Pkd1^(f/f):Cre小鼠在自然状态下的发病情况研究

目的对Pkd1^(f/f):Cre转基因小鼠的发病特点和病理特征进行研究,为临床研究提供依据。方法选用自然状态下发病的Pkd1^(f/f):Cre转基因小鼠,通过对肝、肾组织进行解剖,观察超声多普勒下的肝形态,测定脏器系数,HE染色观察肝肾组织的病理情况,免疫组化分析肝肾PCNA、E-cadherin蛋白的表达变化。结果与Pkd1^(f/f)组相比,Pkd1^(f/f):Cre组的肝重量及系数极显著升高(P<0.01),体重在Pkd1^(f/f):Cre与Pkd1^(f/f)组间比较无差异;肾重量及系数在Pkd1^(f/f):Cre与Pkd1^(f/f)组间比较无显著性差异;其中与肝功能相关的因子ALT和AST的水平,Pkd1^(f/f):Cre组显著高于Pkd1^(f/f)组(P<0.01);而肾功能相关的因子BUN与CREA、UA水平在Pkd1^(f/f):Cre组与Pkd1^(f/f)组间无差异(P>0.05)。结论Pkd1^(f/f):Cre小鼠会发生肝囊肿,损害肝功能,但肾未出现囊肿的情况。

不同病理因素诱导的大鼠心肌肥大模型心肌表型特征及表达谱

目的建立主动脉弓缩窄(TAC)、异丙肾上腺素(ISO)诱导及自发性高血压(SHR)3种大鼠心肌肥大(cardiac hypertrophy,CH)模型,比较各模型病理特点及其心肌转录组差异。方法选择雄性SD和SHR大鼠(对照组为WKY)建立3种模型。TAC诱导模型分为假手术组(n=5)和TAC组(n=14),TAC组进行TAC手术,假手术组进行假手术操作,术后饲养5周;ISO诱导模型分为正常对照组(n=5)和ISO组(n=11),ISO组颈背部皮下多点连续注射ISO 5 mg/(kg·d),正常对照组注射等量生理盐水,每日2次,连续10 d;SHR诱导模型分为WKY组(n=5)和SHR组(n=5),正常饲喂至16周龄。通过检测大鼠超声心动图和血浆ANP含量以判定成模,统计大鼠存活率并进行血压、血流动力学以及心脏质量指数测定。取大鼠心脏组织进行HE、Masson和麦胚凝集素(WGA)病理学染色,进行心肌转录组测序,筛选差异基因并分析其通路,以实时荧光定量PCR验证测序结果。结果各模型组大鼠血浆ANP含量较其对照组均显著性升高(P<0.05),TAC和ISO模型大鼠IVSd、IVSs、LVPWd和LVPWs均显著增加(P<0.05),SHR大鼠LVSd显著增厚,而LVIDd、LVIDs却显著降低(P<0.05)。各模型组大鼠存活率为:SHR(100%)、ISO(81.82%)和TAC(35.71%)。TAC组、ISO组大鼠血压较对照组均显著下降(P<0.05),而SHR大鼠则显著升高(P<0.01)。各模型组大鼠HW/BW、LVW/BW比值均显著增大(P<0.05)。血流动力学结果显示,TAC和ISO模型大鼠HR、LVESP、LVEDP、dP/dtmax显著降低(P<0.01),而SHR大鼠各指标均显著性增加(P<0.01)。TAC和SHR模型大鼠心肌组织均形成不均匀网状的反应性间质纤维化,ISO大鼠心肌组织有大面积修复性间质纤维化。TAC和ISO组大鼠心肌横截面积均显著性增加(P<0.05),SHR大鼠无显著性差异。TAC、ISO、SHR模型测序分别获得175、568和279个差异表达基因,自噬体、癌症相关信号通路和PI3K/AKT通路在3种模型共同富集,而药物反应、松弛素信号和JAK/STAT信号等通路则是模型特异性富集,实时荧光定量PCR验证结果与测序结果基本一致。结论本研究成功建立了TAC、ISO诱导和自发性高血压大鼠CH模型,不同诱导因素对模型的存活率、血压、血流动力学、心肌肥大程度、组织病理特征及基因表达谱等有着不同程度的影响。

