三种淡水螺与广州管圆线虫相容性的实验研究

目的比较福寿螺、中国圆田螺、铜锈环棱螺等3种食用淡水螺与广州管圆线虫的相容性。方法在相同条件下,用广州管圆线虫福建株感染3种螺,1、3、6、12及24h后,随机抽样各20只,分别饲养于置有滤水器、水温(24±1)℃的玻璃缸内。记录感染2周内各组螺死亡数。第15天开始解剖,记录螺软体重量和感染虫数。同时设不感染螺对照组。结果3种螺感染后第1周死亡数达高峰。感染率和死亡率与螺的种类及感染时间均无相关性。虫负荷与虫密度,福寿螺感染6、12及24h均显著高于感染1h的(P值均<0.05);铜锈环棱螺,感染24h的均显著高于感染1、3、6及12h的(P值均<0.05);中国圆田螺,感染1、3、6、12及24h各组间差异均无显著性(P值均>0.05)。福寿螺感染6、12及24h的虫负荷均显著高于铜锈环棱螺和中国圆田螺(P值均<0.05)。感染6、12及24h,福寿螺及铜锈环棱螺虫密度均高于中国圆田螺(P值均<0.05)。结论3种螺对广州管圆线虫均易感并有较高的相容性,其中福寿螺的相容性较强。

全球气候变暖对广州管圆线虫病流行的潜在影响

全球气候变暖会加速疾病传播媒介的扩散,同时也给媒介传播疾病的控制提出了挑战。广州管圆线虫是人类嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎的主要病原体,近年来发病人数迅猛增加,其危害性不断得到认识。广州管圆线虫是寄生性变温动物,其生长发育受中间宿主和环境温度的影响。环境温度是通过变温动物中间宿主发挥作用的,广州管圆线虫在不同的中间宿主体内对温度的反应存在一定的差异,这就反映在广州管圆线虫在中间宿主体内的发育零点温度和有效发育积温上,由于这些指标是中间宿主依赖性的并体现中间宿主对广州管圆线虫的传播能力,故统称为宿主的传播潜能指标。有效累积温度法则是研究温度和寄生虫生长发育之间关系的一种常用方法,能够确定中间宿主的传播潜能。随着全球气候变暖,利用有效累积温度法则预测广州管圆线虫分布范围的变化,对疾病的预防和控制有着重要意义。

三种方法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫效果的比较研究

目的比较肺检法、匀浆法和酶消化法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫的效果,以寻找快捷检测方法。方法将60只实验室人工感染广州管圆线虫的福寿螺均分2组,分别解剖成螺肺囊与肌肉两部分。镜检两组螺肺囊广州管圆线虫幼虫结节数,用匀浆法和酶消化法分别检测螺肺囊中广州管圆线虫幼虫,比较不同检测方法的效果。酶消化法同时检测福寿螺肌肉内幼虫数,分析螺肺囊与肌肉内幼虫数的相关关系。结果肺检法、匀浆法和酶消化法等3种方法检测螺肺囊内幼虫的灵敏度依次为96.7%、93.4%和100%,差异无统计学意义(χ2=2.069,P>0.05)。肺检法的检测速度明显快于匀浆法与酶消化法,差异具有统计学意义(Z=4.782,P<0.01);螺肺囊与肌肉组织内的幼虫数呈正相关(r=0.847,P<0.01)。结论肺检法的检测效果与匀浆法和酶消化法相似,但其检测速度更快,适合现场大规模螺体广州管圆线虫的定性筛查。

我国广州管圆线虫自然疫源地分布首次调查

目的调查我国广州管圆线虫自然疫源地的分布。方法运用地理信息系统(GIS)技术,借用主要中间宿主螺类有效累积温度模型参数,预测和绘制我国主要中间宿主螺类及广州管圆线虫在我国的潜在分布地图。根据绘制的预测地图,以区域抽样法,按栅格总数5%比例进行随机抽样。随机抽取55个调查点于2006年9～10月开展主要中间宿主分布及感染率调查。结果我国大陆潜在分布小管福寿螺的有19个省(市、区),其中福建、江西、浙江、湖南、广东、广西、海南和云南等8个省(区)已证实有小管福寿螺自然分布。福建、江西、浙江、湖南、广东、广西和海南等7个省(区)有广州管圆线虫自然感染,其中,福建建瓯、江西兴国、浙江瑞安、湖南汝城、广东化州、广西上思和海南五指山等地的小管福寿螺自然感染率较高,分别为36.6%、19.9%、16.0%、5.0%、6.3%、39.1%和25.0%。结论证实小管福寿螺自然感染有广州管圆线虫的7个省(区)均存在广州管圆线虫自然疫源地。

