广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省 10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查 ,并按大致 10 %的采样率采集了 10 87头乳牛的新鲜粪便 ,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊 ,其中检出卵囊的阳性牛 92头 ,阳性率为 8.4 6 % ;有 7个场检出隐孢子虫卵囊 ,场阳性率为 70 %。这 7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是 10 .0 0 %、7.19%、6 .6 7%、9.80 %、6 .72 %、12 .76 %和 6 .72 %。调查发现 ,乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系 ,而且可能与气候有关 ;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)。

镰形扇头蜱唾液腺抑制消减杂交文库的构建和分析

【目的】寻找镰形扇头蜱吸血后较吸血前唾液腺差异表达基因。【方法】以抑制消减杂交法分别构建镰形扇头蜱半饱血雌蜱和吸血雄蜱唾液腺以pGEM-T-easy为载体的cDNA文库,并测序进行生物信息学分析。【结果】分别测得247个雌蜱有效EST序列和168个雄蜱有效EST序列,并预测雌蜱可能含有5′末端和3′末端的EST序列分别为25个和44个,雄蜱可能含有5′末端和3′末端EST序列分别为53个和74个。随机选择非重复的24个雌蜱序列和21个雄蜱序列以RT-PCR方法验证消减效果;在吸血后唾液腺中,雌蜱有13个基因表达上调或新表达,消减效率为54%,雄蜱有9个基因表达上调或新表达,消减效率为43%。对所测有效序列经BLAST分析,检索247个雌蜱序列获得141个匹配,匹配率为57%,其中有32个蜱基因,占141个匹配基因的23%;检索168个雄蜱序列获得125个匹配,匹配率为74%,其中有29个蜱基因,占125个匹配基因的23%。BLAST检索结果显示这些蛋白主要包括帮助蜱口器固定免疫调节蛋白、抗凝血蛋白、加强能量代谢的线粒体蛋白和促进基因转录的各种转录因子。【结论】这些蛋白主要是为了适应蜱吸血的生理过程及应变蜱因吸血而产生的免疫防御和排斥。

安氏隐孢子虫PCR检测方法的建立

经BLAST检索,以HSP70基因设计一对引物(5'＿CAATCGAATTGGATTCTTTGGTC＿3'和5'＿CACCTTCAAAT ACTTGAATAAGT＿3')对奶牛安氏隐孢子虫进行了PCR试验。结果显示所建立的PCR检测方法只能特异扩增隐孢子虫GD株DNA,而对照样本如微小隐孢子虫、弓形虫、圆孢子虫、纤毛虫、肝片吸虫、血矛线虫、莫尼茨绦虫、牛粪便以及大肠杆菌均为阴性;通过对6个浓度梯度的虫体DNA进行PCR反应,结果表明当样本中含有445个隐孢子虫卵囊的DNA时,即可扩增产生清晰可辩的条带。测得该序列长度为494bp,序列分析为牛型C.andersoni。表明该引物能特异扩增C.andersoni,敏感性较高,适合于奶牛安氏隐孢子虫的检测。

镰形扇头蜱组胺结合蛋白全长基因的克隆与分析

从本实验室构建的镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)抑制消减杂交cDNA文库中选择了1条可能编码组胺结合蛋白(HBP)的EST序列(RhHBP),以5′末端快速扩增的方法(5′RACE)扩增获得5′末端序列,拼接获得全长基因。DNAMAN(v4.0)、DNAstar(v4.0)和Genetyx(v4.0)软件分析阅读框、编码产物、序列同源性和系统进化,同时也分析了该基因在吸血前后雌雄蜱体内的表达情况。5′RACE法获得1条约400 bp的DNA片段,克隆测序,拼接获得1条长803 bp的全长基因,编码219个氨基酸残基。该基因在吸血雌蜱唾液腺内特异表达,初步分析该基因是组胺结合蛋白基因。

