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炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究
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作者 吕双飞 马勋 +6 位作者 王静 孔翠莲 寇丽君 刘彩霞 史唯地 康立超 任慧杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期674-683,共10页
【目的】构建炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202 PA-LF 1融合基因表达载体并对其进行原核表达和反应原性检测,为炭疽亚单位疫苗制备、炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供依据。【方法】根据GenBank中登录的炭疽芽孢杆菌PA和LF基因序列设计2对引物... 【目的】构建炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202 PA-LF 1融合基因表达载体并对其进行原核表达和反应原性检测,为炭疽亚单位疫苗制备、炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供依据。【方法】根据GenBank中登录的炭疽芽孢杆菌PA和LF基因序列设计2对引物,利用PCR方法从炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202中分别扩增出PA和LF 1基因片段,经XhoⅠ限制性内切酶消化后,通过黏性末端进行连接,获得PA-LF 1融合基因片段,利用SWISS-MODEL分析软件分别对PA、LF1和PA-LF1融合蛋白进行三级结构预测;将融合基因片段克隆至pET32a(+)质粒中,构建重组质粒pET32a-PA-LF1,并将重组质粒pET32a-PA-LF1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白表达,Western blotting鉴定融合蛋白并分析其反应原性。【结果】从炭疽芽孢杆菌弱毒C40-202株成功扩增出PA、LF 1和PA-LF 1融合基因;成功构建了炭疽芽孢杆菌PA-LF 1融合基因表达质粒pET32a-PA-LF1,融合蛋白三级结构预测可折叠为正确的空间构象;构建的重组质粒经诱导表达、纯化和SDS-PAGE,获得分子质量为96 ku的融合蛋白,以包涵体形式表达;经Western blotting验证,纯化后的重组蛋白与经Ⅱ号炭疽芽孢苗免疫后的绵羊血清发生特异性结合,表明其具有良好的反应原性。【结论】PA-LF1融合蛋白具有良好的反应原性,可为炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供理论依据,同时也可作为一种炭疽亚单位疫苗的候选组分。 展开更多
关键词 炭疽芽孢杆菌 PA-LF 1基因 克隆 原核表达
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犊牛源肠外致病性大肠杆菌分离鉴定、致病性及耐药性分析
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作者 史唯地 康立超 +8 位作者 刘彩霞 寇丽君 吕双飞 任慧杰 钱瑞宣 马勋 王静 蒋建军 高盛杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5022-5031,共10页
【目的】确定新疆喀什地区某规模化牛场致犊牛死亡的细菌性病原体及其生物学特性,为该地区规模化牛场细菌病的防治和合理用药提供参考。【方法】对死亡犊牛进行病理解剖及病原分离,挑选肝脏(KS-1)与肛拭子(KS-2)来源的单菌落纯化培养,... 【目的】确定新疆喀什地区某规模化牛场致犊牛死亡的细菌性病原体及其生物学特性,为该地区规模化牛场细菌病的防治和合理用药提供参考。【方法】对死亡犊牛进行病理解剖及病原分离,挑选肝脏(KS-1)与肛拭子(KS-2)来源的单菌落纯化培养,通过形态观察、生化试验、16S rRNA基因扩增及系统进化分群鉴定分离株,并通过毒力基因检测、致病性试验及药敏试验对分离株的致病性和耐药性进行研究。【结果】死亡犊牛肺脏、肝脏、心血、关节液和肠系膜淋巴结以及健康犊牛肛拭子样品接种后菌落生长形态一致,结合选择性培养基上菌落生长形态、革兰染色镜检形态特点、生化特性及大肠杆菌16S rRNA的验证,鉴定分离菌株为大肠杆菌。系统进化分群试验中,KS-1为A群,KS-2为B1群。毒力基因检测结果显示,KS-1携带crl、papC、hlyE、eaeA、ompA、ompC、iucD和iutA共8种毒力相关基因,KS-2携带crl、hlyE和ompF共3种毒力相关基因。致病性试验结果显示,腹腔注射1×108 CFU分离株感染小鼠,KS-1组小鼠在16 h内全部死亡,KS-2组小鼠无死亡现象出现。药敏试验结果显示,KS-1对哌拉西林/他唑巴坦、头孢唑林、头孢呋辛等17种药物敏感,对氨苄青霉素/舒巴坦和哌拉西林中度敏感,对氨苄西林和复方新诺明耐药;KS-2对哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星和呋喃妥英敏感,对妥布霉素中度敏感,对其余14种药物耐药。【结论】本研究分离出2株犊牛源大肠杆菌,其中KS-1毒力较强,且携带丰富的毒力基因,对大部分常用抗生素敏感,对氨苄西林和复方新诺明具有耐药性;KS-2携带毒力基因较少,呈现多重耐药。 展开更多
关键词 犊牛 肠外致病性大肠杆菌 分离鉴定 毒力基因 耐药性
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LIPI-4 EⅡC调控单增李斯特菌关键毒力因子转录的研究
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作者 刘彩霞 史唯地 +8 位作者 寇丽君 马勋 王静 高盛杰 吕双飞 陈旭珂 曾东东 孔翠莲 任慧杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1340-1351,共12页
