裸小鼠高致瘤性K562-n细胞系的生物学特性研究

目的 探索高致瘤性K5 6 2 -n细胞系在胸腺缺陷裸小鼠体内致瘤的细胞生物学机理。方法 通过极限稀释法建立K5 6 2 -n细胞系致瘤率不同的克隆株 ,并以K5 6 2细胞为对照 ,对各克隆株进行裸小鼠体内外生物学特性的比较研究。结果 高致瘤性的K5 6 2 -B、K5 6 2 -C、K5 6 2 -E克隆株 (致瘤率≥ 5 / 6 ) ,其软琼脂培养集落形成率 ,特别是大集落形成率 ,较对照K5 6 2细胞显著增高 ,(P <0 .0 1) ,而无致瘤性或低致瘤性的K5 6 2 -A、K5 6 2 -D克隆株 (致瘤率≤ 2 / 6 ) ,其集落形成率与对照无显著差别 (P >0 .0 5 ) ;超微结构观察提示高致瘤性克隆株 ,常染色质成分增多 ,异染色质少见 ,胞浆内微丝增多且排列紊乱 ;流式细胞仪细胞周期分布分析显示高致瘤性的克隆株S期细胞比例增加。实验结果还表明裸小鼠NK细胞对高致瘤性克隆株的杀伤活性显著低于对照的K5 6 2细胞 (P <0 .0 1) ,而低致瘤性克隆株与对照无显著差别 (P >0 .0 5 ) ;组织病理观察显示低致瘤性的克隆株及对照K5 6 2细胞 ,所成裸小鼠肿瘤组织内有大量的炎性细胞浸润 ,大量肿瘤细胞被杀伤 ,血供丰富区尤甚 ,而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞浸润少见 ,肿瘤组织增殖旺盛。结论 K5 6 2 -n细胞系的裸小鼠高致瘤机理在于 :1.软琼脂集落形成率增高?

以脊髓压迫为首发症状的急性白血病2例报告

1临床资料 病例1，女性，14岁，因“腰痛伴双下肢麻木、无力1个月余”于1998年1月31日收入本院骨科。患者于1997年12月无明显诱因出现腰背部疼痛伴上腹部疼痛，双下肢麻木、无力，并逐渐加重，行走不稳，大小便困难，无发热、鼻衄、齿龈渗血、头晕等，

含氟达拉滨的联合化疗方案治疗慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤

目的:评价以氟达拉滨为主的化疗方案治疗慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLI/SLL)的疗效和不良反应。方法:采用氟达拉滨为主的化疗方案,FC方案:氟达拉滨+环磷酰胺;FMD方案:氟达拉滨+米托蒽醌+地塞米松;FMC方案:氟达拉滨+米托蒽醌+环磷酰胺,共治疗18例CLL/SLL患者,其中初发9例,复发、难治9例。结果:18例患者平均完成4.2个周期,完全缓解(CR)率61.1%,部分缓解(PR)率22.2%,总的有效(OR)率83.3%。初发组CR率66.7%,PR率33.3%,OR率100%;复发、难治组CR率55.6%,PR率11.1%,OR率66.7%,两组CR、OR率无显著性差异(P>0.05)。FC方案和FMD方案治疗组CR、OR率无显著性差异(P>0.05)。主要不良反应为骨髓抑制和免疫功能抑制,27.8%的患者出现Ⅲ～Ⅳ级粒细胞减少,22.2%的患者出现Ⅲ～Ⅳ级血小板减少。5例患者出现感染、发热,其中1例死亡。其它毒性包括恶心、呕吐,轻度肝肾功能损害,自身免疫性溶血性贫血。中位随访时间24月(1～40月),2年生存率88.9%,2年PFS率81.8%。初发组2年生存率100%,2年PFS率100%;难治组2年生存率83.3%,2年PFS率66.7%,两组无显著性差异(P>0.05)。结论:氟达拉滨为主的联合化疗方案对CIL/SLL疗效好,同时患者对其耐受性亦较佳。