福寿螺休眠期体内广州管圆线虫生长发育及其感染性的观察研究

目的了解福寿螺处于休眠期对其体内感染的广州管圆线虫幼虫生长发育及其感染性的影响。方法来自实验室的广州管圆线虫L1幼虫感染福寿螺,感染后第1天螺置于25.0～25.5℃恒温室中休眠,观察体内幼虫生长发育情况,第13天起解剖观察幼虫生长发育情况。感染后第20天福寿螺置冬季室内自然变温条件下休眠2个月,每隔10d观察螺体内幼虫活力。检获的L3幼虫经口或腹腔注射感染SD大鼠,观察其感染性。同时观察螺的生存与体重变化情况,并以水族缸饲养螺作平行对照。结果25.0～25.5℃恒温条件下螺休眠不影响体内幼虫发育,且其幼虫发育历期为(16.3±0.6)d,显著快于水族缸饲养螺(17.6±0.96)d(t=5.72,P<0.01)。冬季室内自然变温条件下的休眠螺,生存率高于水族缸饲养螺(P<0.05),体重下降率为(33.5±4.3)%,也高于水族缸饲养螺[(9.0±2.3)%,t=10.68,P<0.01]。但随着休眠期的延长其死亡率增高(!2=18.31,P<0.01)。从存活螺体内检获的不同活力的L3幼虫均可感染SD大鼠。结论25.0～25.5℃恒温条件下螺休眠不影响体内幼虫发育,冬季室内自然变温条件下螺休眠或水族缸饲养,其体内幼虫均具有感染性。感染的福寿螺越冬方式,休眠明显优于水族缸饲养。

不同发育期福寿螺对广州管圆线虫易感性的实验研究

目的探讨和了解广州管圆线虫幼虫对不同发育期福寿螺感染的差异。方法将实验室饲养的子1代福寿螺按体重分为4个等级,分别为螺苗级、仔苗级、中螺级和成螺级。应用福建同一来源并经实验室传代的广州管圆线虫I期幼虫分别感染4级螺,观察比较其感染率、感染死亡率、感染度、III期幼虫(感染期幼虫)大小和幼虫在螺体的发育速度及分布情况。结果4级螺均能被广州管圆线虫感染,其感染率在76%和100%之间,差异无显著性(P>0.05)。螺级越小感染死亡率越高。中螺级的感染度较高,体内超过100条幼虫的螺数也较多。螺级间螺体幼虫发育状态基本相似。各级螺中的III期幼虫大小及III期幼虫出现前期和盛期均无明显差异(P>0.05)。幼虫广泛分布于螺体各脏器与肌肉等处,但以肺与肌肉中居多。各级螺内III期幼虫均能成功感染大白鼠。结论不同发育期福寿螺对广州管圆线虫均易感而相容,螺级间螺体幼虫发育状态基本相似。螺苗级和仔苗级福寿螺在传播广州管圆线虫病中的潜在危害应予进一步认识。

PCR检测大瓶螺体内广州管圆线虫幼虫方法的建立

目的建立一种基于PCR方法检测大瓶螺体内广州管圆线虫幼虫的方法。方法从美国生物信息中心GenBank中获得广州管圆线虫感染性III期幼虫(L3)cDNA特异性片断,应用美国DNASTAR公司Lasergene软件,设计特异性引物。TRIzol一步法抽提广州管圆线虫感染性L3和大瓶螺总RNA,按RT-PCR试剂盒提供方法进行PCR扩增。结果用RT-PCR方法能检测出阴性与感染性螺,其最低检出的总RNA量相当于1条广州管圆线虫L3;将阴性大瓶螺总RNA与感染期幼虫总RNA不同浓度混合,PCR法可检测出肉眼能分辨的电泳条带相当于总RNA浓度为128pg。此方法可以检测出广州管圆线虫III期幼虫RNA的最低值为105pg。结论建立了PCR检测大瓶螺体内广州管圆线虫幼虫的方法。

