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题名玉米叶肉原生质体瞬时表达系统建立与优化
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作者
吕仁瑶
朱金洁
刘昌林
谢传晓
邹华文
祁显涛
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机构
长江大学农学院
中国农业科学院作物科学研究所
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出处
《玉米科学》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期32-39,共8页
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基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(32001551)。
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文摘
以玉米B73黄化苗叶片为研究材料,采用酶解法分离并获得高活性的玉米叶肉原生质体细胞,优化PEG-Ca^(2+)介导的玉米叶肉原生质体细胞转化条件,探索电击介导玉米叶肉原生质体细胞瞬时转化方法。同时,以荧光蛋白为报告分子融合细胞器定位信号,建立玉米叶肉原生质体亚细胞定位系统,进一步验证该瞬时表达系统具备可用于基因功能研究的可能性。结果表明,通过酶解法分离获得的玉米叶肉原生质体细胞经过FDA染色统计发现,95%的细胞结构完整且活力较高。在PEG-Ca^(2+)介导瞬时转化方法中,当PEG浓度40%且质粒量增加至25μg时转化效率达到最高,为51.28%。在电击介导瞬时转化方法中,当电压为350 V且电击时间为5 ms的条件下电击转化效率最高,为32.66%。通过将核定位信号NLS与eGFP基因融合转入玉米叶肉原生质体细胞,eGFP成功定位于细胞核。通过将叶绿体定位基因ZmMSH1与DsRed2基因融合并转入,DsRed2蛋白成功定位于叶绿体中。在玉米叶肉原生质体细胞中过表达ZmDHDPS基因,通过qRT-PCR和Western Blot等技术确定了ZmDHDPS高表达活性,并显著提高原生质体细胞内游离赖氨酸含量。
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关键词
玉米
原生质体
瞬时转化
亚细胞定位
ZmDHDPS
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Keywords
Maize
Protoplasm
Transient transgene
Subcellular localization
ZmDHDPS
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分类号
S513.035.3
[农业科学—作物学]
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