辣根素对粉尘螨杀灭活性及作用机制研究

目的研究辣根素对粉尘螨的杀灭活性及体内神经、解毒代谢酶系功能的影响。方法采用熏蒸法和玻片浸渍法测试辣根素对粉尘螨的杀灭活性,以苯甲酸苄酯和邻苯二甲酸二丁酯作为阳性对照。采用生化方法对粉尘螨体内总蛋白浓度、乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽S-转移酶、单胺氧化酶、Ca^(2+)-ATP酶活性进行测定。结果辣根素对粉尘螨有良好的杀灭活性,当浸渍浓度达到1.6 mL/L时,72 h校正死亡率可达100%,且熏蒸效果明显优于浸渍,玻片浸渍杀螨效果明显优于阳性对照组(P<0.05)。辣根素处理后,螨体总蛋白浓度、Ca^(2+)-ATP酶、谷胱甘肽S-转移酶活性先激活后抑制,而乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶活性受到一定程度的抑制。螨体一系列酶活性变化,会影响神经冲动的产生与传导和物质代谢的改变,导致螨虫死亡。结论辣根素对粉尘螨具有良好的毒杀作用,可作为一种新型杀螨物质,具有一定的开发应用前景。

草乌甲素治疗过敏性哮喘小鼠气道炎症的初步探讨

目的探讨草乌甲素治疗过敏性哮喘小鼠气道炎症的效果。方法将SPF级Balb/c雌鼠随机分为6组(每组10只),(1)阴性对照组(NC组),(2)哮喘组(AS组),(3)草乌甲素低剂量治疗组(BLA-L组),(4)草乌甲素中剂量治疗组(BLA-M组),(5)草乌甲素高剂量治疗组(BLA-H组),(6)地塞米松阳性对照治疗组(Dex组)。OVA致敏并激发制备过敏性哮喘小鼠模型并用草乌甲素进行治疗,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE、总IgG的含量和肺泡灌洗液(BALF)上清细胞因子IL-4、TNF-α与巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平;计数BALF中的嗜酸性细胞、淋巴细胞及巨噬细胞;苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肺组织病理改变; Western blot法测定肺组织中NF-κB1以及PKC-δ的表达。结果与哮喘组相比,BLA治疗可显著降低血清总IgE和IgG水平(P <0. 01),并呈现剂量依赖性;且BLA-H组效果最显著;不同剂量的BLA治疗其BALF中IL-4、TNF-α与MCP-1水平显著低于AS组(P <0. 01);细胞计数结果显示,不同剂量的BLA处理可明显降低嗜酸性粒细胞、淋巴细胞以及巨噬细胞的数量,剂量越高,效果越明显(P <0. 01); HE染色结果显示,BLA治疗后能显著减轻肺部炎性细胞浸润,且结构完整性明显改善,其中BLA-H组效果最明显; Western blot检测结果表明,BLA处理可引起PKC-δ/NF-κB1表达下调。结论草乌甲素可能通过抑制PKC-δ/NF-κB信号从而缓解过敏性哮喘小鼠的气道炎症反应。

草乌甲素对LPS诱导的RAW264.7细胞抗炎作用及相关机制研究

目的探究草乌甲素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用及相关机制。方法使用不同浓度的草乌甲素处理RAW264.7细胞24 h,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测RAW264.7细胞活力并筛选草乌甲素对RAW264.7细胞活性的安全剂量范围;使用最大安全剂量的草乌甲素统一预处理RAW264.7细胞2 h,再用LPS刺激细胞,于不同药物作用时间点分别收取上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α与巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平;Western blot法检测草乌甲素对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS、COX-2蛋白表达水平及对NF-κB、MAPK信号通路活化的影响。结果草乌甲素在小于150μg/mL时对RAW264.7细胞活力没有显著影响;ELISA结果显示与LPS组相比草乌甲素在各作用时间点均能有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6与MCP-1的含量(P<0.05),其中草乌甲素在作用时间分别为30 h、5 h时对TNF-α和IL-1β的抑制作用最明显(P<0.05);WB检测结果表明草乌甲素能显著抑制iNOS、COX-2、TLR4的表达以及NF-κB和MAPK通路的活化(P<0.05),其中草乌甲素作用时间48 h时抑制作用最明显(P<0.05)。结论草乌甲素可能通过抑制TLR4的表达以及NF-κB和MAPK的活化减少炎症因子的释放从而发挥抗炎作用。