广东省广州管圆线虫病疫源地调查

目的了解广东省广州管圆线虫病疫源地分布情况,为制定监测方案提供依据。方法按不同地理位置分层抽样,分别抽取粤东、粤西、粤北山区和珠江三角洲4个地区共22个县(市、区),每县(市、区)随机抽取1～2个行政村(区)作为调查点。用匀浆法或肺检法剖检在野外现场采集的部分小管福寿螺(Pomacea canaliculata)和褐云玛瑙螺(Achatina fulica),以及餐饮、集市采集的不同品种的淡水螺和陆生螺,调查广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonen-sis)Ⅲ期幼虫感染情况。现场捕捉鼠类,鉴别种类后解剖心肺组织,检查感染情况;采集新鲜鼠粪,用清水沉淀法检查幼虫。结果22个调查县(市、区)均有小管福寿螺分布,且数量众多;广宁县未开展褐云玛瑙螺调查,和平县、曲江区和翁源县未采集到褐云玛瑙螺,其他调查点均有该螺分布。22个调查县(市、区)共采集小管福寿螺3754只,褐云玛瑙螺1465只,平均感染率分别为5.9%(172/2929)和16.5%(223/1354),两者差异有统计学意义(P<0.01)。粤东、粤西、粤北山区和珠江三角洲的受检螺平均感染率有地区差异(P<0.01),珠江三角洲最高(15.6%,152/975),其中又以东莞市的受检螺平均感染率最高(34.7%,78/225)。在9个调查县(市、区)的农贸市场采集圆田螺(Cipangopaludina)114只和环棱螺(Bellamya)541只,罗定市和开平市的环棱螺中幼虫阳性率分别为1.4%(1/70)和3.3%(3/91)。在9个调查县(市、区)捕获褐家鼠(Rattus norvegicus)、黄胸鼠(R.flavipectus)、鼩鼱(Suncus murinus)、小家鼠(Musmus-culus)、大板齿鼠(Bandicota indica)、黄毛鼠(R.losea)和黑家鼠(R.rattus)等共491只,平均感染率为11.4%(56/491),其中褐家鼠、黄胸鼠和板齿鼠的平均感染率分别为19.8%(52/263),2.5%(3/118)和10.0%(1/10),其他4种鼠类中均未发现有广州管圆线虫感染。在7个调查县(市、区)采集到新鲜鼠粪34份,Ⅰ期幼虫阳性率为44.1%(15/34)。结论广东省广州管圆线虫病疫源地分布广泛,中间宿主和终末宿主均有不同程度感染。

气候变化对人体健康影响的研究进展

从高温热浪、极端气候事件、空气污染、海平面上升等角度综述了气候变化对人类健康的影响,就气候变化对媒介传播性、水源性、食源性、呼吸道传染病以及部分慢性非传染病的影响进行了阐述,并提出了该领域亟待解决的科学问题和研究重点,包括法律体系的建立、机理的研究、疾病负担的测量以及成本效益分析等。

上海市不同人群人芽囊原虫感染调查

目的了解上海市不同人群人芽囊原虫感染情况。方法在上海市6个区收集居民新鲜粪便，采用Ringer溶液37℃恒温条件下培养人芽囊原虫，计算人芽囊原虫感染率。结果检查居民2984人，人芽囊原虫阳性者88人，感染率2．95％。上海市各区人群感染率间差异无统计学意义（χ^2=9．90，P〉0．05）；青浦区男性感染率为5．56％，女性感染率1．57％，差异有统计学意义（χ^2=5．38，P〈0．05），其他5个区男、女性感染率差异无统计学意义（χ^2=0．08～0．54，P均〉0．05）；农民感染率为6．87％，与其他职业人群比较差异有统计学意义（χ^2=18．57，P〈0．05）。结论上海市人群对人芽囊原虫普遍易感，以农民感染率最高。体外培养法敏感性较高，可用于人芽囊原虫感染的流行病学调查。

福寿螺体内广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的形态学观察

目的观察福寿螺体内广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的形态学特征。方法实验室培养的广州管圆线虫Ⅰ期幼虫感染禁食24h的福寿螺,61d解剖,取其肺囊和足肌,常规制作石蜡切片,观察其Ⅲ期幼虫外部形态和内部结构。结果Ⅲ期幼虫虫体卷曲,头部圆钝,咽管始于头部顶端的口孔,在咽肠连接处与肠管连接,尾部尖,肛管清晰。幼虫皮层为伊红染色,皮层外有一层无色透明的鞘膜。部分虫体尾部出现圆柱体,有些幼虫体内出现亚腹腺、很短的双管子宫等Ⅳ期幼虫早期特征。结论广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的形态学特征清晰,对预防广州管圆线虫病流行有一定意义。

