猪免疫抑制性疾病病因学研究进展

猪免疫抑制性疾病是由多种因素相互作用引起机体免疫系统损伤而导致机体抵抗力和抗病能力下降并引发各种疾病的总称。该类疾病具有感染率高、发病率高的特点,加之其发病原因多样化和复杂化,致使该病的防控难度很大,严重制约着我国养猪业的进一步发展。论文以近年来国内外研究资料为基础,分别从病原因素、猪自身因素和人为因素等方面对猪免疫抑制性疾病的病因进行了阐述,以期为该病的防控提供参考。

猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立及应用

根据猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的基因序列,分别选取各自的保守区段设计引物,通过反应条件的优化,建立了检测PPV、PRV和PCV-2的多重PCR方法。用建立的方法对采自陕西省部分猪场的286份病料及血样进行检测,从对临床健康猪全血样品中PPV、PRV和PCV-2的检测结果看,PCV-2在正常猪群中有一定比例的存在,同时在个别猪场也存在PRV和PCV-2双重感染的现象;从临床患病猪病料中检测发现,PRV和PCV-2混合感染较严重,并有PPV+PRV+PCV-2三重感染发生;多重PCR检测结果与单项PCR检测结果的符合率达99%以上,说明建立的多重PCR检测方法可用于临床样品的检测,为疾病诊断提供参考。

猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用

根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。

表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组腺病毒的构建

为研制表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组腺病毒疫苗,根据PCV-2ORF2(Cap)基因序列和耶尔森菌侵袭素C端(InvC)序列,克隆获得Cap和InvC基因后,插入pAdShttle-CMV载体构建重组穿梭载体pAdShttle-Cap-InvC,经PmeI线性化后,转化入BJ5183感受态细菌与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-Cap-InvC。重组质粒经PacⅠ线性化后,转染HEK293细胞,连续传代后获得重组腺病毒。应用PCR、Western blot和间接免疫荧光(IFA)技术分别检测重组腺病毒中Cap和InvC基因及表达。结果表明,成功构建了表达PCV-2Cap蛋白和InvC的重组腺病毒rAd-CapInvC,经过噬斑纯化和连续传代,重组腺病毒TCID50可达10-9.32/mL,为PCV-2重组腺病毒活载体疫苗的研发提供了基础材料。

猪圆环病毒2型ORF3蛋白的原核表达及抗体检测ELISA方法的建立

通过外源表达PCV2 ORF3蛋白,为ORF3蛋白的抗体制备和检测提供基础材料。根据PCV2的ORF3基因序列设计特异性引物,克隆ORF3全基因,构建重组原核表达质粒,转入大肠埃希菌进行表达,将纯化的蛋白包被ELISA板,建立ORF3抗体检测ELISA方法。结果表明,获得了重组pGEX-6p-1-ORF3原核表达质粒,最佳表达条件为37℃,225 r/min,IPTG 1.0 mmol/L诱导5 h;建立的ELISA检测方法可以检测PCV2阳性血清,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清无交叉反应。本试验为ORF3抗体制备提供了基础材料,也为PCV2抗体检测提供了可选择方法。

新农科背景下信息技术与课程教学的深度融合研究

新农科背景下,信息技术与课程教学的深度融合已成为提高高校教学质量的关键之一。针对当前农林专业教学与信息技融合面临的线上教学优势体现,混合教学模式中线下课堂教学的重构、信息技术与教育教学融合的高阶性、信息技术在教育教学中的利用效率等问题,提出了依托并发挥不同智能工具和平台的优势、注重线下教学环节对学生线上学习效果的检验、注重信息资源的高效利用、积极寻求发达地区教学资源共享等应对措施,以期为信息技术与课程教学的深度融合提供借鉴。