【目的】探究单增李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶ⅡC(EⅡC)对LM关键毒力基因表达的影响。【方法】构建分离株LM928 EⅡC基因缺失株LM928ΔEⅡC和回补菌株CLM928ΔEⅡC,测定各菌株的生长曲线和对不同糖的发酵情况,测定侵染人脑... 【目的】探究单增李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶ⅡC(EⅡC)对LM关键毒力基因表达的影响。【方法】构建分离株LM928 EⅡC基因缺失株LM928ΔEⅡC和回补菌株CLM928ΔEⅡC,测定各菌株的生长曲线和对不同糖的发酵情况,测定侵染人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)后的黏附、侵袭和胞内增殖能力,利用实时荧光定量PCR方法检测在脑心浸液(BHI)培养条件下和侵染HCMEC/D3后各菌株毒力基因的转录水平。【结果】成功构建LM928 EⅡC基因缺失株LM928ΔEⅡC和回补菌株CLM928ΔEⅡC。EⅡC基因的缺失不影响LM928的生长和对葡萄糖、纤维二糖、果糖、鼠李糖、七叶苷和水杨苷的发酵。EⅡC基因缺失后,LM928对HCMEC/D3的侵袭率极显著下降(P<0.01),黏附能力无显著变化(P>0.05)。LM928ΔEⅡC胞内增殖菌量在2~4 h时显著低于LM928和CLM928ΔEⅡC(P<0.05),但在8~12 h时均显著高于LM928和CLM928ΔEⅡC(P<0.05)。在BHI培养条件下,LM928ΔEⅡC毒力基因hly、prfA、actA、plcB、inlA、inlB、inlC和mpl转录水平极显著下调(P<0.01),毒力基因plcA转录水平极显著上调(P<0.01);在侵染HCMEC/D3后,LM928ΔEⅡC毒力基因hly、prfA、inlB、inlC和mpl转录水平相对于LM928和CLM928ΔEⅡC显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01),毒力基因plcA和inlA相比于CLM928ΔEⅡC极显著下调(P<0.01),毒力基因actA和plcB转录水平无显著差异(P>0.05)。【结论】LIPI-4中EⅡC不参与LM928的生长及其对部分糖的发酵,能调控LM中重要的侵袭相关基因和毒力相关基因。本试验结果为进一步探究EⅡC在LM和LIPI-4中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 毒力岛4 膜透性酶ⅡC 毒力基因
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离子-原子混合阱中冷Rb原子对Rb~+离子的协同冷却(英文)
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作者 吕双飞 贾凤东 +4 位作者 李晓康 刘晋允 许翔源 薛平 钟志萍 《中国科学院大学学报(中英文)》 CSCD 北大核心 2018年第2期154-159,共6页
研究在离子-原子混合阱中冷Rb原子对Rb+离子的协同冷却效应。通过对与原子相互作用之后离子温度和数目的测量研究离子阱参数q_(1,2)对协同冷却的影响。发现在0.3≤q1,2≤0.8时冷原子对离子具有明显的协同冷却效果。选取|q_(1,2)|=0.32,... 研究在离子-原子混合阱中冷Rb原子对Rb+离子的协同冷却效应。通过对与原子相互作用之后离子温度和数目的测量研究离子阱参数q_(1,2)对协同冷却的影响。发现在0.3≤q1,2≤0.8时冷原子对离子具有明显的协同冷却效果。选取|q_(1,2)|=0.32,测量到离子可以从初始温度(2 010±380)K冷却至(325±35)K,寿命从7 s延长至15 s。这对于冷却原子离子或者分子离子,尤其是没有合适光学通道的离子将是非常有意义的。 展开更多
关键词 协同冷却 离子-原子碰撞 离子-原子混合阱
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LIPI-4 EⅡA基因对单核细胞增生性李斯特菌重要毒力基因转录调控作用的研究 被引量:2
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作者 刘彩霞 高盛杰 +8 位作者 寇丽君 马勋 王静 孔翠莲 史唯地 吕双飞 任慧杰 康立超 殷月兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1269-1276,共8页
为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)的膜透性酶ⅡA(EⅡA)基因在LM中的毒力作用,本研究利用同源重组技术构建了具有遗传稳定性的LM928菌株EⅡA基因缺失株(LM928ΔEⅡA)和回补株(CLM928ΔEⅡA),通过对缺失株、回补株和亲本... 为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)的膜透性酶ⅡA(EⅡA)基因在LM中的毒力作用,本研究利用同源重组技术构建了具有遗传稳定性的LM928菌株EⅡA基因缺失株(LM928ΔEⅡA)和回补株(CLM928ΔEⅡA),通过对缺失株、回补株和亲本株生长特性测定分析EⅡA基因对LM体外生长能力的影响。提取各菌株RNA,反转录为c DNA后通过real-time PCR检测各菌株在体外培养条件下LM重要毒力基因的转录水平,分析EⅡA基因缺失对LM毒力基因转录水平的影响。结果显示,缺失EⅡA基因后不影响细菌在体外的生长能力,但细菌plcB和inlA基因的转录水平显著下调(P<0.05),hly、prfA、plcB、inlA、inlB、inlC和mpl基因的转录水平极显著下调(P<0.01),plcA基因的转录水平极显著上调(P<0.01),而actA基因的转录水平无明显变化(P>0.05)。