血吸虫病传播阻断地区钉螺复现状况调查分析

目的了解广东、广西、福建、上海和浙江5省(市、自治区)血吸虫病传播阻断标准(以下简称"达标")地区的钉螺复现状况,以掌握最新螺情动态变化,为针对性制订防治对策提供科学依据。方法2006～2007年对5省市近3年内钉螺复现地区开展调查并汇集历史螺情相关资料。采用系统抽样法结合环境抽样法查螺并对钉螺复现原因进行分析。结果近3年内,广东无复现螺点。调查广西、福建、上海和浙江18个复现螺点及浙江1个新发现螺点。螺点主要分布于山丘地带的复杂孳生环境,复现时间为3～35年,有螺面积均小于原历史钉螺分布面积,无感染性钉螺和当地感染的病人及病牛。各螺点复现前大多选用五氯酚钠喷洒灭螺。结论山丘地带复杂环境和单纯性灭螺方法、查螺质量问题以及"达标"后预防性灭螺措施实施欠佳是复现螺情逐年回升的重要因素。

用多重PCR技术检测小管福寿螺体内广州管圆线虫幼虫

目的建立一种多重PCR方法检测小管福寿螺体内的广州管圆线虫幼虫。方法根据广州管圆线虫核糖体小亚基rDNA基因序列(GenBank登录号为AY295804)设计特异性引物,并与小管福寿螺16srDNA的特异性引物组合,建立多重PCR检测方法。分别以阳性和阴性小管福寿螺DNA为模板进行多重PCR扩增,电泳鉴定并测序。用阴性小管福寿螺DNA倍比稀释200条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA模板,使之浓度分别为1200ng/μl、120ng/μl、12ng/μl、1200pg/μl、120pg/μl和12pg/μl,检测该方法的敏感性。野外采集小管福寿螺172只,肺检法检测后,进行多重PCR扩增,计算敏感性和特异性。结果电泳和测序结果证实该多重PCR检测方法能有效扩增出目的片段,小管福寿螺和广州管圆线虫的目的片段分别为550和405bp。该方法可检测出广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA的最小浓度为120pg/μl。肺检法和多重PCR法检测均为阳性结果的45只,两法均为阴性的100只。肺检法为阴性、多重PCR法为阳性的24只,肺检法为阳性而多重PCR法检测为阴性的3只。多重PCR的敏感性和特异性分别为93.8%(45/48)和80.6%(100/124)。多重PCR法的阳性检出率为40.1%(69/172),肺检法阳性检出率为27.9%(48/172),差异具有统计学意义(χ2=14.8,P<0.01)。结论建立了检测小管福寿螺体内广州管圆线虫的多重PCR方法。

湖北钉螺线粒体基因组全序列测定研究

目的测定并分析湖北钉螺(Oncomelania hupensis)线粒体基因组全序列。方法利用特异引物和通用引物分别扩增湖北钉螺线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)、细胞色素b(Cytb)、16SrRNA(16S)和细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因片段,在此基础上利用长PCR技术扩增上述4个基因间的长片段,纯化克隆后采用引物步移法测序。结果湖北钉螺线粒体基因组全序列为15182bp(GenBank登记号为FJ997214),为闭合环状分子,A+T含量为67.3%;包括13个蛋白基因、22个tRNA基因、2个RNA基因和一段72bp的A+T富集区;蛋白质编码基因均以ATG为启动子,除呼吸链NADH脱氢酶的第一亚单位(ND1)基因以潜在的T作为终止密码子外,其余基因均以典型的TAA或TAG为终止子;基因重叠区有2处,分别为4bp和7bp;基因间隔区共21处合计145bp,长度范围为1～30bp;22个tRNA中,除2个tRNASer和tRNAGln、tRNAIle以外均能形成典型的二级结构。结论获得了湖北钉螺的线粒体基因组全序列。

