为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体 ,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素 2 ( Ovi IL-2 )。从绵羊血中分离白细胞 ,用 TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以 RNA为模板 ,用设计的 Ovi IL-...为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体 ,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素 2 ( Ovi IL-2 )。从绵羊血中分离白细胞 ,用 TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以 RNA为模板 ,用设计的 Ovi IL-2 3′引物进行 RT-PCR,扩增 Ovi IL-2 c DNA;以 Ovi IL-2 c DNA为模板 ,用 Ovi IL-2的 5′引物和 3′引物进行 PCR,扩增设计有 Bam H 和 Eco R 限制性酶切位点的 Ovi IL-2。经1 .5%琼脂糖凝胶电泳分析和 Xba 酶切鉴定 PCR产物后 ,将 Ovi IL-2 PCR产物与质粒 p Bluescript SK( + )连接 ,进行 Ovi IL-2基因克隆 ,在含 X-gal和 IPTG的 LB平板上 ,挑选白色单一菌落进行重组质粒筛选 ,用Bam H + Eco R 或 Eco R 酶切提取重组质粒 ,琼脂糖凝胶电泳出现 1条 50 0 bp大小的带 ;用 Eco R 或Eco R + Xba ,Bam H + Xba 酶切重组质粒分别出现 2 70 bp和 2 30 bp大小的带 ,从而筛选出重组质粒p Blue-Ovi IL-2。将筛选出的 p Blue-Ovi IL-2进行序列分析 ,证明克隆的 Ovi展开更多
文摘从GenBank上可查的全部424株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全基因序列中筛选出了42株来源于广东的PRRSV毒株全基因组序列与6株PRRSV疫苗株全基因序列,用RDP4(Recombination detecting program 4,RDP4)软件进行重组分析。发现广东株之间的重组事件集中在2010年、2011年和2015年。JXA1-RCN-2009作为亲本毒株出现在12个重组事件中,重组体的年份从2010年延续到2018年。疫苗株Ingelvac ATP-US-2006与CH-1R-CN-2008作为次要亲本毒株出现在事件10中,该事件的重组体为广东2018年的毒株。在事件18和25中可以见到疫苗株之间的重组,但软件同时显示该事件可能是自然进化而非重组。该研究对广东猪场科学规范的使用弱毒疫苗有着一定指导意义。
文摘为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体 ,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素 2 ( Ovi IL-2 )。从绵羊血中分离白细胞 ,用 TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以 RNA为模板 ,用设计的 Ovi IL-2 3′引物进行 RT-PCR,扩增 Ovi IL-2 c DNA;以 Ovi IL-2 c DNA为模板 ,用 Ovi IL-2的 5′引物和 3′引物进行 PCR,扩增设计有 Bam H 和 Eco R 限制性酶切位点的 Ovi IL-2。经1 .5%琼脂糖凝胶电泳分析和 Xba 酶切鉴定 PCR产物后 ,将 Ovi IL-2 PCR产物与质粒 p Bluescript SK( + )连接 ,进行 Ovi IL-2基因克隆 ,在含 X-gal和 IPTG的 LB平板上 ,挑选白色单一菌落进行重组质粒筛选 ,用Bam H + Eco R 或 Eco R 酶切提取重组质粒 ,琼脂糖凝胶电泳出现 1条 50 0 bp大小的带 ;用 Eco R 或Eco R + Xba ,Bam H + Xba 酶切重组质粒分别出现 2 70 bp和 2 30 bp大小的带 ,从而筛选出重组质粒p Blue-Ovi IL-2。将筛选出的 p Blue-Ovi IL-2进行序列分析 ,证明克隆的 Ovi
