层粘连蛋白特异性受体——整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法 :利用整合素α6cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达GST———整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb C小鼠 ,取其脾细胞 ,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后 ,分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定。结果 :经ELISA双筛 ,获得了一株能稳定分泌针对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,其分泌抗体亚类为IgG1。免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL 74 0 2呈强阳性反应。结论 :通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体 ,对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义。

针对炭疽保护性抗原不同结构域的中和性单克隆抗体的筛选和鉴定

炭疽保护性抗原(PA)是炭疽毒素的重要组分,同时也是现有炭疽疫苗的主要有效成分,在炭疽杆菌的致病与免疫中发挥关键作用。以重组PA为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,结合炭疽毒素敏感细胞的毒性中和试验,大量筛选抗PA单克隆抗体,获得了9株炭疽毒素中和性单抗。进一步分析表明这些单抗以IgG1亚类为主,分别识别PA3个结构域的4个不同中和表位区。针对结构域2的4株单抗识别同一表位区,其中3株单抗的中和活性强于抗PA多抗;针对结构域4的4株单抗识别两个不同表位区;另有1株单抗识别位于结构域3的表位。实验结果提示PA具有多个中和表位,分别位于其不同结构域,其中结构域2、4包含主要中和表位。实验中获得的针对不同表位的中和性单抗为深入研究PA的免疫保护机理提供了工具,也为研制针对炭疽毒素的被动免疫制剂和治疗药物打下基础。

临床有效剂量的洛伐他汀对前列腺癌PC3细胞的影响

目的:研究临床有效剂量的洛伐他汀对前列腺癌PC3细胞的影响。方法:将PC3细胞分为空白对照组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组、洛伐他汀处理组、洛伐他汀与甲羟戊酸(mevalonic acid)同时处理组,处理时间点分别为24、48和72h。运用MTT方法检测细胞活力,[3H]掺入法和细胞计数法检测细胞增殖改变,Western blot检测凋亡关键分子casepase3、casepase7、多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]裂解蛋白(cleaved PARP,cPARP)等。结果:临床有效剂量2μmol/L洛伐他汀作用PC3细胞48h后细胞增殖率比DMSO对照组降低了39.29%[(63.69%±3.69%)vs(102.98%±6.84%),P=0.000],72h后降低了44.24%[(52.79%±9.88%)vs(97.03%±0.87%),P=0.048];2μmol/L洛伐他汀作用PC3细胞72h后,数量显著减少[(4.86×105±0.10×105)vs(9.66×105±0.10×105),P=0.000];PC3细胞活力在2μmol/L洛伐他汀作用48和72h后分别降低了50.12%[(56.52%±6.40%)vs(106.64%±5.27%),P=0.000]和60.05%[(41.99%±11.64%)vs(102.94%±8.49%),P=0.000],此外,2μmol/L洛伐他汀还诱导凋亡关键分子caspase7活化及其受体PARP蛋白裂解。结论:临床有效剂量的洛伐他汀可抑制前列腺癌细胞PC3的增殖并诱导细胞凋亡。

人膀胱移行细胞癌各种透明质酸合成酶基因亚型的表达及意义

目的:研究各种透明质酸合成酶亚型(HASs) mRNA在人膀胱移行细胞癌中的表达及其潜在的临床价值。方法:运用半定量RT-PCR方法,对145例不同恶性度的人膀胱移行细胞癌、22例正常人膀胱黏膜组织标本和4种人BTCC细胞系的HAS亚型mRNA的表达情况进行研究。结果:PCR23循环后,正常膀胱黏膜组织中7例扩增出微弱的HAS1 mRNA条带(28%,7/25),其余无任何条带扩增出来;所有膀胱移行细胞癌组织标本和细胞系有一种以上的HAS亚型mRNA被扩增出来。不同膀胱癌组织、细胞系表达的HASs mRNA的种类及表达程度各不相同,但随着肿瘤恶性程度的增高,其表达的各种HASs mRNA的种类趋向相同。每个膀胱癌组织、细胞系均有一种HASs mRNA优势表达,但其类型及优势表达程度互不相同。结论:人膀胱移行细胞癌出现了HAS亚型mRNA的异常高表达,可能与肿瘤的发生、发展有密切关系,是BTCC生物治疗潜在的靶点;同时进一步证实了尿透明质酸作为膀胱癌的"标志物"的可靠性。

中国电信行业的SWOT分析

中国加入世贸组织后，随着经济全球化的浪潮，市场开放度将大幅度提高，服务业市场准入尺度的放宽尤其显著，一些国内企业竞争力较弱的敏感行业将实行开放，商业、通讯、建筑、分销、教育、环境、金融、旅游和运输等部门都已做出了开放承诺。大批跨国公司将涌入，一些行业的集中度将急剧上升，国内企业将面临空前竞争压力，保护国内产业，应对跨国公司的垄断行为已是迫在眉睫。其中尤以电信业备受关注，在此利用SWOT分析法对我国电信行业进行分析。

