禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析ORF3蛋白的表达形式后进行纯化,并免疫新西兰白兔以获得兔抗ORF3蛋白多克隆抗体,利用间接ELISA试验检测多克隆抗体的效价,利用Western Blot试验和间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体特异性。结果显示,成功构建了pET-32a-ORF3重组原核表达质粒,并通过原核表达系统成功诱导表达了27 ku不可溶性的aHEV ORF3重组蛋白;Western Blot试验和IFA试验结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别ORF3蛋白,ELISA结果显示,多克隆抗体效价为1∶51 200。成功表达CaHEV-GDSZ01株的ORF3蛋白,并制备了其多克隆抗体。

鸡源山夫登堡沙门菌分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

【目的】确定广东某肉鸡养殖场疑似沙门菌感染病例的病原及其药物敏感性,为制定有效的防控和净化措施及合理的用药方案提供科学依据。【方法】本研究对广东省某规模化鸡场若干份病鸡的肝脏和肠道样品进行沙门菌的分离培养、革兰染色、生化试验、invA特异性基因PCR鉴定、16S rRNA鉴定、血清学分型,采用K-B纸片法检测菌株对20种抗菌药物的敏感性,并通过PCR方法检测菌株的耐药基因和毒力基因。【结果】细菌分离培养可见无色透明、呈细小的露珠样菌落或光滑圆整、透明湿润、中心为黑色的菌落,疑似菌落革兰染色呈粉红色、散在分布、两端稍圆的短杆菌,无荚膜,无芽孢;分离菌生化试验呈产气、底层产酸、产硫化氢呈黑色且斜面产碱变红现象;对疑似菌落DNA进行PCR扩增,invA特异性基因扩增出大小约为285 bp的条带,16S rRNA基因扩增出大小约为1500 bp的条带,本研究共分离鉴定出8株山夫登堡沙门菌。药物敏感性试验结果显示,8株菌对头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、米诺环素、强力霉素、多黏菌素B均无耐药性,但对青霉素、头孢氨苄、万古霉素、红霉素、林可霉素、氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢曲松、头孢哌酮、链霉素、四环素的耐药率较高,介于87.5%~100%,且分离株均为多重耐药菌;有7株菌均检出qnrS和stcM耐药基因,有1株未检出任何耐药基因;毒力基因检测结果显示,毒力基因invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 1的检出率均为100%,sopB和ssaR基因检出率分别为50.0%和62.5%。【结论】本研究分离的鸡源山夫登堡沙门菌均具有多重耐药性,对头孢他啶、阿米卡星等7种药物敏感,invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 16种毒力基因的携带率均为100%。本研究结果补充了鸡源沙门菌病的流行病学资料,为临床沙门菌的防控和净化提供了理论参考。

有限元法在零件加工中的变形和控制设计研究

于机械加工领域,针对加工阶段各类特性的分析极为关键,比如动、静、热特征。切削加工阶段的应力以及变形等情况均能够利用有限元法获取一定程度的预知,以此为后期工艺设计提供极具精度的参数标准。基于此,本文基于有限元法对零件加工中的变形以及控制问题予以研究,以薄壁零件为论点,详细阐述有限元法在该领域中的应用,进而为相关工作人员提供价值参考。

长江经济带战略背景下四川省区域经济发展格局研究

在长江经济带战略背景下,沿江省市的区域平衡和可持续发展一直是各界关注的焦点.本研究采用因子分析法,基于2015年四川省GDP总量、人均GDP数据、社会固定资产投资、人均耕地面积等16个因子,对四川省各州市的区域经济发展状况进行了研究分析,结果表明:①四川省的区域经济发展以成都为极核,呈现出一枝独秀的特征;②四川省仅成都市社会经济发展水平高,德阳市、绵阳市等6个市社会经济水平较高,其他州市综合发展水平处于较低和低的状态,总体呈现低平衡状态;③四川省各区域发展水平与社会历史、地理环境、区域政策和资源赋存等因素相关.针对存在问题提出相关建议,以期为四川省以后的发展提供参考性意见和相关决策支持.

