高灵敏度血清雌二醇化学发光免疫分析方法的建立

目的以直接化学发光法建立一种高灵敏度的血清雌二醇测定方法,并对该方法的测定能力进行初步确认。方法分别建立直接竞争和间接竞争两种测定方法,并进一步对一步法及顺序加样法两种反应模式进行对比。在选定的最优条件下,对建立的方法的线性、检测限(空白限LoB、检出限LoD、定量限LoQ)、准确度、精密度和交叉反应性进行确认。并就血清样本的测值与进口化学发光试剂的检测结果进行比对。结果本检测方法在20~4000pg/mL范围内校准曲线的相关系数r为0.9990,空白限为2.1pg/mL,检出限为6.2pg/mL,定量限为10pg/mL,批内、批间精密度均小于3%,回收率为97.3%,与E2结构相关的类固醇的交叉反应率均小于2%。本方法与进口化学发光试剂的155份血清样本的E2测定结果的相关系数r为0.9922。结论成功建立了高灵敏度血清雌二醇(E2)化学发光免疫分析方法,本方法的各项性能满足实验室的要求,可为临床提供可靠的测定结果。

初步探求酶标记抗体的合适比例

目的探求酶标记抗体时的最佳比例,以用于体外诊断的实践。方法辣根酶与CEA抗体按照质量比10∶1~1∶10进行连接,着重考察各酶结合物的样品检测情况和在洗涤过程中游离酶的干扰规律,最终找出了酶标记抗体的适宜趋势。结果当抗体与辣根酶的质量比达到5到10倍时,计数高于S0的样品的个数最多,实现了通过标准曲线方程反算出浓度的理想状态。结论在标记抗体的过程中,只需五分之一甚至十分之一的酶量已能够满足需求,过多反而会增加干扰的风险。

吖啶酯直接标记测定血清总T3化学发光免疫分析方法的建立和初步验证

目的建立以吖啶酯为标记物检测三碘甲状腺原氨酸(T 3)的磁微粒化学发光免疫分析方法并初步验证该方法作为体外诊断试剂应用的能力。方法通过二抗将抗-T 3抗体固定在磁微粒上,比较了平衡竞争法和顺序加样法两种反应模式,用最终选定的条件对该方法的精密度、定量检出限、回收率、线性范围、抗干扰能力进行了验证,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行了比对。结果本方法最终采用顺序加样法的反应模式,高、低水平两份样本变异系数分别为4.0%和3.9%,0.4nmo/L的样本满足定量检出限的要求,两份样本的回收率分别为99.8%和105.1%,样本水平在0.5~12nmol/L的范围内满足线性要求,血红蛋白<2.5mg/mL、胆红素<0.3mg/mL、三酰甘油<10mg/mL、胆固醇<10mg/mL时对血清样本测量无干扰。与进口全自动化学发光试剂同时测定69份血清样本,二者测定结果的相关系数r为0.992。结论成功建立了血清总T 3化学发光免疫分析法,可以满足临床诊断的要求。

吖啶酯标记建立血清透明质酸磁微粒化学发光检测方法

目的建立以吖啶酯为标记物检测透明质酸(HA)的磁微粒化学发光免疫分析方法。方法采用吖啶酰肼标记的HA作为示踪物,通过抗体将透明质酸结合蛋白固定在磁微粒上,建立了基于竞争法原理的免疫分析方法,研究了该方法的空白限、检出限、线性范围、重复性、批间差、回收率、和抗干扰能力,建立了正常人参考区间,并与放射免疫分析药盒的检测结果进行了比对。结果空白限为6.95ng/mL,检出限为16.97ng/mL,线性范围为25-1000ng/mL,重复性CV小于4%,批间差CV小于5%,平均回收率95.9%,血红蛋白浓度<2.5mg/mL、胆红素浓度<0.3mg/mL、中长链脂肪乳<10mg/mL时对血清样本测量无干扰,正常人参考区间为<106.6ng/mL。检测84例临床血清标本,与放射免疫分析药盒的相关性为0.972。结论成功建立了HA化学发光免疫分析法,可以满足临床诊断的要求。

