精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化

通过狂犬病病毒灭活和纯化试验 ,试制精制Vero细胞狂犬病疫苗。疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量、Vero细胞残余DNA含量、疫苗效价、安全试验均能达到WHO规程要求。

人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性

以INFα -m基因为模版 ,采用overlappingPCR技术构建甲硫氨酸脑啡肽干扰素表达质粒 pBV2 2 0 /Enk - /Met-INFα -m ,转化大肠杆菌DH5α表达 ,产物以包涵体形式存在。包涵体经分离、变性、复性 ,然后经CM -Sepharose-FF、DEAE -Sepharose -FF离子交换层析和Sephacryal-HR10 0分子筛纯化 ,获得较纯的Enk -IFNα -m融合蛋白。生物活性检测表明 ,融合蛋白不仅具有干扰素的抗病毒、抗增殖、增强NK细胞功能的活性 。

脑啡肽-干扰素α-m融合蛋白外用治疗单纯疱疹病毒感染

为探讨脑啡肽 -干扰素α -m融合蛋白 (EI)外用治疗单纯疱疹病毒感染的作用 ,分别用HSV - 1感染兔子角膜、HSV - 2感染豚鼠阴道建立动物感染模型。兔子角膜感染 2 4h后用融合蛋白滴眼液治疗 ,每天 3次 ,每次0 5ml,共 14天。豚鼠阴道感染 4 8h后 ,用融合蛋白涂剂抹外阴病灶 ,每天 3次 ,每次 10mg ,共 14天。用IFNα -m和生理盐水 /赋形剂作为对照。采用记录病损程度分级法进行临床症消减观察 ,并于治疗前后测定实验动物病灶病毒滴度、HSV抗体滴度及NK细胞活性。结果显示 :与IFNα -m相比 ,EI治疗组实验动物病毒感染症状大幅减轻且病程缩短 ,动物病灶中病毒滴度下降 ,抗HSV抗体滴度升高 ,NK细胞活性增强。说明脑啡肽干扰素融合蛋白具有较强的消除炎症和局部抗病毒作用 。

脑啡肽-干扰素融合蛋白具有外周镇痛作用

研究干扰素 -脑啡肽融合蛋白的外周镇痛作用和机制。对小鼠进行热损伤诱导 ,采用经典热板法测定小鼠后肢脚趾外周涂抹干扰素、脑啡肽融合蛋白的痛阈变化 ,并用阿片选择性拮抗剂纳曲酮、纳络酮及干扰素单抗进行阻断试验。与干扰素母体相比 ,融合蛋白具有较强的外周镇痛作用 ,这种作用可被纳络酮、干扰素单抗逆转或阻断。融合蛋白具有较强镇痛功能 ,可作为外用镇痛候选药物 ,其作用机理与干扰素受体、阿片

一种人新型基因工程干扰素rh-IFNα-m的高效表达、纯化和活性检测

为实现干扰素 (IFNα m)的高表达与纯化 ,研究其抗病毒、抗增殖活性。应用PCR技术将已构建的IFNα m的高表达基因亚克隆到原核表达载体pBV2 2 0上 ,构建表达质粒 pBV2 2 0 /IFNα m ,转化大肠杆菌DH5α进行表达。表达产物经初步检定以包涵体形式存在 ,包涵体进行变性、复性 ,然后经CM Sepharose FF、DEAE Sepharose FF离子交换层析和Sephacryal HR10 0分子筛纯化 ,获得较纯的干扰素IFNα m。以IFNα 1b为对照 ,在VSV Wish系统上采用细胞病变抑制法 ,测定纯品IFNα m的抗病毒活性。在Hela细胞上用MTT法进行抗增殖实验。结果表明包涵体含量占菌体总蛋白 4 0 % ,纯化的目的蛋白IFNα m纯度在 95 % ,比活高达 1 2 6× 10 7IU/mg ,纯化收率34 4 % ,IFNα m抗病毒活性和IFNα 1b相当 (P >0 0 5 ) ,抗增殖活性高于IFNα 1b(P <0 0 1)。

钢管混凝土系杆拱桥施工控制研究

在施工控制的各阶段在施工现场布置了应力和变形监测点,并根据监测结果与理论值的对比不断完善施工控制措施。在满足整体稳定性要求的前提下,较好地控制了系杆、横梁、拱肋、吊杆的应力及变形,控制了施工中的结构行为,确保了大桥的顺利合拢,为钢管混凝土系杆拱桥的施工监控提供了参考和依据。

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

分别用Sepharose 4B、Sephacryl 2 0 0HR和Sepharose 6 Fastflow柱色谱进行地鼠肾细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化试验 ,试制精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗。对疫苗的残余牛血清含量、效力、收获率和安全性进行检测 。