将LM928、LM928ΔEⅡA和CLM928ΔEⅡA菌株分别感染人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)后,采用CCK8法检测EⅡA基因对HCMEC/D3活性的影响,同时通过胞内增殖试验检测EⅡA基因对LM胞内增殖的影响,进一步采用real-time PCR方法检测EⅡA对细胞毒力基因转录水平的影响,结果显示,与LM928组相比,LM928ΔEⅡA组HCMEC/D3细胞活性无明显改变;LM928ΔEⅡA感染HCMEC/D3后6 h~12 h,胞内LM928ΔEⅡA载菌量极显著高于胞内LM928载菌量(P<0.01),在感染HCMEC/D3后2 h~12 h,胞内LM928ΔEⅡA载菌量也极显著高于胞内CLM928ΔEⅡA的载菌量(P<0.01)。相对于亲本株,LM928ΔEⅡA感染的细胞中毒力基因prf A、plc A、plc B、inl A、inl B、inl C和mpl转录水平均极显著上调(P<0.01),actA基因的转录水平显著上调(P<0.05),hly基因的转录水平极显著下调(P<0.01)。本研究结果首次证实LIPI-4中EⅡA基因对LM体外生长无影响,但其对体内、外LM毒力因子的转录均具有显著的调控作用,提示LM LIPI-4可能通过EⅡA参与调控细菌毒力,该结果为进一步研究LIPI-4在LM致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 毒力岛4 膜透性酶ⅡA 缺失株 毒力基因
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Measurement of the Low-Energy Rb+-Rb Total Collision Rate in an Ion-Neutral Hybrid Trap
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作者 吕双飞 贾凤东 +3 位作者 刘晋允 许祥源 薛平 钟志萍 《Chinese Physics Letters》 SCIE CAS CSCD 2017年第1期36-39,共4页
An ion-neutral hybrid trap is built to study low-energy ion-atom collisions. The ion-neutral hybrid trap is combined with two spatially concentric traps: a linear Paul trap for the ionic species and a magneto-optical ... An ion-neutral hybrid trap is built to study low-energy ion-atom collisions. The ion-neutral hybrid trap is combined with two spatially concentric traps: a linear Paul trap for the ionic species and a magneto-optical trap(MOT) for the neutral species. The total ion atom collision rate coefficient k_(ia)between^(87)Rb atoms and optically dark ^(87)Rb^+ ions is measured by monitoring the reduction of the steady-state MOT atoms by sequentially introducing various mechanisms, namely photoionization and ion-atom collisions. In contrast to other experiments, a concise experimental procedure is devised to obtain the loss rates of the MOT atoms due to photoionization and ion atom collisions in one experimental cycle, and then the collision rate k_(ia) of cold ^(87)Rb atoms with ^(87)Rb^+ ions is deduced to 0.94(±0.24)× 10^(-13) m^3/s with T_i= 3770(±100) K measured by the time of fligt of the ion signal.The measurements show good agreement with the collision rate derived from the Langevin model. 展开更多
关键词 Measurement the LOW-ENERGY Rb+-Rb TOTAL Collision Rate an Ion-Neutral Hybrid TRAP
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Theoretical Analysis of Rydberg and Autoionizing State Spectra of Antimony
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作者 吕双飞 李若虹 +3 位作者 贾凤东 李晓康 Jens Lassen 钟志萍 《Chinese Physics Letters》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期61-65,共5页