指突状树突状细胞肉瘤诊治探讨

目的:探讨树突状细胞肉瘤的临床特征、诊断、治疗和预后。方法:对1例指突状树突状细胞肉瘤进行临床病理特点分析,CHOP(环磷酰胺、表阿霉素、长春地辛、地塞米松)方案化疗并观察疗效,复习文献总结国内树突状细胞肉瘤诊治情况。结果:临床表现为全身淋巴结肿大,颈部呈巨大肿块,两肺弥漫性微小结节,伴盗汗、轻度贫血。病理结果示淋巴结结构破坏,瘤细胞成梭形,形成束状,交错状排列。免疫组化S-l00(+)、Vimentin(+)、Fascin(+)、Lyso(+)、Ki-67(+),部分肿瘤细胞CD68(+)。经CHOP方案化疗后达到部分缓解。Langerhans细胞肉瘤罕见,呈高度恶性表现,常累及多个器官,目前国内仅3例报道。指突状树突状细胞肉瘤国内共报道6例,年龄19～41岁(中位33岁),颈部淋巴结好发,手术后无病生存时间2～15月(中位10月),18月总生存率40%(2/5)。滤泡树突状细胞肉瘤18例,年龄16～63岁(中位37岁),发病部位1/3以上在结外,无病生存时间5～72月(中位11.5月),18月总生存率100%(6/6)。结论:树突状细胞肉瘤诊断依赖病理和免疫组化;治疗尚需规范,可采取手术、放疗、化疗相结合的方案。

以脾梗死为主要表现的急性早幼粒细胞白血病一例报告

1临床资料患者男性,20岁.因左上腹痛伴发热6 d于2004年4月6日收入我院普外科.既往无传染病史,1个月前在当地医院诊断为"白细胞减少症",当时骨髓检查未见明显异常,2周前复查血常规正常.查体:T 38.1 C,皮肤黏膜无淤点、淤斑,浅表淋巴结无肿大,心肺(-),腹平坦,左上腹压痛明显,肝肋下未及,脾肋下约0.5 cm可触及,腹水征(-).……

裸鼠高致瘤性人白血病细胞系肿瘤相关基因的表达

目的 :探索 K 5 6 2和 K5 6 2 - n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。 方法 :应用基因芯片技术 ,检测 K5 6 2细胞和 K5 6 2 - n细胞的差异表达基因。 结果 :K5 6 2 - n细胞中表达上调的与白血病及其他肿瘤发生、发展相关的基因包括如dek基因和 DP1基因 (结肠直肠多发性息肉病位点基因 )。许多肿瘤抑制基因或包含潜在的肿瘤抑制基因的序列在 K5 6 2 - n细胞中表达下降 ,如染色体 12 p13序列 (U 4792 4)。锌指蛋白 12 7- Xp基因和锌指蛋白 198基因 ,prohibitin基因、DNF15 s2基因、h MSH2基因 (遗传性非息肉性结肠癌基因 ,为碱基错配修复基因 )、环孢素受体基因。结论 :K5 6 2 - n细胞的裸鼠高致瘤特性与一系列癌基因的表达上调和抑癌基因的表达下调有关。

裸鼠高致瘤性K562-n细胞系基因表达谱的变化

目的 探索K5 62和K5 62 n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。方法 应用基因芯片技术 ,检测K5 62细胞和K5 62 n细胞的差异表达基因。结果 在被检测的 12 80 0个基因中 ,一些与细胞增殖、分化及凋亡等相关基因的表达在高致瘤性K5 62 n与K5 62细胞中有显著的变化。表达上调的基因包括MAD 3基因、转录因子ⅡA(TFⅡA)λ亚基基因等 ,表达下调的基因包括人Fas相关因子基因、含转录子E2F2、ID3 (DNA结合蛋白 3 )基因的染色体 1p3 6.13～ 3 6.2 2、精氨琥珀酸裂解酶基因等。结论 K5 62 n细胞的裸鼠高致瘤特性 。

PDGFRB基因易位的不典型慢性髓细胞白血病的临床观察

目的探讨涉及PDGFRB基因易位的不典型慢性髓细胞白血病(CML)的诊断和治疗。方法对1例不典型CML患者进行骨髓细胞染色体核型分析,RT-PCR检测bcr/ab l融合基因,荧光原位杂交(FISH)检测PDGFRB基因易位,羟基脲和干扰素治疗并观察疗效。结果该例患者的骨髓细胞染色体核型为46,XY,t(5;12)(q33,p13),bcr/ab l融合基因阴性,FISH检测证实PDGFRB基因的断裂易位。应用羟基脲和干扰素治疗,随访34个月,外周血象平稳,骨髓未缓解。结论 PDGFRB基因易位的不典型CML是一特殊的MPD亚型,确诊依赖分子生物学检查,伊马替尼治疗可以改善该亚型MPD患者的预后。

蛋白酶体抑制剂对白血病作用的研究进展

蛋白酶体负责细胞内蛋白的降解,其活性的异常改变是肿瘤发生的标志。研究证实,蛋白酶体抑制剂对许多恶性肿瘤有抗癌活性,第一个获准临床试验和上市的蛋白酶体抑制剂硼替佐米治疗多发性骨髓瘤患者获得了较高的总体有效率和完全缓解率。国外学者也开展了一系列蛋白酶体抑制剂对白血病细胞治疗作用的研究,本文就蛋白酶体抑制剂对浆细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、成人T细胞淋巴瘤/白血病、慢性髓系白血病、急性髓系白血病作用的研究进展作一综述。