国产199培养基制备狂犬病疫苗、乙型脑炎疫苗及麻疹疫苗的质量研究

用国产１９９培养基，以进口１９９培养基和自配维持液为对照，制备狂犬病疫苗、乙型肝脑炎疫苗、麻疹疫苗。从这三种疫苗的毒力、效力、稳定性三个方面，比较国产１９９培养基作为疫苗维持液能否改进疫苗质量。试验结果表明：国产１９９培养基作为疫苗维持液制备这三种疫苗的质量和进口１９９培养基制备疫苗的质量几乎无差别，但优于自配维持液制备疫苗的质量。

地高辛标记探针检测Vero细胞狂犬病疫苗残余Vero细胞DNA含量

地高辛标记Vero细胞DNA ,并制备成DNA探针。以此探针进行点杂交 ,确定探针的工作浓度、特异性及灵敏度。并用此法监测Vero细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化工艺的Vero细胞DNA去除率 ,测定精制Vero细胞狂犬病疫苗半成品中残余Vero细胞DNA含量。结果表明 ,该法特异性强 ,重复性好 ,快速简便 ,灵敏度高 ,检测值可达 5pg/剂量 ,可用于精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的质量控制和半成品检定。

狂犬病-干扰素联合制剂的免疫原性及治疗作用

目的 研究狂犬病疫苗和干扰素组成的联合制剂的免疫原性和暴露后的治疗作用。方法 将人用精制Vero细胞狂犬病疫苗（PVCRV）和基因工程干扰素（rHuIFNs）按一定比例配制成联合制剂,进行安全和效力试验,以PVCRV-HuIFNs和PVCRV分别免疫小鼠,在第1针免疫后9和18d,采用快速免疫荧光灶抑制试验,检测小鼠中和抗体水平,用MTT法检测特异的细胞毒作用（CTLs）。一定剂量的狂犬病病毒标准攻击株（CVS）肌肉感染小鼠后,分别用PVCRV-HuIFNs和PVCRV在0、3和7d皮内免疫感染小鼠,分别在末次免疫的第7和21d进行CTLs试验,并在30d内观察小鼠发病和死亡情况。结果 联合制剂安全有效,效价高于单一疫苗,在暴露前诱导的中和抗体水平与单一疫苗比较差异有显著意义;在暴露前后激发的CTL,联合制剂均高于单一疫苗,差异有显著意义。结论 联合制剂可用于狂犬病暴露后的免疫治疗。

干扰素-β1b的高效表达、纯化及抗病毒活性研究

IFN - β1b是大肠杆菌产生的 17位Cys被Ser替换的人IFN - β的类似物 ,为了获得高表达 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工合成了IFN - β - 1b基因 ,插入质粒 pBV2 2 0中 ,转化大肠杆菌DH5α。IFN - β1b的制备过程 ,包括发酵和一系列的纯化步骤。经修饰 ,IFN - β1b基因在启动子PRPL 控制下发酵表达 ,合成的蛋白质以包涵体的形式存在。培养的细菌经收集、裂解后 ,将包涵体释放出来 ,包涵体经含SDS的溶液溶解 ,DTT还原。纯化过程包括有机溶剂抽提、分子筛层析、脱盐、氧化复性和反相层析 ,并用旋转蒸发除去有机溶剂。IFN - β -

定向进化人α型干扰素基因家族的研究

应用DNA改组(DNAshuffling)技术重组了12种人α型干扰素基因,并结合噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术构建了噬菌体干扰素改组文库,采用简便的、功能性的定向竞争筛选方法,获得了比活达1 0×109IU/mg的新型α型基因工程复合干扰素,是目前国际上已投产的α2型干扰素的5倍,具有生产应用前景,上述策略也为其它细胞因子或酶的改造提供了借鉴方法。

人角质化细胞生长因子-2基因的克隆、表达及产物的纯化、鉴定

用高表达菌株BL 2 1codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子 (hKGF 2 )蛋白并初步纯化和检测其活性。通过RT PCR从流产胎儿肺组织中钓取hKGF 2cDNA ,将其克隆入pBV2 2 0载体质粒。在大肠杆菌BL 2 1codonpluscompentcells中表达hKGF 2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化 ,以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。结果显示 ,hKGF 2蛋白在BL2 1中得到高效表达 ;hKGF 2蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖 ,具有显著的促有丝分裂活性。

人干扰素ω(huIFN-ω)的高效表达、纯化及生物学活性

为了获得人干扰素 ω(huIFN ω)在大肠杆菌中的高效表达,根据大肠杆菌的偏爱密码子,人工设计并合成了huIFN ω高表达基因,并克隆到原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中实现了高效表达,目的蛋白占细胞总蛋白的15%左右,以包涵体形式存在。表达产物经变性、复性及阳离子和分子筛层析纯化,纯度达90%以上,产物的抗病毒活性约为1.0×108IU/mg,并具有体外促NK杀伤活性。此结果为进一步研究和开发重组huIFN ω奠定了基础。