D-半乳糖诱导的衰老大鼠心脏S100A8/A9及相关炎症通路基因表达的研究

目的:探讨D-半乳糖(D-Gal)诱导的衰老大鼠模型心脏差异基因表达的变化,并对其中S100钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)及其下游p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)通路关键因子进行验证。方法:(1)将8~10周龄SD大鼠随机分为正常对照(control)组和D-Gal组,每组6只。D-Gal组大鼠每天颈背部皮下注射D-Gal(150 mg/kg),control组大鼠注射相同体积的生理盐水。Morris水迷宫检测学习记忆能力;测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平;超声心动图测定心功能变化;进行心脏HE、Masson、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和二氢乙啶染色,并用透射电镜观察线粒体超微结构。转录组测序分析大鼠心脏基因表达差异,qRT-PCR和Western blot检测大鼠心肌组织衰老标志基因、S100A8/A9、p38 MAPK和NF-κB通路相关因子的mRNA和蛋白表达。(2)利用D-Gal(10 g/L)诱导建立H9C2心肌细胞衰老模型,并用S100A8/A9抑制剂帕奎莫德(paquinimod)干预,检测衰老相关指标和S100A8/A9下游炎症通路相关因子的mRNA和蛋白表达。结果:与control组相比,D-Gal组大鼠出现学习记忆能力障碍,血清SOD和CAT水平显著降低(P<0.01);D-Gal组大鼠射血分数和短轴缩短分数显著降低(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,纤维断裂和炎性细胞浸润,纤维化面积、SA-β-Gal和活性氧含量均显著增加,线粒体结构发生变化,且细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)、CDKN2A和P53的mRNA表达较control组也显著上调(P<0.01);转录组测序分析显示,S100A8和S100A9的mRNA和蛋白水平在衰老大鼠心脏中显著上调,同时p38 MAPK和NF-κB磷酸化蛋白水平及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α等炎症因子的mRNA表达水平也显著升高(P<0.05或P<0.01)。D-Gal持续刺激可诱导H9C2细胞衰老,伴随S100A8/A9的表达增高,而paquinimod可显著减少D-Gal诱导的心肌细胞SA-β-Gal阳性率和衰老标志基因表达,并抑制p38 MAPK和NF-κB磷酸化活化及下游炎症因子表达(P<0.05或P<0.01)。结论:S100A8和S100A9通过诱导p38 MAPK/NF-κB炎症通路激活,促进心肌细胞炎症,从而参与D-Gal诱导的大鼠心脏衰老过程。

高脂诱导下雄激素缺乏小型猪肾脏脂质沉积的关键基因表达分析

目的:探讨高脂诱导条件下雄激素缺乏小型猪肾脏脂质沉积及关键基因表达的变化。方法:将雄性五指山小型猪随机分为3组,即不去势(IM)组、去势(CM)组和去势+睾酮(CMT)组,每组6只动物,均饲喂高脂饮食。12周后检测血清肾功能指标,测定肾脏甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量;进行肾脏苏木精-伊红(H&E)和油红O染色,观察其脂质沉积和组织病理学变化。利用转录组测序分析肾脏组织表达谱差异,并用RT-qPCR和Western blot方法验证参与TG合成、胆汁酸代谢和雌激素合成相关差异表达基因。结果:CM小型猪肾脏重量明显低于IM和CMT小型猪(P<0.05);与IM组和CMT组小型猪相比,CM小型猪血尿素氮含量显著升高(P<0.05),但血清肌酐和总蛋白水平没有显著变化;CM组小型猪肾脏内出现大量脂滴,且TG含量显著高于IM和CMT小型猪(P<0.05);与IM组和CMT组小型猪相比,CM组小型猪肾脏TG合成基因包括固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)、糖类应答元件结合蛋白(ChREBP/MLXIPL)和硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)等表达升高,而胆汁酸代谢和雌激素合成基因包括法尼酯X受体(FXR/NR1H4)和雌激素受体1(ESR1)表达下调;睾酮处理能够逆转去势小型猪肾脏内脂质沉积及相关基因表达变化。结论:ESR1和NR1H4可能通过影响SREBF1脂质合成途径参与高脂诱导的雄激素缺乏小型猪肾脏脂质沉积过程。这为老年男性慢性肾脏疾病防治提供了新思路。