水温对广州管圆线虫感染福寿螺影响的研究

目的通过观察不同水温对广州管圆线虫感染福寿螺的影响,了解福寿螺受感染的适宜水温和最低临界温度。方法实验室培养子代福寿螺和福建株广州管圆线虫Ⅰ期幼虫分别于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、和30℃的恒温箱中预温4h,达到所需温度后,分别将各温度组广州管圆线虫Ⅰ期幼虫倒入相应温度组的螺容器内使其感染,24h后观察记录各组螺的开厣率并移置(24℃±1℃)水温环境中饲养。20d后进行解剖,统计各组螺的感染率及感染度,分析感染率和感染度与感染水温的相关性。结果6组温度螺的感染率依次为0%、20%、55%、95%、100%、100%,福寿螺的感染率与水温间变化趋势的曲线方程为Y=1E-05x4-0.0011x3+0.0292x2-0.2362x+0.5833,推算最低临界感染温度值为6.66℃。感染度与水温有相关性(rs=0.3448,P<0.0032)。其中25℃与30℃虫负荷较高,25℃感染温度大于500条幼虫的螺数最多。结论广州管圆线虫感染福寿螺的适宜水温范围为20～30℃,最佳感染温度为25～30℃,理论上水温<6.66℃,福寿螺丧失摄入幼虫的能力。根据温度范围及幼虫生长规律推断:春夏秋季为螺感染的危险温度;夏秋季为流行该病的危险季节。

用贝叶斯方法对日本血吸虫感染两种检测方法进行评价

目的探讨估计日本血吸虫感染两种检测方法(ELISA和Kato-Katz)在现场应用时的灵敏度和特异度的新方法。方法采用贝叶斯(Bayes)统计方法,利用2005年云南省洱源县现场调查资料,对两种方法在流行区和非流行区应用时的检测效果分别进行了评价。结果在流行区,ELISA灵敏度较高(0.913,中位数,下同)而特异度较低(0.584),Kato-Katz法灵敏度低(0.148)而特异度很高(0.994);在非流行区,ELISA灵敏度为0.766,特异度为0.908,Kato-Katz法灵敏度和特异度与其在流行区的相似。结论在无金标准的情况下,Bayes方法能够对检测方法做出科学的评价。

日本血吸虫血清学阳性率时空分布格局的初步研究

目的分析和比较我国湖区和山区以县为单位的人群血吸虫感染血清学阳性率时空分布格局。方法采用贝叶斯时空模型,对2002-2005年全国以县为单位的血吸虫病年报资料中血清学检查数据、中分辨率成像光谱辐射计(MODIS)数据、归一化植被指数(NDVI)、地表温度(LST)和土地覆盖类型以及经济水平指标进行分析。结果在湖区,人群血吸虫血清学阳性率与7～8月NDVI均值、水体比例和草地等比例呈正相关(回归系数分别为0.650、0.662和0.832);在山区,人群血吸虫血清学阳性率与1～2月NDVI均值和草地等比例呈正相关(回归系数分别为2.631和0.400),与7￣8月NDVI均值呈负相关(回归系数为-0.288)。湖区人群血吸虫血清学阳性率每年空间相关系数位于0.868～0.945之间,山区的多数年份无统计学意义。结论在湖区和山区,自然环境因素对血吸虫病的影响有所不同;湖区人群血吸虫血清学阳性率存在很强的空间相关性且每年略有差异,而山区的空间相关性不强。

“福寿螺”学名中译名的探讨

针对目前国内对"福寿螺"的中文译名混乱之问题,通过收集有关"福寿螺"相似种的相关研究报道,比较分析可以传播广州管圆线虫病螺种及相似种的特征,发现我国大陆地区传播广州管圆线虫病的Pomacea canaliculata的属名尚无正式中文译名,其现用中文名易与相关螺种混淆。因此,建议将Pomacea译为"福寿螺属",Pomacea canaliculata则译为"小管福寿螺"。

北京市2006年市售福寿螺中广州管圆线虫感染状况调查

目的了解2006年北京市水产市场出售的福寿螺中广州管圆线虫的感染状况。方法分别从北京市三个水产市场不同摊点采集福寿螺样本共47只,采用胃蛋白酶消化法从螺体中分离广州管圆线虫幼虫,并用直接镜检法在消化后的沉渣中查找广州管圆线虫幼虫,幼虫的分期根据管圆线虫不同时期形态特点进行判定。结果采集的47只福寿螺有9只检出广州管圆线虫幼虫,感染率为19.15%,其中有1件样本检出Ⅰ期幼虫,8件样本检出Ⅱ期幼虫。结论北京市水产市场出售的福寿螺部分感染有广州管圆线虫。