伊氏锥虫、马媾疫锥虫、布氏锥虫、刚果锥虫的18S rDNA部分序列测定与系统发育关系

对伊氏锥虫(Trypanosomaevansi):新疆株(XJCA)、湖北株(HBM)、云南株(YNB)、广东株(GDB2);马媾疫锥虫(Trypanosomaequiperdum)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)、刚果锥虫(Trypanosomacongolense)提取基因组DNA,根据已报道的伊氏锥虫株18SrDNA基因序列设计合成引物,用PCR扩增了锥虫虫株基因组DNA,伊氏锥虫新疆株、湖北株、云南株、广东株、布氏锥虫、刚果锥虫均为373bp的片段;马媾疫锥虫为372bp的片段,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化,纯化后PCR产物经连接、转化后测序,将测得的序列用DNAMAN软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较,并绘制了系统发育进化树。结果与国外AJ009153、AJ223564、D89527株同源性达到99%～100%,与另外11株同源性75%。本研究为锥虫分子流行病学研究及分类研究打下基础。

镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅱ基因的克隆及其分布

本试验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST中筛选了1个含polyA尾的基因序列,经5′-RACE方法得到该基因全长序列。经同源性比较,该基因预测的氨基酸序列与长角血蜱肌钙蛋白（GI：14041807）的同源性为84.47%,肌动蛋白结合位点位于147～167氨基酸处,且与长角血蜱肌钙蛋白肌动蛋白结合位点完全相同,表明该基因是镰形扇头蜱肌钙蛋白基因。以镰形扇头蜱基因组DNA为模板扩增到编码肌钙蛋白的基因组序列,序列分析表明该序列不含内含子。RT-PCR分析表明该基因在镰形扇头蜱的卵及其幼蜱、若蜱、成蜱的壳、唾液腺和肠均有表达。

镰形扇头蜱中2个新基因的分离、克隆与序列分析

为了对镰形扇头蜱中的生物活性分子进行相关研究，从中得到有价值的抗蜱候选分子，本试验从已构建的镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库中，随机克隆得到100个EST（expressed sequence tag）序列。其中8号和2号序列带有完整的polyA尾，根据此2序列设计引物，经5′RACE（rapid amplification of cDNA ends）得到2序列的全长基因，分别命名为RhHp1和RhHp2，RhHp1基因全长1823bp，ORF（开放阅读框）为1521bp，编码区从110～1631bp，编码506个氨基酸。RhHp2基因全长1002bp，ORF为848bp，编码区从31～879bp，编码282个氨基酸。经蛋白序列分析，RhHp1基因预期编码的蛋白与GenBank中所登陆的序列同源性均小于20％，RhHp2与其他序列同源性最高可达50．81％。经RT（reverse transcription）-PCR分析，与其他各发育阶段相比，RhHp1基因在镰形扇头蜱卵中表达量较低；RhHp2基因在镰形扇头蜱若蜱中低度表达，在其他各发育阶段表达量较高。结果表明，RhHp1和RhHp2基因为镰形扇头蜱唾液腺中分离出来的2个新基因，其表达量随着蜱的发育阶段而发生改变。此2个新基因所编码蛋白的结构和具体的分子生物学功能有待深入研究。

我国出口观赏鸟血液原虫的调查与分析

通过显微镜检查对来源于全国各地的37种出口观赏鸟进行了血液原虫调查。共检查血样1144份 ,结果为 :血液原虫的检出率为2.1 % ,主要是血变原虫和/或疟原虫。感染季节以秋冬两季为主 ,易感鸟品种主要是白腰文鸟、红喉歌鸲、蓝歌鸲、暗绿绣眼鸟、豆冠、白燕、情侣鹦鹉。

亚洲璃眼蜱差异表达新基因P18的克隆和鉴定

为了进行抗蜱和蜱传病疫苗的研究,本实验对亚洲璃眼蜱雌蜱吸血前后唾液腺消减文库中获取的一个全长编码基因P18进行了研究。该基因全长519bp,共编码170个氨基酸,分子量为18.36Ku,等电点为4.28。BLAST分析表明,该基因预测的氨基酸与肩突硬蜱、篦子硬蜱唾液腺的抗凝血小肽有30%～40%低度同源性。将该基因亚克隆到pET-32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,重组融合蛋白以可溶性形式高效表达。将可溶性重组蛋白免疫小鼠后获得的抗血清。经免疫印迹分析表明,该重组蛋白抗体可特异性的识别半饱雌蜱唾液腺中的天然蛋白抗原,而未吸血雌蜱唾液腺中则不显现特异条带。RT-PCR结果进一步证实,该基因在蜱吸血后的唾液腺中差异表达。