高压电动机综合保护整定计算的探讨

简要叙述高压电动机微机综合保护功能判据 ,重点探讨综合保护的整定计算原则。其中对电流速断保护在电动机启动后定值是启动时定值一半的原则 ,F- C回路负序过流考虑断相后的保护定值 ,提出了不同看法。对过热保护、堵转保护、过负荷电流保护等定值的计算 ,根据实际运行经验 ,探讨了其较为合理的计算方法 ,最后对综合保护提出了进一步完善的改进意见。

白藜芦醇和褪黑素对绵羊胎儿成纤维细胞转染及卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率。将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R^(-5)、R^(-6)、R^(-7))3种浓度组及白藜芦醇和褪黑素联合添加组(R^(-5)M^(-5)、R^(-6)M^(-7)),通过电转效率和细胞凋亡情况确定电转体系优化方案;通过对细胞周期、线粒体膜电位及活性氧(ROS)的检测研究其作用机制。将绵羊卵母细胞分为对照组及白藜芦醇和褪黑素(R^(-5)M^(-5)、R^(-6)M^(-7))联合添加组,通过绵羊卵母细胞体外成熟后卵丘细胞扩展、第一极体排出及体外受精胚胎的卵裂率检测其对卵母细胞体外成熟的作用。研究结果显示,分离的绵羊胎儿成纤维细胞P3代增殖旺盛,细胞生长曲线呈典型的S型;与对照组相比,所有试验组胎儿成纤维细胞的电转效率均显著提高(P<0.05),R^(-5)M^(-5)组电转效率最高;R^(-6)M^(-7)组显著降低细胞凋亡率(P<0.05),R^(-5)、R^(-6)、R^(-5)M^(-5)和R^(-6)M^(-7)组均显著促进细胞增殖(P<0.05);R^(-6)、R^(-7)、R^(-5)M^(-5)和R^(-6)M^(-7)组G1期细胞增加,S期细胞相对减少,但差异均不显著(P>0.05);R^(-6)、R^(-7)、R^(-5)M^(-5)和R^(-6)M^(-7)组成纤维细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05),R^(-6)、R^(-5)M^(-5)和R^(-6)M^(-7)组线粒体膜电位均显著增加(P<0.05);R^(-6)M^(-7)组显著促进绵羊卵丘细胞扩展、提高卵母细胞第一极体排出率和体外受精胚胎发育能力(P<0.05)。综上,白藜芦醇和褪黑素可以优化绵羊胎儿成纤维细胞电转体系,提高卵母细胞体外成熟效率,为白藜芦醇和褪黑素在转基因动物生产中的应用提供参考依据。

组学技术在奶牛乳房炎上应用的相关研究进展

奶牛乳房炎发病率较高、病因复杂,是影响世界奶牛业发展的主要常见疾病之一。由金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌等病原体引起的临床和隐形乳房炎对动物性食品安全及畜牧业的正常发展构成巨大安全隐患,全球每年因奶牛乳房炎导致的经济损失多达数十亿美元。近年来随着测序技术的不断突破和测序成本的不断降低,生命科学的研究进入了多组学时代,其在畜牧业中的应用也越来越广泛。对奶牛乳房炎来说,传统的组织病理学筛查、体细胞计数、牛乳pH检测、牛乳电导率检测、酶活检验、红外热显影等诊断技术由于其自身的局限性难以充分全面地阐明其发病机理,已不能满足科研人员的需求。组学技术即Omics,主要包括基因组学技术、蛋白质组学技术和代谢组学技术等。通过基因组学研究不仅能从转录层面上揭示奶牛乳房炎复杂性状的表型变异及遗传基础,还能从转录后调控(miRNAs、LncRNAs等)和表观遗传学修饰(DNA甲基化、组蛋白修饰等)层面挖掘出相关的DNA和RNA变化及多分子间的相互作用规律,能够帮助我们更好地了解奶牛乳腺组织对病原体的免疫应答机制,筛选鉴定出乳房炎抗性的信号通路及关键候选基因,从而提高基因组预测或选择的准确性。利用蛋白质组学技术能够对不同环境不同状态的牛乳及乳腺组织的蛋白质种类、表达丰度、蛋白互作、翻译后修饰等进行比较分析,对差异表达的蛋白质经过COG功能注释、数据库比对、GO和Pathway富集分析,可以从蛋白水平揭示乳房炎发生及防御过程中的复杂调控机制,同时还能发现乳房炎诊断的标记分子,进而为乳房炎治疗药物的研发提供潜在的精准靶点。代谢组学是系统生物学的重要组成部分。通过代谢组学研究,能够同时对机体在内、外环境等复杂因素作用下及特定生理时期内所有低分子量代谢产物(如氨基酸、脂类、碳水化合物等)进行精准、高效的定性和定量分析,从而阐明相关的代谢途径;其作为基因表达的最下游,能使基因和蛋白质表达的微小变化在代谢物水平上得到放大,进而可以更充分地反映细胞功能。将代谢组学技术应用到奶牛乳房炎研究中,能够分析出差异代谢物、鉴定出相关的生物标志物,进而揭示奶牛乳腺的生理及病理变化过程。总之,将各组学技术及多组学整合关联分析应用到奶牛乳房炎研究中可以更深入地揭示其病原防御机制,进而为乳房炎的预测、诊断和治疗提供有价值的参考和借鉴。本文就最近几年组学技术在奶牛乳房炎领域的研究进展进行综述,以期为我国奶牛健康及奶业安全发展提供指导。