猪圆环病毒2型复制酶蛋白的胞内互作蛋白研究进展

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus virus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)以及其他猪相关疾病的主要病原体。复制酶(Replicase,Rep)蛋白是由PCV2 ORF1基因编码的功能性复制启动蛋白,通过与ORF1编码的另一复制相关蛋白Rep′共同作用参与PCV2的DNA滚环复制。Rep蛋白作为PCV2的一种必需功能性蛋白,是研究PCV2抗病毒治疗的一个新突破口。然而,目前有关PCV2致病机理及疫苗的研究大多集中在Cap蛋白,对于Rep蛋白的作用机制研究较少。因此,本文结合国内外近年研究进展,对PCV2 Rep蛋白的胞内互作蛋白进行了系统分析,尤其对现今已发现的8种胞内互作蛋白在PCV2复制过程中可能发挥的重要作用及机制进行了阐释,并对其他可能与PCV2 Rep蛋白存在相互作用的胞内蛋白进行预测,以期为进一步阐明Rep蛋白在PCV2致病中的作用提供理论依据。

猪c-Myc蛋白多克隆抗体的制备

【目的】克隆猪c-Myc基因CDS序列并构建其原核表达载体,同时纯化c-Myc蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,为进一步研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep蛋白与宿主c-Myc蛋白之间的交互作用奠定基础。【方法】根据猪c-Myc全基因序列(GenBank No.NM_001005154)设计引物,以反转录PCR方法扩增c-Myc基因CDS序列,经Nde I/Xho I双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+);转化至Arctic-Express^(TM)大肠杆菌后诱导表达;表达产物经变性、复性和His-Band Ni+层析柱亲和纯化后免疫新西兰白兔。抗原亲和层析法纯化抗体后,用间接ELISA法测定其效价,用Western blot检测其特异性。【结果】经检测,克隆产生的猪c-Myc基因CDS序列长度为1359 bp,c-Myc-His重组蛋白主要以包涵体形式出现,分子质量约为63 kDa,由此蛋白制备的多抗效价可以达到1∶1093500,并能特异性识别猪c-Myc蛋白和重组蛋白c-Myc-His。【结论】本研究成功制备了猪c-Myc蛋白多克隆抗体,为研究猪c-Myc蛋白功能和其与PCV2 Rep蛋白之间的相互作用奠定了良好基础。

微量元素硒增强动物机体免疫力的机制研究进展

硒(Se)是人和动物必需的微量元素。研究表明,硒能够促进动物繁殖生长,而且能够提高动物机体免疫力,对畜牧业有重要影响。本文综述了微量元素硒对动物免疫器官、免疫细胞、免疫分子的影响及机制,旨在为探究硒对动物机体免疫力的影响及富硒食品、含硒药物、富硒保健品等硒产品的研发与推广提供理论参考。

表没食子儿茶素没食子酸酯抗病毒作用机制研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是分离自茶叶的儿茶素单体,作为茶叶茶多酚的重要组成成分,其在抗病毒、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多个方面的功效都已得到研究证实。本文主要针对于近些年EGCG的抗病毒作用和机理进行总结,以期为含有EGCG成分的抗病毒药物的进一步开发提供参考。

广西北部湾地区猪圆环病毒2型检测及其ORF2遗传变异分析

为了解猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)在广西北部湾地区的流行情况和其ORF2基因的遗传变异规律,本研究采用PCR方法对2016年采自广西北部湾地区规模猪场和农村散养户的306份疑似PCV2感染猪的血液和组织样品进行了PCV2的病原学检测,同时对分离的4株PCV2 ORF2基因进行PCR扩增、克隆和测序,并与Gen Bank中登录的34株国内外PCV2参考株ORF2序列进行比对和遗传进化分析。结果表明:PCV2检测阳性样品为129份,阳性率为42.16%。随机选取的4份阳性病料PCV2 ORF2基因测序结果显示,4个毒株遗传关系上均属于Group 1(PCV2b),其中BBW-1和BBW-2分离株属于1A分支且分别与Fd3株(AY321984)和NL_PMWS_3株(AY484415)同源性较高,BBW-3和BBW-4分离株属于1B分支且BBW-4分离株与Hu Zhou0301株(AY536756)和NL_Control_1株(AY484407)同源性较高,其ORF2基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%~99.5%和93.9%~95.4%,说明该地区PCV2的优势基因型是PCV2b。研究结果不仅有利于掌握广西北部湾地区PCV2流行毒株同源性情况,而且将为该地区(porcine circovirus associated disease,PCVAD)的防治和新型疫苗的研制提供依据。