镰形扇头蜱金属蛋白酶基因全长的克隆和序列分析

本研究从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST序列中筛选了一个含polyA尾的基因序列,经5′-RACE方法得到该基因全长序列。cDNA全长1 566 bp,编码区为23 bp～1 456 bp,编码478个氨基酸残基,该蛋白的预测分子量约为55 Ku,等电点为8.87。RT-PCR分析表明,该基因在镰形扇头蜱未吸血成蜱、半饱血成蜱以及唾液腺、肠中表达。

镰形扇头蜱—新基因的分离、克隆、表达和抗蜱免疫保护作用

目的分离、克隆镰形扇头蜱一新基因。方法本实验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的100个EST(ExpressedSequenceTag)序列中选取一个带有polyA尾的序列,经5’RACE(RapidAmplificationofcDNA Ends)得到此序列的全长基因,命名为RhHp2,基因全长1002bp,开放阅读框(ORF)从31bp至879bp,共848bp,编码282个氨基酸。经序列比较,RhHp2基因与其它序列在核苷酸水平上基本无同源性,但在氨基酸水平上与其它物种同源性最高可达50.81%。RhHp2基因连接于PET32a(+)载体后克隆于表达菌BL21,1mMIPTG诱导表达,产生分子量约为55kD的融合重组蛋白,并以不溶性包涵体形式存在。经纯化和体外复性的重组蛋白三次免疫新西兰兔后,将镰形扇头蜱未吸血成蜱和若蜱接种于此免疫兔耳,并对接种48h后的蜱上体数、蜱的饱血数量、饱血时间、饱血重量等进行记录。结果发现蜱的吸血行为受到一定影响,若蜱在48h的减虫率(上体数减少)为58%,在整个吸血过程中的死亡数增加,成蜱的饱血体重显著降低。结论此结果表明RhHp2基因的重组表达产物具有一定的免疫保护作用。

镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ(TnI)的cDNA并进行表达及鉴定。方法用RT-PCR方法从镰形扇头蜱总RNA中克隆编码肌钙蛋白Ⅰ的cDNA片段,将该cDNA连接到pET-32a(+)表达载体,并转入宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Western blot分析。结果获得镰形扇头蜱的eDNA,并在大肠杆菌中以包含体的形式高效表达,Westem blot分析表明,抗TnI重组蛋白兔血清可以识别蜱体内的TnI,并在22 kDa和36 kDa之间有两条带。结论蜱体内可能同时存在两个大小不等的TnI,为进一步的研究打下基础。

作业成本管理的应用

本文主要从企业实际出发,在分析具体业务的基础上,分别从企业的产品定价决策、供应商选择决策、客户决策等三个方面探讨作业成本管理在企业中的应用。

镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆与表达分析

本实验以镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消减杂交cDNA文库中的EST数据为基础,应用RACE方法从镰形扇头蜱体内克隆出一个IgG(IgG binding protein,IGBP)基因的全长序列,该基因全长683bp,编码178个氨基酸,预测分子量为19.5kDa,经同源性比较该基因与具尾扇头蜱的IGBP-MB基因序列的同源性高达92%。用RT-PCR方法分析了该基因表达的性别特异性、各个器官、不同发育阶段的表达情况,结果表明,该基因表达没有性别特异性;IGBP基因在唾液腺、壳这2个器官有所表达,但在肠中却没有表达;在蜱的各个发育阶段均有表达。