We calculate the Rydberg and autoionization Rydbergspectra of antimony(Sb) from first principles by relativistic multichannel theory within the framework of multichannel quantum defect theory. Our calculation can be u... We calculate the Rydberg and autoionization Rydbergspectra of antimony(Sb) from first principles by relativistic multichannel theory within the framework of multichannel quantum defect theory. Our calculation can be used to classify and assign the atomic states described in recently reported three Rydberg series and four autoionizing states. The perturbation effects on line intensity, variation and line profile are discussed. Assignments of the perturber states and autoionizing states are presented. 展开更多
关键词 自电离态 光谱 多通道量子亏损理论 RYDBERG系列 多通道理论 第一原理 里德伯态
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Analytical solutions for a doubly driven two-level atom
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作者 刘晋允 贾凤东 +4 位作者 李晓康 吕双飞 许祥源 薛平 钟志萍 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第7期96-100,共5页
We have deduced analytical solutions of an energy level diagram of the doubly driven/dressed atom for a two-level atom exposed to a strong near-resonant bichromatic laser field in a special case, i.e., the bichromatic... We have deduced analytical solutions of an energy level diagram of the doubly driven/dressed atom for a two-level atom exposed to a strong near-resonant bichromatic laser field in a special case, i.e., the bichromatic field with frequencies ω1 and ω2, and Rabi frequencies ?1 and ?2, in which the first coupling field of ?1 acts on the bare atomic levels, and then the resulting singly dressed states are driven by the second coupling field of ?2, thus resulting in the doubly dressed atom.We have measured the probe absorption spectra of a doubly driven two-level atom. The system consists of 52S1/2, F= 2 and 5~2P_(3/2), F'= 3 states of ^(87)Rb atoms in a magneto-optical trap(MOT) as well as the cooling/trapping beams and an additional coupling field. As for the spectroscopic properties of the doubly driven two-level atom, theoretical analytical solutions are in general agreement with the experimental spectrum as a whole. 展开更多
关键词 二能级原子 双驱动 解析解 双色激光场 相互耦合 原子能级 缀饰原子 吸收光谱
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The Probe Transmission Spectra of^(87)Rb in an Operating Magneto-Optical Trap in the Presence of an Ionizing Laser
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作者 刘龙为 贾凤东 +6 位作者 阮亚平 黄巍 吕双飞 薛平 许祥源 戴星灿 钟志萍 《Chinese Physics Letters》 SCIE CAS CSCD 2013年第4期69-72,共4页