不同添加剂对全株玉米青贮的影响

为了评价3种不同类型添加剂对全株玉米青贮品质的影响,将化学添加剂(Chemical additives,CA)、淀粉酶(Amylase,AM)和布氏乳杆菌制剂(Lactobacillus buchneri,LB)添加于蜡熟期的全株玉米,并以空白为对照(CK),装填入聚乙烯袋中贮藏90 d后进行青贮品质的测定。结果发现:只有添加LB后,乙酸(AA)含量极显著高于其他处理(P<0.01),氨态氮(AN)含量极显著低于其他处理(P<0.01);各处理组的p H值、乳酸(LA)含量和丙酸(PA)含量均没有显著性差异(P>0.05);各处理组养分含量也差异不显著(P>0.05)。说明在对蜡熟期全株玉米青贮时,添加布氏乳杆菌可以很好地改善青贮饲料的品质,提高乙酸含量,从而增强全株玉米青贮饲料的有氧稳定性。

不同碳氮源对Paracoccus sp.QD15-1降解邻苯二甲酸二甲酯的影响

邻苯二甲酸二甲酯(Dimethyl phthalate, DMP)是一种高毒性的有机污染物,Paracoccus sp.QD15-1能够高效降解DMP,碳氮源是微生物需求量最大的生长要素。本实验以Paracoccus sp.QD15-1为研究对象,在基础无机盐(MSM)培养基中分别外加不同碳氮源(碳源分别为5 g·L^-1的葡萄糖、蔗糖、乳糖和淀粉;氮源分别为5 g·L^-1的硫酸铵、硝酸钠、硝酸铵和尿素),研究Paracoccus sp.QD15-1生长和降解DMP能力的变化。结果表明,外加4种碳源后,菌株生物量和降解DMP能力均显著提高,其中外加淀粉处理的最大比生长率达到0.13 lg(cfu)·h^-1,36 h降解率为78.2%,DMP半衰期为15.6 h。外加4种氮源后,降解菌的生物量均有所上升,其中外加尿素,36 h降解率为62.8%。研究表明,Paracoccus sp.QD15-1在不同碳氮源中均能够较好地降解DMP,且外加淀粉作为碳源和外加尿素作为氮源的降解效果更佳,在实际工程应用中具有良好前景。

人文地理与城乡规划专业招生的时空演化及驱动因素--以湖北省属高校为例

随着社会对规划人才需求的提升,各高校人文地理与城乡规划专业的招生也引起了广泛关注。从地理学视角出发,对2013—2017年湖北省属高校人文地理与城乡规划专业招生的时空特征和影响因素进行分析。从时间上来看,研究期内该专业招生人数整体呈下滑趋势,2013—2015年下降幅度较大,2016年有所回升,但幅度较小。2013—2017年,该专业在外省计划招生人数逐渐上升,但不影响整体趋势。从空间上来看,以地理特征划分,招生人数总体呈现西多东少、中部居中、东北无分布的格局,以秦岭—淮河为界划分,总体呈现南多北少的分布格局。影响该专业招生时空分布的主要因素有人口因素、经济发展水平和政策差异。除上述因素外,社会因素、文化因素等也对该专业招生的时空分布产生一定影响。

鸭圆环病毒编码蛋白功能研究进展

鸭圆环病毒病是一种重要的免疫抑制性疾病,可引起鸭各免疫器官损伤及淋巴细胞严重减少,大大增加了病原菌混合感染的概率,给养鸭业带来严重的经济损失。鸭圆环病毒基因组为单股环状DNA,主要编码3种蛋白,分别为Rep蛋白、Cap蛋白及与细胞凋亡有关的ORF3蛋白。研究病毒编码蛋白的功能对于病毒致病机制研究及相关疫苗的研制具有重要作用。本文就鸭圆环病毒目前已知编码的蛋白功能进行详细地叙述,以期为鸭圆环病毒病的致病机制研究及防控提供参考。

