-3p表达;生物信息学分析显示,miR-25-3p与Klf4的序列存在特异性互补结合位点,双荧光素酶活性报告实验证实miR-25-3p在HUVECs中靶向负调控Klf4表达;抑制miR-25-3p表达可降低TNF-α诱导的细胞增殖、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA和蛋白表达;过表达miR-25-3p能够逆转苦参碱对TNF-α诱导的细胞增殖及TNF-α、IL-6、IL-1β、Klf4 mRNA和蛋白表达的作用。实验结果表明苦参碱通过miR-25-3p介导Klf4途径抑制TNF-α诱导的HUVECs炎症反应。