猪圆环病毒3型流行病学研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今为止能够感染哺乳动物的最小病毒,目前已发现有PCV1、PCV2和PCV3 3种血清型。PCV1于1974年首次在猪肾细胞(PK-15)中发现,可感染猪但对其无致病性;PCV2于1998年首次被分离和鉴定,是引发猪群出现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)等猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的主要病原体;PCV3于2016年首次在患有PDNS的母猪和流产胎儿中检测出,随后在亚洲、欧洲、美洲等地区的猪群中被陆续发现.

微量元素硒在动物体内的抗病毒作用研究进展

人体正常生命活动离不开微量元素硒,硒具有良好的抗氧化性、抗肿瘤性和抗重金属性,不仅能参与调节机体免疫反应和激素水平,而且可以抑制多种病毒的复制。人体对硒摄取过多或不足都会导致相应疾病。由于自然界硒分布不均,我国人口普遍缺硒,适当且有效地补硒对打造全民健康极其重要。本文以近年来国内外最新研究资料为基础,对硒的几种典型抗病毒作用进行了系统的总结,以期为硒抗病毒作用相关研究提供理论参考,为富硒食品、含硒药物、富硒保健品等硒产品的研发与推广提供理论支撑。

茶多酚抗病毒作用及机制研究进展

近年来,病毒性传染病频繁暴发,尤其是新冠肺炎、流感和非洲猪瘟等疫情的发生,严重危害着人类和畜禽的生命安全,引起了国际社会的广泛关注。然而,截至目前进入临床使用的抗病毒药物的种类非常有限,以抗流感药物为例,目前只有神经氨酸酶抑制剂和基质蛋白M2离子通道抑制剂应用比较广泛^([1-2]),加之病毒变异速度快、耐药性病毒株不断出现,以及人们对“无抗”的需求度逐渐提升,使得研究开发新的抗病毒治疗药物成为当今国际社会关注的焦点。茶多酚(Tea polyphenol,TP),俗称茶鞣质或茶单宁,是茶叶中多羟基酚类化合物的混合物,因其具有显著的抑菌、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、提高机体免疫力、降血糖、降血脂等多种生物学功能而备受研究者青睐。本文重点叙述了TP对一些常见病毒作用机制的研究现状,对TP的抗病毒作用、抗病毒作用的主要化学成分以及其抗病毒的可能机理等进行了归纳总结,以期为进一步开发和利用含有TP成分的抗病毒药物提供一定的参考。

广西地区陆川猪病毒性免疫抑制病的流行病学调查

为了解猪病毒性免疫抑制病在纯种陆川猪群中的流行情况,本研究采用PCR和RT-PCR方法,对2016年采自广西陆川县及其周边地区猪场和农村散养户的389头陆川猪的组织样品分别进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、猪巨细胞病毒(PCMV)和猪口蹄疫病毒(FMDV)的病原学检测,结果显示上述病原阳性率分别为14.40%(56/389)、26.99%(105/389)、60.93%(237/389)、7.97%(31/389)、3.08%(12/389)、11.83%(46/389)、24.16%(94/389)、26.22%(102/389),其中单一感染率为31.06%(91/293),混合感染率为68.94%(202/293)。在混合感染的样品中,陆川猪的病毒性免疫抑制病多以二重和三重感染类型为主,分别占40.59%(82/202)和36.14%(73/202),其中PCV2混合其它病原感染形式最为常见,占所有混合感染样品的80.69%(163/202)。对各地区、季节和猪的不同生长阶段的调查结果显示,纯种陆川猪群中普遍存在病毒性免疫抑制病,尤其以PCV2与其它病原混合感染类型为主,提示PCV2将是今后陆川猪群疫病防控的重点。本研究为陆川猪病毒性免疫抑制病防制方案的制定和新型疫苗的研制提供了依据。