NSBP1基因干扰RNA慢病毒载体的构建及效应检测

目的构建和鉴定NSBP1基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法针对NSBP1mRNA设计了3条siRNA,并构建pGCSIL-GFP-NSBP1慢病毒质粒,测序鉴定。用pGCSIL-GFP-NSBP1、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将慢病毒转染前列腺癌DU145细胞,Western-blot检测NSBP1表达,MTT法检测细胞生长活性,用转染细胞种植裸鼠成瘤,观察抑瘤效果。结果PCR和测序证实,成功构建LV-shNSBP1的慢病毒载体,病毒滴度达2×108TU/mL。转染细胞中NSBP1蛋白表达显著降低,且MTT检测细胞生长活性明显减慢,转染细胞在裸鼠体内成瘤率没有影响,但对肿瘤的生长有明显抑制作用。结论人NSBP1基因RNA干扰慢病毒载体构建成功,且NSBP1对前列腺癌激素非依赖DU145细胞的生长具有重要作用。

整合素α_6在原发性肝细胞癌发生、发展中的相关作用研究进展

原发性肝细胞癌（简称肝癌）是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，患者病死率、复发率高，治疗手段有限。在欧美国家其中位生存期（MST）仅为6～9个月。我国是肝癌的高发国家，目前发病人数约占全球的55％，死亡数在与肿瘤相关死亡中所占比例仅次于肺癌，我国肝癌患者MST仅为3～6个月。

二甲基甲酰胺所致肝细胞毒性及谷胱甘肽含量的变化

以ＤＭＦ与大鼠肝细胞体外孵育，观察ＤＭＦ所致细胞毒性及对肝细胞内ＧＳＨ含量的影响。发现ＤＭＦ在短时间内即可使ＧＳＨ明显下降，细胞死亡率也随着孵育时间和剂量的增加而增加，两者呈负相关。

PREPARATION AND IDENTIFICATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST THE EXTRACELLULAR DOMAIN OF INTEGRIN a6 SUBUNIT-THE SPECIFIC LAMININ RECEPTOR

Objective: To prepare monoclonal antibody (McAb) against the Integrin α6 extracellular domain and identify its biological activities. Methods: Fusion-protein of integrin α6 extracellular domain (GST-IAGED) was expressed in E.coli. JM109 and used for immunizing BALB/C mice. The spleen cells from immunized mice were fused with SP2/0 cells and selectively cultured with HAT medium. ELISA and immunocytochemistry staining were used to select hybridomas. Results: One strain of hybridoma cells that secreted specific monoclonal antibody against integrin α6 extracellular domain was indentified. The immunoglobulin subclass of the McAb was IgG1. Conclusion: The McAb against the extracellular domain of integrin α6 was successfully prepared by using GST-IA6ED fusion protein expressed by E.Coli. And the McAb had positive reaction with human hepatocarcinoma cells-BEL-7402.

层黏连蛋白与其α6整合素受体对人肝癌细胞表型的调控作用

目的利用自制的抗整合素α6亚基胞外区的单克隆抗体(IA6ED McAb)研究人肝癌细胞表面α6整合素胞外区对人肝癌细胞系BEL-7402黏附、铺展的影响以及在控制细胞增殖与分化中的作用。方法以层黏连蛋白(LN)、纤黏连蛋白(FN)、Matrigel分别作为细胞外基质,检测IA6EDMcAb对人肝癌细胞系BEL-7402细胞在不同基质上的黏附、铺展的影响;以MTT法检测McAb对BEL-7402细胞存活或增殖的影响;以明胶酶谱法检测McAb对BEL-7402细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响;以微粒子免疫吸附法检测对AFP分泌的影响。结果LN可以明显促进BEL-7402细胞AFP及MMPs的分泌;IA6ED McAb的封阻不但可以特异性抑制BEL-7402细胞在LN上的黏附及铺展,而且对BEL-7402细胞以LN为基质的存活或增殖、去分化及异常分化表型有非常显著的抑制作用。结论人肝癌BEL-7402细胞的增殖、分化表型受LN及整合素α6的调节。人肝癌组织细胞外基质成分中LN及细胞表面整合素α6的过表达,可以增强肝癌细胞的去分化及异常分化表型;而用IA6ED McAb阻断LN与肝癌细胞表面α6β1整合素受体的相互作用,可以逆转其去分化及异常分化表型,从而可能降低癌细胞的转移潜能。

CD2相关蛋白和肾质在多房囊性肾细胞癌中的表达

的探讨CD2相关蛋白（CD2AP）及肾质（nephrin）在成人多房囊性肾细胞癌中的表达及意义。方法收集多房囊性肾细胞癌标本28例、肾透明细胞癌标本32例和单纯性肾囊肿标本13例，采用免疫组化方法检测CD2AP在上述组织中的表达。从上述3组组织蜡块中每组各随机抽取5例共15例，重新切片，用CD2AP和肾质，做免疫组化染色对照实验。结果在多房囊性肾细胞癌的肿瘤细胞中CD2AP表达较强，尤其在囊壁的内层上皮表达强度明显增加。CD2AP在肾透明细胞癌中有弱表达，在单纯性肾囊肿中没有表达。肾质和CD2AP在3种组织的对照实验结果中染色强度和部位完全一致。结论CD2AP在多房囊性肾细胞癌中的表达具有特异性，其表达与肾透明细胞癌和单纯性肾囊肿有显著差异，对于多房囊性肾细胞癌的鉴别诊断有重要意义。CD2AP和肾质在多房囊性肾细胞癌中分布一致的特点，以及上述两种蛋白的足细胞特异性对于多房囊性肾细胞癌的形成原因具有重要提示。