定量检测抗甲状腺过氧化物酶抗体的吖啶酯化学发光法的建立及初步应用

目的建立一种用于定量测定血清中抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法并初步进行临床验证。方法用TPO抗原偶联磁微粒,鼠抗人IgG抗体标记吖啶酯,建立间接法的反应模式。对该方法的线性范围、精密度、检出限、准确度进行测定,并与罗氏的电化学发光试剂进行比对。结果在5~1000 IU/mL范围内,线性相关系数r为0.9999,检出限为0.224 IU/mL,两份样本的精密度(CV)分别为3.1%和4.3%,两份样本的准确度分别为1.1%和3.0%。经检测185例正常健康人,将参考区间定为小于30.32 IU/mL。与罗氏的电化学发光试剂平行测定84份血清样本,两者检测结果的相关系数r为0.975,显著性检验P<0.01,相关性良好。结论建立了定量测定血清中Anti-TPO的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法,满足临床检测要求。

反三碘甲状腺原氨酸化学发光免疫方法的建立

目的建立一种检测反三碘甲状腺原氨酸(rT3)的化学发光免疫分析方法。方法采用吖啶酯-rT3结合物作为信号标记物质,rT3抗体-磁微粒作为固相载体,建立小分子竞争法免疫分析体系,分析其空白限、线性范围、准确度、重复性、批间差和特异性等性能指标。结果空白限为0.07 ng/mL,线性范围为0.2~10.0 ng/mL,重复性CV不超过8%,批间差CV不超过15%,与TT3和TT4均无交叉反应,试剂在37℃7d后发光值降幅为10%以下,检测70例临床血清标本,测定结果与上市试剂的相关性为0.980。结论成功建立了rT3化学发光免疫分析方法,该方法具有检测快速、检测结果准确的特点,适用于临床诊断应用。

雌二醇化学发光免疫测定法中置换剂的影响和优化

目的探讨雌二醇化学发光免疫测定法中置换剂的影响和优化。方法采用竞争一步法原理建立E2化学发光免疫分析检测体系。对置换剂达那唑和甲二氢睾酮进行考察和优化,按照选定的两种置换剂的水平进行混合使用,对空白限、线性、特异性进行评估,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行对比。结果本系统线性范围为20~4 000pg/mL,最低检出限为5.1 pg/mL,与雌二醇类似物的交叉反应率均小于2%。与进口全自动化学发光试剂同时测定183份样本的E2水平,二者测定结果的相关系数r为0.9981,平均相对偏差为0.1%。结论评估了两种E2的置换剂,并优化了其使用水平。混合使用这两种置换剂可以达到理想的效果。混合使用置换剂的方法也为其他小分子的免疫诊断提供了一种置换剂使用的思路。

糖类抗原50化学发光免疫分析方法的建立及评价

目的建立以异硫氰酸荧光素(FITC)单抗包被磁微粒、吖啶酯为发光标记物的检测糖类抗原50(CA50)的磁微粒全自动化学发光免疫分析方法。方法根据双抗体夹心法原理,选择抗-FITC单克隆抗体偶联磁微粒,FITC标记一株抗-CA50单克隆抗体,吖啶酯标记另一株抗CA50单克隆抗体,建立CA50化学发光免疫分析方法,同时对该方法的空白限、检出限、线性范围、准确度、重复性、干扰进行了验证,并与迈瑞全自动化学发光试剂检测结果进行了比对。结果本方法最终采用两步法的反应模式,空白限为0.03U/mL,检出限为2U/mL,线性范围为4.0~500.0U/mL,样本的回收率为99.39%,高、低两份样本变异系数分别为4.05%和2.16%,与迈瑞全自动化学发光免疫测定系统同时测定131份样本,回归方程为Y=1.0177 X-3.0827,r=0.993。同时发现样本中的荧光素钠(FITC-Na)高于2μg/mL时会对本方法造成干扰。结论成功建立了糖类抗原50的吖啶酯全自动化学发光免疫分析方法,各项指标均满足临床检测的要求,具有一定的临床应用价值。