桂东南地区三种常见鸡病毒性免疫抑制病的血清抗体检测与分析

【目的】了解3种常见病毒性免疫抑制病在桂东南地区鸡群中的发病情况和流行趋势。【方法】采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对2018年3月至2019年4月来自玉林、北流、兴业、博白、容县、陆川、贵港、桂平、平南等9个县市农村散养户送检的637份病鸡血清样品进行病毒抗体的检测并分析地区、季节、品种和年龄段等因素对鸡群感染病毒性免疫抑制病的影响。【结果】以上地区的农户散养鸡群中存在3种常见病毒性免疫抑制病的抗体,且不同病毒的抗体情况受地区、季节、品种和年龄段等因素的影响。鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)和禽呼肠孤病毒(ARV)的抗体总阳性率分别为23.86%、13.97%、7.06%,提示CIAV在以上地区鸡群中的感染率相对较高,应该作为今后该地区鸡群疫病防控的重点。此外,在所有阳性样品中混合感染率为24.65%,说明目前以上地区农户散养鸡群中的病毒性免疫抑制病存在混合感染,尤其以CIAV与其他病原组成的混合感染类型为主,占98.11%。【结论】针对桂东南地区农户散养鸡群进行血清学调查,为防控该地区鸡群中的3种常见病毒性免疫抑制病提供了重要参考。

猪圆环病毒2型Cap蛋白与热休克蛋白DNAJC7的相互作用研究

为探究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与热休克蛋白DNAJC7的关系,用Cap与DNAJC7蛋白的重组杆状病毒质粒pFast-GST-Cap和pFast-DNAJC7共转染sf9细胞,并用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测。结果显示,沉淀Cap蛋白后能检测到DNAJC7蛋白条带,且沉淀DNAJC7蛋白后能够检测到Cap蛋白条带,表明Cap蛋白与DNAJC7蛋白之间存在相互作用。论文完善了PCV2 Cap蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,并为阐明DNAJC7蛋白对PCV2复制的影响及机制奠定了基础。

以培养应用型人才为导向的生物技术专业英语课程教学的改革与实践——以玉林师范学院为例

当今社会对生物技术专业人才的需求旺盛,而生物技术专业英语作为学生的一门专业基础课对其今后的工作至关重要,但在实际教学过程中却存在教学资源不足、教学内容陈旧、课堂沉闷、学生学习积极性不高等问题.本文以培养应用型人才为导向,以培养学生专业英语的检索、阅读、翻译和写作能力作为中心,结合教学实践,从提高学生学习积极性、优化建设师资队伍、更新教学内容、改变教育方式及方法、搭建实践教学体系、完善考核机制等方面进行探讨,着重突出对学生动手能力的培养,以期为培养学生的实际应用能力提供有效途径.

高等师范院校生物教育专业学生科研素质的提升策略研究

随着社会经济的快速发展,生物领域的技术改革已成为国内外研究的热点,这就需要高等院校培养出更多掌握新技术的生物人才,而诸多生物领域的新技术体现在科学研究过程中,因此加强生物专业学生科研素质的培养就显得格外重要。笔者首先简要分析高等师范院校生物教育专业的教学现状与问题,其次经过查阅文献和相关调查研究拟提出从修订人才培养方案、改善教学过程、优化师资队伍建设、搭建科研平台、加强创新创业教育、开展科技论文写作等方面着手教学改革,以提升生物教育专业学生科研素质,从而为培养出更多卓越生物人才奠定基础。

2010-2019年中国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的遗传进化与重组分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),俗称“猪蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性、具有高度传染性疾病,其主要临床症状表现为持续高热、母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸困难和高死亡率[1-2]。PRRS最早发现于美国的北卡罗来纳州,随后世界各国陆续报道,中国于1996年首次报道该病。2006年出现了由高致病性PRRSV引起的“猪无名高热症”疫情的大面积暴发和流行,导致猪群高发病率及高死亡率,给养猪业造成了巨大的经济损失[3]。