linc00619通过AKT/ERK信号抑制BEAS-2B细胞的增殖和迁移

目的:探讨长链非编码RNA 00619(linc00619)在人肺上皮细胞BEAS-2B中的生物学作用。方法:用RNA原位杂交对linc00619进行BEAS-2B亚细胞定位;采用CRISPR/Cas9方法构建linc00619慢病毒敲除载体,CCK8和Transwell试验检测linc00619敲除对BEAS-2B增殖和迁移的影响;lncRNA芯片检测linc00619敲除后差异表达的mRNAs并进行KEGG富集分析;Western blot检测AKT、MEK和ERK等增殖相关分子。结果:linc00619定位于细胞质。linc00619敲除促进了BEAS-2B的增殖和迁移。linc00619敲除后得到了3461个差异表达mRNAs。共有922个mRNAs被富集进KEGG信号通路,其中MAPK信号是显著富集的信号之一。Western blot证实,linc00619敲除活化了AKT和ERK。结论:细胞质表达的linc00619通过抑制AKT/ERK信号抑制了BEAS-2B的增殖和迁移。

Opa相互作用蛋白5在胰腺癌中的表达及其对PANC-1细胞增殖的影响

目的探索Opa相互作用蛋白5(OIP5)在胰腺癌中的表达及其对PANC-1细胞增殖的影响。方法通过数据库分析OIP5在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达;用实时定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测人胰腺癌细胞系MIAPaCa-2、PANC-1、KP-3、BxPC-3细胞中OIP5 mRNA和蛋白表达;构建OIP5基因沉默质粒的慢病毒(pGCSIL-shOIP5)和对照质粒慢病毒(pGCSIL-shCtrl),分别感染PANC-1细胞,分为OIP5基因沉默组和shCtrl对照组,5 d后采用RT-qPCR和Western blot测定慢病毒敲低效率,流式细胞计量术检测细胞凋亡;OIP5基因沉默组和shCtrl对照组连续5 d进行MTT检测和细胞计数;OIP5基因沉默组和shCtrl对照组孵育10 d形成集落,Giemsa染色分别集落总数。结果胰腺癌中OIP5 mRNA表达显著高于正常胰腺组织(P<0.05),OIP5高表达患者的总存活率显著低于OIP5低表达患者(P<0.05),且其无病生存率也显著降低(P<0.05);OIP5在MIAPaCa-2、PANC-1和KP-3中表达较高,而在BxPC-3细胞系中的表达较低;MTT检测结果显示OIP5沉默在第4和第5天显著降低了PANC-1细胞的增殖速率(P<0.01);OIP5沉默后细胞集落数(平均为9个)显著低于shCtrl对照组中的数量(平均为40个)(P<0.01);OIP5沉默后PANC-1细胞凋亡比例为8.3%显著高于shCtrl的4.5%(P<0.01)。结论OIP5在胰腺癌细胞系中异常高表达,OIP5基因可调控胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡以及集落形成,提示OIP5可能在胰腺癌发病机制中作为癌基因发挥作用,从而为胰腺癌的靶向治疗提供了潜在的生物标志物。

亚洲日月蛤多糖的分子检测及其干预小鼠日本血吸虫肝纤维化的初步研究

目的检测亚洲日月蛤多糖的分子特性,探讨其在干预小鼠日本血吸虫肝纤维化中的作用。方法提取并纯化亚洲日月蛤多糖,采用凝胶排阻法对其分子量进行测定,应用PMP柱前衍生法对其单糖组成进行检测。取50只雌性BALB/c小鼠,随机分成5组,每组10只小鼠。A组给予生理盐水灌胃,B、C、D、E组小鼠分别经腹部皮肤攻击感染血吸虫尾蚴(30±2)条/只;饲养第8周末,C、D、E组小鼠分别给予多糖、吡喹酮及多糖+吡喹酮治疗,B组小鼠给予生理盐水;第16周末,收集小鼠肝脏及血清,通过HE染色观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变及肝纤维化情况,采用ELISA法检测血清IFN-γ、IL-13水平。结果亚洲日月蛤多糖相对分子量为11.7kDa,其多糖主要由葡萄糖组成。C、D组和E组小鼠血清IFN-γ浓度显著高于对照组(F=63.525,P<0.01),C、D组和E组小鼠血清IL-13浓度显著低于B组(F=99.788,P<0.01)。HE染色显示,B、C、D、E组小鼠肝组织均见不同程度虫卵结节和纤维化改变,A组小鼠肝脏正常,E组虫卵结节较B组少(x^2=7.875,P<0.05)。结论亚洲日月蛤多糖具有明显的抗日本血吸虫肝纤维化作用,与吡喹酮联用效果更好。