Paracoccus sp. QD15-1发酵培养基优化

Paracoccus sp. QD15-1是一株高效酞酸酯降解菌,在酞酸酯污染修复方面具有较好的利用前,而廉价发酵基质是应用于生产实践的前提。本实验以Paracoccus sp. QD15-1为研究对象,用爬坡法来确碳源、氮源和微量元素的最佳范围,通过响应面中心合成设计法优化发酵培养基。研究结果表明,最优的碳源为玉米面粉,氮源为大豆面粉;经爬坡实验确碳源、氮源和痕量元素分别为10,20,1.5mL/L;响应面实验确最优培养基基质为玉米面粉9.5 g/L、大豆面粉18.6 g/L和痕量元素1.64 mL/L,预测Paracoccus sp. QD15-1的菌落数4.67×109 CFU/mL,实测菌落数为4.5×109 CFU/mL。相较于DMP无机盐培养基菌量提高22.22%,廉价发酵培养基大幅降低生产成本,为大规模发酵生产Paracoccus sp. QD15-1提供重要技术支持。

基因Ⅱ型鹅星状病毒ORF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

旨在利用原核表达系统表达基因Ⅱ型鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)ORF2蛋白,制备兔源多克隆抗体,并对制备的多抗进行效价检测及鉴定。根据GoAstV-GDZJ37株ORF2基因序列设计特异性表达引物,利用RT-PCR方法进行目的基因扩增,将其连接至原核表达载体pET-32a(+);经酶切鉴定和测序正确后,转化至表达感受态细胞,并进行诱导表达及SDS-PAGE分析。以无His标签的ORF2蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备兔源多克隆抗体。将含His标签的ORF2蛋白经Ni-NTA亲和层析法进行纯化,并以纯化后的蛋白作为检测原,通过I-ELISA方法检测兔源多克隆抗体的效价,并通过Western blot及IFA检测方法鉴定其特异性。结果显示,克隆获得GoAstV-GDZJ37株ORF2基因,并利用原核表达系统分别表达2种重组蛋白,大小分别为77、95 kDa,且均为不可溶性表达。I-ELISA结果显示,多克隆抗体的效价为1∶102400,表明无His标签的ORF2蛋白具有良好的免疫原性;Western blot及IFA结果显示,多克隆抗体可与含His标签的ORF2蛋白及GoAstV毒株均能发生特异性反应,表明制备的多抗具有良好的反应性。本试验成功建立GoAstV ORF2蛋白原核表达系统,并制备高效价兔源多克隆抗体,为后续GoAstV血清学诊断及GoAstV致病机制的深入研究提供了依据。

鹅4种常见病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

为了建立一种能快速检测鹅星状病毒(GoAstV)、鹅圆环病毒(GoCV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank数据库已公布的GoAstV的ORF2基因、GoCV的Rep基因、GPV的VP3基因及DTMUV的NS5基因序列,分别设计4对特异性扩增引物,通过对扩增条件的优化及特异性、灵敏性的检验,建立了可同时检测以上4种病原的多重PCR检测方法,并对40份临床样品进行检测。结果显示,建立的多重PCR检测方法具有良好的特异性和较高的灵敏性,可同时扩增出大小为731 bp(GoAstV)、543 bp(GoCV)、392 bp(GPV)、200 bp(DTMUV)的特异性片段,且利用本试验建立的多重PCR检测方法对水禽其他病原体进行扩增均呈阴性。该方法对GoAstV、GoCV、GPV及DTMUV最低检出限度分别为4×10^(3),4.22×10^(3),4.43×10^(3),4.73×10^(3)copies/μL。单一PCR检测方法对临床病料样品检测结果与多重PCR检测结果一致,证明该方法可用于这4种病原临床病料样品的检测。