目的:探讨重楼皂苷A(Polyphyllin A,PPA)对结直肠癌细胞自噬的影响及其潜在机制。方法:选用结直肠癌RKO和HRT18细胞株作为细胞模型。用不同浓度PPA处理RKO细胞和HRT18细胞,MTT法检测细胞活力,筛选最佳实验浓度;集落形成实验检测细胞克...目的:探讨重楼皂苷A(Polyphyllin A,PPA)对结直肠癌细胞自噬的影响及其潜在机制。方法:选用结直肠癌RKO和HRT18细胞株作为细胞模型。用不同浓度PPA处理RKO细胞和HRT18细胞,MTT法检测细胞活力,筛选最佳实验浓度;集落形成实验检测细胞克隆能力;免疫印迹法检测微管相关蛋白LC3-Ⅱ表达、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)和雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达及其磷酸化;免疫荧光检测自噬体形成;分子对接分析PPA与AMPK相互间作用。结果:与0μmol/L组相比,PPA各浓度组细胞活力明显降低(P<0.05)。与0μmol/L组相比,PPA组两株细胞克隆形成能力明显降低(P<0.05);随着PPA浓度逐渐增加,两株细胞中LC3-Ⅱ表达明显上调(P<0.05),自噬体发生聚集,总AMPK、mTOR蛋白无明显变化(P>0.05),而磷酸化AMPK升高、磷酸化mTOR蛋白降低(P<0.05);PPA与AMPK存在直接结合作用。结论:PPA通过直接靶向活化AMPK诱导结直肠癌细胞发生自噬。展开更多
目的:本文旨在探讨蛋白磷酸酶2A (cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在顺铂(cisplatin,DDP)耐药的胃癌细胞中的表达及机制。方法:实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blotting检测患者胃癌组织及细胞中CIP2A表达情...目的:本文旨在探讨蛋白磷酸酶2A (cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在顺铂(cisplatin,DDP)耐药的胃癌细胞中的表达及机制。方法:实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blotting检测患者胃癌组织及细胞中CIP2A表达情况;CIP2A过表达质粒和siRNA分别转染SGC7901和SGC7901/DDP细胞,通过MTT法检测细胞对DDP的敏感性;流式细胞术用于检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR、Western blotting检测多药耐药相关蛋白的表达。结果:与DDP敏感型患者相比,CIP2A在DDP耐药胃癌患者中表达较高,而CIP2A高表达的DDP耐药胃癌患者的总体生存率低于CIP2A低表达的患者。在DDP耐药的胃癌细胞中敲低CIP2A能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并且也可以提高DDP耐药细胞对DDP的敏感性,反之,CIP2A过表达则导致DDP耐药细胞对DDP的敏感性降低,以上作用是通过CIP2A影响多药耐药相关蛋白在胃癌细胞中的表达实现的。结论:CIP2A在胃癌顺铂耐药的发生中发挥着关键作用,有望成为DDP耐药胃癌患者的一种新型治疗靶点。展开更多
文摘目的:探讨重楼皂苷A(Polyphyllin A,PPA)对结直肠癌细胞自噬的影响及其潜在机制。方法:选用结直肠癌RKO和HRT18细胞株作为细胞模型。用不同浓度PPA处理RKO细胞和HRT18细胞,MTT法检测细胞活力,筛选最佳实验浓度;集落形成实验检测细胞克隆能力;免疫印迹法检测微管相关蛋白LC3-Ⅱ表达、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)和雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达及其磷酸化;免疫荧光检测自噬体形成;分子对接分析PPA与AMPK相互间作用。结果:与0μmol/L组相比,PPA各浓度组细胞活力明显降低(P<0.05)。与0μmol/L组相比,PPA组两株细胞克隆形成能力明显降低(P<0.05);随着PPA浓度逐渐增加,两株细胞中LC3-Ⅱ表达明显上调(P<0.05),自噬体发生聚集,总AMPK、mTOR蛋白无明显变化(P>0.05),而磷酸化AMPK升高、磷酸化mTOR蛋白降低(P<0.05);PPA与AMPK存在直接结合作用。结论:PPA通过直接靶向活化AMPK诱导结直肠癌细胞发生自噬。
文摘目的:本文旨在探讨蛋白磷酸酶2A (cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在顺铂(cisplatin,DDP)耐药的胃癌细胞中的表达及机制。方法:实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blotting检测患者胃癌组织及细胞中CIP2A表达情况;CIP2A过表达质粒和siRNA分别转染SGC7901和SGC7901/DDP细胞,通过MTT法检测细胞对DDP的敏感性;流式细胞术用于检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR、Western blotting检测多药耐药相关蛋白的表达。结果:与DDP敏感型患者相比,CIP2A在DDP耐药胃癌患者中表达较高,而CIP2A高表达的DDP耐药胃癌患者的总体生存率低于CIP2A低表达的患者。在DDP耐药的胃癌细胞中敲低CIP2A能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并且也可以提高DDP耐药细胞对DDP的敏感性,反之,CIP2A过表达则导致DDP耐药细胞对DDP的敏感性降低,以上作用是通过CIP2A影响多药耐药相关蛋白在胃癌细胞中的表达实现的。结论:CIP2A在胃癌顺铂耐药的发生中发挥着关键作用,有望成为DDP耐药胃癌患者的一种新型治疗靶点。