The influence of an ionizing laser on the pump-probe spectra of^(87)Rb over the transition 5^(2)S_(1/2),F=2→5^(2)P_(3/2),F'=3 is experimentally studied in an operating magneto-optical trap.These spectral features... The influence of an ionizing laser on the pump-probe spectra of^(87)Rb over the transition 5^(2)S_(1/2),F=2→5^(2)P_(3/2),F'=3 is experimentally studied in an operating magneto-optical trap.These spectral features,including gain peak,a dispersion-like structure and absorption peak,become weak as the intensity of the ionizing laser increases.Moreover,the profiles of the absorption peak and gain peak vary as the ionizing laser intensity changes.Such results indicate that there is more than one component in the two features and that each component has different dependences on the number of^(87)Rb atoms. 展开更多
关键词 PUMP ionizing PRESENCE
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转动参考系处理猎犬追逐问题
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作者 吕双飞 《湖南中学物理》 2024年第1期93-94,共2页
通过转动参考系分析处于等边三角形三个顶点的猎犬以恒定速率相互追逐的过程,计算任意时刻猎犬加速度及运动过程的轨迹方程。
关键词 非惯性系 转动参考系 猎犬追逐问题
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LIPI-4EII对单核细胞增生性李斯特菌关键毒力因子转录调控的影响
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作者 史唯地 马勋 +8 位作者 刘彩霞 寇丽君 吕双飞 任慧杰 曾东东 王静 孔翠莲 高盛杰 钱瑞宣 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期191-202,共12页
为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用,本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(help))和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(native)),测定各菌株... 为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用,本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(help))和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(native)),测定各菌株在体外培养中的生长曲线和在永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)内的增殖情况;RT-qPCR检测体外培养和HCMEC/D3细胞内各菌株9个关键毒力基因的转录水平。结果显示:(1)EII基因缺失株LM928ΔEII构建成功,重组回补质粒pIMK2-EII和pIMK2-EII-P_(native)及回补株CLM928ΔEII-P_(help)和CLM928ΔEII-P_(native)构建成功。(2)在体外培养下,EII对LM的生长曲线没有影响。但在侵染HCMEC/D3后,LM928ΔEII在8和12 h的胞内细菌量显著高于LM928(P<0.05),2和4 h的胞内细菌量极显著高于LM928(P<0.01),CLM928ΔEII-P_(native)在2、4和6 h恢复至野生株水平(P>0.05),而CLM928ΔEII-P_(help)在2、4、6、8、10和12 h均极显著低于野生株(P<0.01)。(3)体外培养条件下,相比于野生株,LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01);CLM928ΔEII-P_(help)中66.7%(6/9)的基因转录水平上升1~4倍,CLM928ΔEII-P_(native)中88.9%(8/9)的基因转录水平倍数变化在1倍以内。在HCMEC/D3细胞内,相比于野生株,LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01);CLM928ΔEII-P_(help)中33.3%(3/9)的基因转录水平上调1~3倍,CLM928ΔEII-P_(native)中基因转录水平倍数变化在1倍以内。综上,LIPI-4 EII对LM关键毒力因子的转录具有负调控作用。本研究为系统探究LIPI-4参与LM致病性机制奠定基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 LIPI-4 膜透性酶(EII) 缺失株 毒力基因
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运动与相互作用观下的“落体偏东”——品2018年北京高考物理卷第20题
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作者 陈伟孟 吕双飞 《物理教学》 北大核心 2019年第2期68-69,共2页
围绕2018年北京高考物理卷选择题中的"落体偏东"实际现象的模型构建,从核心素养角度对相关知识点进行解析与评述,阐述在运动和相互作用观念下,科学思维在高中物理中的具体呈现。
关键词 2018北京高考 落体偏东 核心素养
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