住院医师规范化培训中血液病教学方案探索

针对参加内科规范化培训的住院医师,在血液病的教学中,多种传统教学方式与多媒体、网络教学相结合,提高教学效果;注重临床思维的培养和训练,提高诊断和鉴别诊断水平;以临床实用性为指导,构建血液病临床教学的框架;科学性和趣味性相结合,激发学习兴趣;强调"三基"为纲,不忘介绍前沿进展;培养高素质的具有扎实临床基础的内科医师。

裸鼠高致瘤性K562-n细胞系代谢相关基因表达变化的研究

目的 探索K5 6 2和K5 6 2 n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。方法 应用基因芯片技术 ,检测K5 6 2细胞和K5 6 2 n细胞的差异表达基因。结果 在被检测的 12 80 0个基因中 ,一些与细胞物质代谢和物质转运有关基因的表达在高致瘤性K5 6 2 n细胞与K5 6 2细胞之间有显著的变化。K5 6 2 n细胞表达上调的基因包括Dihydrodiol脱氢酶基因、肝Dihy drodiol脱氢酶基因、NAD依赖的亚甲基四氢叶酸脱氢酶 /环化脱水酶基因、人胎盘特异性ATP结合盒转运蛋白基因 ,表达下调的基因包括溶血磷脂酸酰基转移酶基因、线粒体异柠檬酸脱氢酶基因、精氨琥珀酸裂解酶基因、核糖核苷酸还原酶M1亚基基因、焦磷酸法尼酯合成酶基因、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶基因、细胞粘附蛋白SQM1基因等。结论 K5 6 2 n细胞的裸鼠高致瘤性等生物学特性与一系列细胞物质代谢酶和物质转运蛋白基因的表达变化有关。

PSMB5基因G322A突变及硼替佐米耐药的JurkatB细胞与其亲本细胞蛋白质表达谱的差异研究

本研究旨在探讨具有PSMB5基因G322A突变且对蛋白酶体抑制剂硼替佐米耐药的T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病细胞系JurkatB与亲本Jurkat细胞的细胞生物学特性和蛋白质表达的差异,确认JurkatB5(硼替佐米筛选终浓度500 nmol/L)及JurkatB8(筛选终浓度800 nmol/L)细胞对硼替佐米的耐药性和对常规化疗药物的敏感性。采用台盼蓝拒染活细胞计数绘制生长曲线,应用软琼脂培养法观察细胞集落形成率,用流式细胞术行细胞周期分析,实时荧光定量RT-PCR检测多药耐药相关基因MDR1、LRP、MRPmRNA表达,采用含有720个蛋白抗体的SpringB io抗体芯片检测细胞株间蛋白质表达差异。结果表明,JurkatB5和JurkatB8细胞与亲本Jurkat细胞相比,对硼替佐米48小时耐药倍数分别为33.52,39.04。48小时化疗药物杀伤实验表明,JurkatB5和JurkatB8细胞对柔红霉素、阿霉素、长春新碱、依托泊甙均无交叉耐药,耐药细胞株与亲本Jurkat细胞的增殖、集落形成和细胞周期分布差异无统计学意义(p>0.05)。JurkatB5细胞与Jurkat细胞MDR1、LRP、MRP基因mRNA表达无显著差异(p>0.05)。蛋白芯片杂交信号扫描共有264个可分析表达点,252个蛋白在3个细胞株中表达无明显差异(2倍以内),其中包括与多药耐药相关的15个蛋白。在JurkatB5或JurkatB8中较Jurkat细胞表达升高或降低2倍以上的蛋白共12个(细胞分裂周期蛋白34、细胞分裂周期蛋白37、CD34 II型蛋白、基质金属蛋白酶-2、细胞黏合素、高尔基体复合物、内皮蛋白、组蛋白去乙酰化酶1、穿孔蛋白、促乳蛋白、维甲酸受体β、整合蛋白β1),但未发现在JurkatB5和JurkatB8中较Jurkat细胞中表达同时升高或降低2倍以上的蛋白。结论:具有PSMB5基因G322A突变且对硼替佐米耐药的细胞株JurkatB与亲本Jurkat细胞相比较其常规细胞生物学特性无显著改变,无多药耐药表型及多药耐药相关基因的过表达。突变细胞株中大部分已知与耐药有关的蛋白与肿瘤细胞生长、增殖、凋亡、恶性程度、侵袭性相关蛋白表达与亲本细胞中的表达相比较均无显著差异。

裸鼠高致瘤性K562—n细胞系细胞骨架相关基因的表达变化研究

目的 探索K562和K562－n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。方法 应用基因芯片技术，检测K562细胞和K562－n细胞的差异表达基因。结果 一系列与细胞骨架有关的基因在K562－n细胞中表达上调，包括编码calaizzarin、ADP糖基化蛋白2、巨噬细胞肌动蛋白基因、硫酸乙酰肝素蛋白多糖核心蛋白基因。结论 K562－n细胞的裸鼠高致瘤特性与一些细胞骨架相关基因的表达上调有关。

急性髓细胞白血病的治疗研究

急性髓细胞白血病(AML)是一组造血干细胞克隆性疾病,在过去的20年中,AML的治疗策略并没有大的改观,年龄和染色体核型仍然是两个主要的预后因素,也是目前进行治疗选择的基础.

