DKK1在食管癌组织中的表达及其生物学功能

目的:探讨Dikkopf-1(DKK1)对食管癌细胞周期、侵袭能力的影响.方法:采用免疫组织化学的方法检测DKK1在食管癌组织中的表达,并通过免疫荧光对DKK1在细胞中的分布进行定位分析;应用Westernblot检测食管癌组织及其配对的正常食管组织和4株食管癌细胞系中DKK1蛋白表达水平.通过构建过表达DKK1的真核表达载体,将其转染到食管癌EC9706细胞中,观察细胞周期和侵袭能力的改变.结果:免疫组织化学检测食管癌组织中DKK1阳性表达率为83.34%,免疫荧光结果显示DKK1主要呈细颗粒状散在分布于细胞质中.Westernblot检测表明DKK1在食管癌组织中的表达明显高于配对的正常食管组织;在4株食管癌细胞系中均有不同程度的表达.在食管癌细胞系EC9706中过表达DKK1,S期细胞所占比例明显升高(57.25%vs45.87%,P<0.05),在Boyden小室中穿透基底膜的细胞数目也明显增加(252±6.71vs99.18±3.02;252±6.71vs112.33±3.21,均P<0.01).结论:DKK1在食管癌组织中呈高表达,并且在4个食管癌细胞系中均有表达,在EC9706细胞中过表达DKK1后能够促进细胞由G0/G1期向S期转变,同时能够增加细胞的侵袭能力.

miR-132在食管癌细胞系KYSE150中对靶基因FOXA1的调控作用

目的构建miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。方法根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,以EC9706细胞基因组DNA为模板,扩增包含miR-132前体序列,克隆到pMD18-T Simple中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)上;通过Real-time PCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平。用生物信息学软件对miR-132的靶基因进行预测,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。将pCDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响。结果成功构建了miR-132真核表达载体,Real-time PCR验证表明pCDNA3.1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132。生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基因。双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR。Western blot进一步证实miR-132能够抑制内源性FOXA1蛋白的表达。结论FOXA1是miR-132直接调控的靶基因。

<10 mm纯磨玻璃肺腺癌临床、CT和病理资料的相关性研究

目的探讨最大径<10 mm纯磨玻璃结节(pure ground glass nodule,pGGN)肺腺癌临床、CT、病理亚型资料的相关性。方法回顾性分析2017年5月至2019年4月53例经手术切除且病理证实为肺腺癌的53个最大径<10 mm pGGN患者的临床、CT、病理资料,分析不同病理亚型pGGN患者临床及CT影像特点。结果浸润前病变组性别比、年龄、吸烟史、肿瘤史、CEA升高比例与浸润性病变组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。浸润前病变组pGGn病灶分布于右肺上叶、右肺中叶、右肺下叶、左肺上叶和左肺下叶所占比例与浸润性病变组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。浸润前病变组直径、密度和瘤肺界面清楚所占比例低于浸润性病变组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组球/类球形比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。浸润前病变组空泡征所占比例低于浸润性病变组,差异有统计学意义(P<0.05),2组空气支气管征、分叶征、毛刺征、血管集束征和胸膜凹陷征所占比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。浸润前病变组与浸润性病变组pGGN大小的ROC曲线分析显示最佳临界值为7.65 mm,曲线下面积为0.828,敏感度87.5%,特异度70.3%。浸润前病变组与浸润性病变组pGGN密度的ROC曲线分析显示最佳临界值为-533.5 Hu,曲线下面积为0.777,敏感度75.0%,特异度73.0%。结论直径<10 mm pGGN肺腺癌中,浸润性病变组较浸润前病变组病灶最大径更大,密度更高,且瘤肺界面清楚和空泡征发生率更高;当pGGN病灶最大径>7.65 mm,密度>-533.5 Hu时,其诊断为浸润性病变的可能性更大。

miR-449a表达与食管癌的相关性及DNA甲基化对其调控作用研究

目的探讨miR-449a表达与食管癌发生、侵袭和转移的相关性及DNA甲基化对其表达调控的相关机制。方法收集2018年5—12月石家庄市人民医院诊治的50例食管癌患者组织样本,采用qPCR检测食管癌组织及癌旁正常组织中miR-449a的表达情况;收集食管癌患者的临床病理资料,分析miR-449a表达量与食管癌患者预后及临床病理特征的相关性。采用甲基化特异性PCR(qMSP)实验和亚硫酸盐测序(BSP)实验检测食管癌组织DNA甲基化情况,分析DNA甲基化是否参与调节miR-449a表达。结果食管癌组织中miR-449a表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。miR-449a低表达与食管癌组织分化程度差、分期晚及总体生存率成正相关(P均<0.05)。miR-449a表达调节区域的CpG岛位点的高甲基化与miR-449a低表达相关(P<0.05)。结论miR-449a低表达是食管癌预后差的一个危险因素。DNA甲基化参与调控miR-449a表达。