依赖财务指标的股权激励计划研究——以A公司股权激励计划为例

本文通过分析A公司三次股票期权激励计划,发现以过高的财务指标作为行权条件的股权激励计划,存在盲目追求高利润的可能性,进而影响企业的健康发展。因此我们建议上市公司应当完善股权激励计划的行权条件,降低对财务指标的依赖程度。2005年12月31日,中国证监会颁布《上市公司股权激励管理办法（试行）》之后。

NLRP7基因在母源印记中的研究进展

NOD样受体(nucleotide binding oligomerization domain-like receptors,NLRs)家族在先天性免疫系统中行使着重要功能,与Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族相类似,该家族十分保守,不仅在植物中存在,也在哺乳动物体内表达。NLRs家族中有许多亚家族,其中,NLRP7(NACHT,LRR and PYD domains-containing protein7)是NLRP亚家族中的一员,其在多种免疫细胞及免疫器官中表达,可参与细胞生长、增殖和分化过程,在细胞凋亡、炎症反应等生理过程中发挥作用。NLRP7除了在免疫系统中表达外,还在哺乳动物的睾丸、卵巢等生殖系统及早期胚胎中表达,NLRP7的突变通常会导致人类家族复发性葡萄胎疾病的发生,最终导致妊娠失败。近期研究发现,NLRP7是一种母源印记基因,NLRP7异常的印记状态导致了异常的胚胎发育。在猪、牛、羊等大动物中虽然尚未发现葡萄胎疾病,但许多不明原因的流产、死胎等均可能与NLRP7的突变有关。由于进化过程中NLRP7在小鼠等啮齿动物中发生了退化,因此目前有关NLRP7的研究以灵长类为主。作者就近年来NLRP7基因与动物生殖相关的研究进展进行了综述,以期为哺乳动物繁殖障碍等疾病的研究提供参考。

春秋冬三季东弗里升奶绵羊体内胚胎生产及移植效果

为探究春、秋、冬三季以东弗里升奶绵羊为供体进行体内胚胎生产及移植的效果,并为建立高效优质种羊扩繁体系提供理论依据,试验选用99只东弗里升奶绵羊为供体、934只乌珠穆沁羊为受体,在春、秋、冬季进行体内胚胎生产和移植,45d后进行B超检测。结果表明:左侧子宫回收胚胎数为春季5.92枚,秋季7.76枚,冬季6.33枚,季节之间差异不显著(P>0.05);右侧子宫回收胚胎数秋季(8.53枚)显著高于春季(5.08枚)和冬季(5.69枚,P<0.05);回收胚胎数秋季(16.33枚)显著高于春季(10.42枚)和冬季(12.19枚,P<0.05);可用胚胎数为春季9.08枚,秋季11.56枚,冬季9.36枚,季节之间差异不显著(P>0.05);单胚移植妊娠率秋季(63.34%)和冬季(58.99%)显著高于春季(32.79%,P<0.05);双胚移植妊娠率秋季(86.21%)显著高于冬季(50.00%,P<0.05);妊娠率为秋季(66.21%)略高于春季(51.76%)、冬季(60.71%),季节之间差异不显著(P>0.05);产羔率为春季(68.18%)略高于秋季(67.83%)、冬季(65.13%),季节之间差异不显著(P>0.05)。说明春、秋、冬三季东弗里升奶绵羊超排和胚胎移植效果相近,其中秋季进行东弗里升奶绵羊体内胚胎生产和移植效果最佳。