甜菜碱与鸡球素、球痢灵配伍对鸡球虫的疗效试验

采用均匀设计方法 ,按U54 均匀设计表设计甜菜碱与鸡球素、甜菜碱与球痢灵的配伍剂量 ,研究甜菜碱与鸡球素、甜菜碱与球痢灵抗球虫的最适配伍剂量 ,并设鸡球素 (5 0 0mg/kg)、球痢灵 (12 5mg/kg)和球佳 (1mg/kg)药物对照组及感染不给药和不感染不给药对照组。试验结果表明 :球佳的抗E .tenella的作用强 ,盲肠病变值仅为 6 .75 ,抗球虫指数 (ACI)高达 180 .75 ,而鸡球素、球痢灵的作用较差 ,其盲肠病变值分别为 2 4 .0、2 5 .5 ,ACI为 12 6 .5 7、12 6 .71;但甜菜碱与鸡球素、球痢灵配伍后 ,配伍各组的盲肠病变值降低、平均体增重和抗球虫指数升高 ,显示甜菜碱在一定程度上能提高鸡球素和球痢灵的抗E .

基于卷积神经网络的人群计数算法研究

随着城市监控网络的完善,对人群图像的计数处理正产生巨大价值。传统人群计数方法存在准确度低,无法处理高遮挡图像,受光影影响大等问题。卷积神经网络在人群计数上表现出色,但仍存在精确度较低,无法排除背景图像干扰等问题。为提高对复杂人群图像的感知能力,减少背景区域对统计的影响,并同时生成人群密度特征图像,在卷积神经网络的基础上增加空间与通道注意力模型,对不同通道和不同位置的图像赋予不同的权重以增加目标区域的影响力,同时更换全连接层为上采样层,输出与输入图像大小相同的人群密度特征图像。实验中使用ShanghaiTech数据集以及NWPU-Crowd数据集进行训练与测试,在与MCNN、CSRNet等网络的比较结果中显示,使用了注意力模型与全卷积神经网络的算法在平均绝对值误差与均方误差两项数据上有较好的结果,表示该算法在高密度高遮挡的人群图像计数上有着更高的精确度。

基于耦合图案化石墨烯的宽带可调太赫兹超材料吸收器

基于超材料的太赫兹吸收器在开关、调制和检测方面展现出了极大的应用前景,目前已提出了多种方案来有效操纵太赫兹波。但是大多数设计的结构单元吸收性能较差且难以实现吸收响应的动态可调。本文提出了一种基于耦合图案化石墨烯结构的宽带可调太赫兹超材料吸收器,该器件由石墨烯-介质-金属的三明治结构组成。仿真结果表明:所提出设计的吸收效率在90%以上的带宽达到了2.9 THz,并分别在6.78 THz和8.44 THz处达到了完美吸收,相应的吸收率为99.12%和94.31%。通过改变石墨烯的费米能级,能够对宽带吸收光谱的幅值在相同的频率范围内实现主动可调。引入阻抗匹配原理和表面电流分布分别研究了形成宽带吸收光谱的物理机制。该吸收器还具备在宽入射角范围内仍保持良好吸收的性能。因此,本文所提出的吸收器结构设计为后续智能化、集成化和小型化的太赫兹超材料功能器件的研究提供了新的途径。

参加医学大学生创新性训练项目的实践与体会

"大学生创新性训练项目"是高等院校本科科研教学的重要组成部分,旨在打破传统的教育方法,创建以"学生主动发现问题、协商解决问题"为核心的教育模式,充分调动学生的主观能动性,激发其创新意识和团队合作精神,从而全面提升其创新能力与实践能力,为今后的科研之路打下基础。本文根据作者所参加的一项医学校级大学生创新性训练项目——乳酸菌对高脂SD大鼠胆固醇代谢的影响,在总体概括该项目情况的基础上,浅谈了参加大学生创新性训练项目的实践与体会。

基于化学核心素养的“侯氏制碱法”微课设计研究

以化学核心素养的培养为落脚点,对人教版高中化学选修二《化学与技术》第一章第三节纯碱的生产中的“侯氏制碱法”进行了教学设计,并设计成微课作品,以期为一线化学教师和学生的教与学提供实例与参考。