快速灵敏新型冠状病毒多重RT-PCR检测方法的建立与验证

目的建立一种快速、灵敏、特异的多重荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,用于快速准确的检测新型冠状病毒(COVID-19)。方法根据NCBI美国国家生物信息中心上公布的COVID-19基因序列,选取其保守区域ORF1ab和N基因序列作为扩增对象,分别设计特异性引物及TaqMan探针,同时设计反应体系内参检测系统。通过酶反应体系条件优化建立多重荧光RT-PCR检测体系,分别采用羧基荧光素(FAM)盒绿色荧光蛋白(VIC)荧光目的基因标记探针,采用ROX染料标记内标探针,实现了多基因的实时同步检测。进行了准确性、灵敏度、重复性、稳定性检测。结果建立的多重荧光RT-PCR方法准确性良好,阳性质控重复检测20次,符合率100%;最低检测限达到200 copies/mL,阳性质控品批内、批间变异系数均小于2.30%,临界阳性质控品批内、批间变异系数均小于2.71%;检测试剂-20℃冻存3个月后,准确性、最低检测限、重复性保持稳定。结论建立的多重荧光RT-PCR检测方法准确、灵敏、稳定、可重复,可用于COVID-19新冠病毒感染的快速检测。

微卫星标记在人参和西洋参鉴别中的应用

从GenBank中寻找含有简单重复序列(SSR)位点的人参DNA片段序列,设计SSR引物,挑选PCR扩增条带清晰的引物,对人参和西洋参进行PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,选择能够区别2个种的引物.共有来自8个SSR位点的9对引物能扩增出可区分人参和西洋参的特异性片段,其中7对SSR引物在西洋参中能稳定地扩增出特异性条带,另外2对引物仅在人参个体中可以扩增得到特异性的条带.SSR-PCR作为一种简便、重复性高的分子标记鉴定技术,可以作为人参和西洋参种间鉴定的有效方法.