双抗体夹心ELISA法检测狂犬病疫苗抗原活性组分

采用多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法快速检测狂犬病毒抗原含量。结果表明，灵敏度达到１５μｇ／ｍｌ，同时特异性及变异系数均合乎要求。本方法用于精制狂苗制备过程中有效抗原活性组分的检测准确、快速、重复性好，且抗原的ＥＬＩＳＡ效价与ＮＩＨ动物法测定效价具有平行趋势。

狂犬病病毒Vero细胞适应株3aG-V的致病性和免疫原性

狂犬病病毒3aG-V株是3aG-5在Vero细胞适应的毒株,对其在小鼠、豚鼠、家兔、犬的不同感染途径的致病性,小鼠、豚鼠、兔子上的免疫原性进行研究,同时进行纯毒及在中枢神经系统中能否形成尼氏小体试验,结果表明:狂犬病病毒3aG-V株潜伏期较长,在动物脑内不形成尼氏小体,为固定毒,其在实验动物上具有较弱的致病性和较好的免疫原性,可作为纯化Vero细胞狂犬病疫苗的生产用疫苗株。

2A12ME铝合金板材的深冲性能研究

研究了化学成分、退火制度、出炉冷却方式对2A12铝合金2.0 mm板材深冲性能的影响,确定了2A12ME板材的最佳Cu含量和生产工艺参数:w(Cu)≤4.5%;退火温度360℃～380℃,保温时间1 h～2 h;退火冷却方式为随炉冷却到200℃出炉。

相控阵雷达天线阵面平面度调控技术研究

针对大口径相控阵雷达中阵面天线在拼接过程中平面度难以调控的问题,基于模式重构的方式实现拼接阵面面型的重构,通过建立数学解析关系的方式实现平面调控。首先,以Legendre多项式为正交基,通过子阵面的斜率信息,重构阵面天线的面型,实现面型检测;然后,通过建立子阵面斜率与调整机构调整参数之间数学解析关系的方式,实现子阵面姿态的精确调控;最后,对误差来源进行分析,探究精度。结果表明:基于建立解析关系的拼接调整方法,调整后的面型误差RMS达到0. 47mm,PV达到1. 8mm,满足相控阵雷达的技术指标要求。

钢网架适应性抗不均匀沉降超前安装技术

某试验大厅横跨建筑物1,2段沉降缝,因任务需要必须提前交付使用,但沉降缝两侧不稳定地基产生的不均匀沉降将直接影响大厅钢网架提前安装时的结构安全。通过合理分析和设计,提出了一种超大试验空间钢网架适应性抗不均匀沉降预控技术,研制开发出一种适应性可调网架支座,并在建造过程中沉降偏差过大的情况下介入调节,有效保证了试验大厅钢网架抗不均匀沉降超前安装质量。

人角质化细胞生长因子2基因克隆、表达及其产物的纯化和鉴定(英文)

背景:人角质化细胞生长因子2具有广泛的生理功能,在胚胎发育、组织的修复、神经的再生、血管的生成和肿瘤发展中具有重要作用。目的:克隆人角质化细胞生长因子2基因,于大肠杆菌中表达,并检测其生物学活性,为进一步开发提供实验依据。设计:开放性实验。单位:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。材料:实验于2000-09/2002-05在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室完成。pBV220温控表达载体为病毒基因工程国家重点实验室构建,EcoRⅠ、BamHⅠ、T4DNA连接酶(Promega公司);人角质化细胞生长因子2特异性聚合酶链反应引物(上海博亚生物技术有限公司合成);肝素-SepharoseCL-6B(Pharmacia公司);快速聚合酶链反应产物纯化试剂盒、总RNA提取Trizol试剂盒、反转录-聚合酶链反应试剂盒(GIBCO公司);质粒DNA快速提取试剂盒(博大公司);BL-21-codonpluscompentcells(Stratagene公司)。方法:用高表达菌株BL-21-codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子2蛋白并初步纯化和检测其活性。通过反转录-聚合酶链反应从自然流产胎儿肺组织中钓取人角质化细胞生长因子2cDNA,将其克隆入pBV220载体质粒。在大肠杆菌BL-21-codonpluscompentcells中表达人角质化细胞生长因子2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化,以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。主要观察指标:人角质化细胞生长因子2cDNA的片段长度和序列,人角质化细胞生长因子2基因在大肠杆菌中的表达,纯化人角质化细胞生长因子2的活性。结果:人角质化细胞生长因子2cDNA片段大小约500bp,人角质化细胞生长因子2蛋白在BL-21中得到高效表达,于上清中可溶性表达,SDS-PAGE显示相对分子质量约20000;人角质化细胞生长因子2蛋白对NIH3T3细胞具有显著的促有丝分裂活性,1,5,10μg/L人角质化细胞生长因子2A值(490nm)高于空白对照组,差异有非常显著性意义(分别为0.174±0.022,0.220±0.029,0.306±0.050,0.066±0.004,P<0.001)。结论:成功克隆人角质化细胞生长因子2基因,并于大肠杆菌BL-21中得到高效表达;纯化的人角质化细胞生长因子2蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖,具有显著的促有丝分裂活性。