DNA芯片在血液系统疾病中的应用研究

DNA芯片是近年发展起来的一项前沿生物技术 ,根据 DNA芯片表达结果 ,不仅可精确作出肿瘤的分子分型 ,还可以识别出以前未知的新的肿瘤亚型 ,已应用于血液系统最常见的恶性肿瘤白血病、淋巴瘤的分子病理分型、诊断的研究。利用DNA芯片还可以检测白血病、淋巴瘤的功能相关基因 ,并探寻恶性血液病新的治疗靶基因。应用寡核苷酸芯片测序和测变异技术 ,可以大规模地检测遗传性疾病的突变基因 ,可用于遗传性血液病的诊断。

肿瘤细胞的致瘤性与染色体及基因变化的关系

人肿瘤细胞的裸鼠致瘤性试验是肿瘤生物学特性观察的一项重要指标 ,肿瘤细胞致瘤性变化的主要决定因素是染色体、基因的结构和功能变化。其中肿瘤抑制基因的缺失或癌基因的扩增与肿瘤细胞的致瘤性关系密切。将肿瘤抑制基因转染入相应的肿瘤细胞可降低肿瘤细胞的致瘤性 ,而转染癌基因或原癌基因可增强肿瘤细胞的致瘤性或使无致瘤性的细胞获得了致瘤性。肿瘤细胞系在体外传代或裸鼠体内传代过程中 ,可发生染色体、基因的改变 ,通过筛选可获得具不同生物学特性的亚细胞系。

人急性早幼粒细胞性白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的体外研究

树突状细胞(dendritic cells,DC)在激发机体抗白血病T细胞免疫应答中具有重要作用,有报道DC可以由单核细胞及粒细胞分化生成,本研究应用细胞因子在体外诱导了急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞向DC的分化.从M3型APL患者外周血分离白血病细胞,加入GM-CSF(100ng/ml)或GM-CSF(100ng/ml)+rhIL-4(500U/ml)体外培养14天,并于培养结束前3天加人TN-α(100ng/ml).结果表明,GM-CSF可以促进白血病细胞体外增殖,并从幼稚状态逐渐分化成熟,表达高水平的CD45分子,其中部分为CD14^+的单核细胞,部分为CDla^+的DC(M3DC);培养后期加入TNF-α,可以促进DC生成,约占35%;以GM-CSF+IL-4培养也诱导了幼稚细胞的成熟,2周后DC约占10%,但较少单核细胞生成,培养至3周时DC约占60%;而在培养后第11天加入TNF-α则可以加速DC生成,3天后生成的白血病型DC达90%.电镜观察到M3DC具有与单核细胞来源的DC相似的超微结构,但具有的突出特征是部分细胞存在少量胞浆颗粒;M3DC高表达HLA-DR、B7-2、CD40、CD54分子,体外可以强烈刺激同种T细胞增殖.此类由白血病细胞诱导生成的DC可被用于体内外诱导生成肿瘤特异性CTL,在APL的免疫治疗中具有一定的应用价值.

裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究

目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性。结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n／VCR。与K562-n细胞比较,K562-n／VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大。结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR具有其独特的生物学特性。

真菌血流感染57例临床分析

目的分析真菌血流感染的临床特征,进一步探讨真菌血流感染的防治措施。方法对2003—2008年医院诊断的真菌血流感染57例进行回顾性临床分析。结果白念珠菌是真菌血流感染的主要病原体,占42.1%;真菌血流感染的发生与广谱抗生素应用、中心静脉置管、恶性肿瘤和使用免疫抑制剂有关;治疗有效率为50.0%,7例患者在未治疗前病情恶化死亡,总病死率为56.1%。预后相关因素分析提示使用过卡泊芬净与两性霉素B治疗明显利于患者生存,而高APACHE评分、未行抗真菌治疗及行全胃肠外营养患者病死率较高。结论广谱抗菌药使用、中心静脉插管与真菌血流感染相关性可能更强;对氟康唑治疗无效的患者应尽早更换为两性霉素B或棘白菌素类。