NLRP3炎症小体通路在IL-6、TNF-α促进椎间盘髓核细胞神经营养因子和感觉神经肽P物质表达中的作用

目的探讨NLRP3炎症小体通路在细胞炎症因子IL-6和TNF-α促进椎间盘髓核细胞(NP细胞)神经营养因子(NGF)和感觉神经肽P物质(SP)表达中的作用。方法从3只Sprague-Dawley大鼠椎间盘组织中提取原代NP细胞,分为对照组、处理组和MCC950组。对照组不经过任何处理,处理组用浓度1、10和100 ng/mL的IL-6或TNF-α处理48 h,MCC950组用1μmol/L的NLRP3抑制剂MCC950处理1 h后,用100 ng/mL的IL-6或TNF-α处理48 h。采用ELISA检测细胞培养上清液中NGF和SP的水平。结果与对照组相比,1、10和100 ng/mL IL-6或TNF-α处理NP细胞后,NGF和SP蛋白水平升高(P均<0.05)。MCC950组NGF、SP蛋白水平均较100 ng/mL IL-6或TNF-α处理组降低(P均<0.05)。结论细胞炎性因子IL-6和TNF-α能够通过激活NP细胞中NLRP3炎症小体信号通路,促进NGF和SP的表达。

神经生长因子和炎症因子的表达在退行性颈椎失稳症疼痛中的机制研究

目的:分析神经生长因子(NGF)和炎症因子在颈椎失稳大鼠模型中的表达,探究退行性颈椎失稳症疼痛产生的机制。方法:将8~10周龄Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组大鼠切除颈椎C5~C6棘突及韧带,用剪刀破坏C5~C6关节囊,构建颈椎失稳模型。对照组大鼠行除颈椎失稳外的假手术。术后14d处死两组大鼠,取颈部背根神经节和椎间盘组织,进行免疫组化、qRT-PCR和ELISA检测感觉神经肽P物质(SP)的表达、神经纤维的分布、NGF和炎症因子的表达情况。结果:与对照组相比,模型组大鼠的颈部背根神经节中有大量的SP阳性蛋白,椎间盘中有大量的神经纤维分布和神经肽Y(NPY)的表达。模型组大鼠椎间盘组织中的肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、诱导型一氧化氮合酶和NGF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在颈椎失稳过程中,炎症因子通过促进椎间盘组织中NGF的表达,从而引起神经纤维的生成和神经递质的传导,导致痛觉产生。

SDF-1/CXCR4轴在胃癌中的研究进展

尽管近年来胃癌的诊断与治疗取得了长足发展,但胃癌致死率仍高居全球各类肿瘤的第三位。炎性趋化因子家族包含约50位成员,参与增殖、分化、迁移等多项细胞功能的调节。炎性趋化因子受体CXCR4及其配体基质细胞衍生因子1(SDF-1)在多种肿瘤中表达。SDF-1在胃癌中高表达,SDF-1/CXCR4轴促进胃癌细胞增长、增殖与转移,在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。本文着重论述SDF-1/CXCR4轴在胃癌发生发展中的研究进展。

PCT、CRP及ESR在脊柱手术后非感染患者中的变化规律

目的研究降钙素原(procalcitonin,PCT)、C反应蛋白(C-reactionprotein,CRP)、血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)在择期脊柱手术患者无感染并发症时的动态变化规律,比较三种炎症指标在早期判断择期脊柱手术后感染中的意义。方法研究对象为择期脊柱手术的83名患者(37名女性,46名男性)。与研究相关的临床变量包括年龄、性别、病史、手术时间及内植物。监测指标分别为体温、白细胞计数、ESR、CRP和PCT,分别在术前和术后第1、3、5天测定。结果ESR于手术后第3天开始明显升高,术后第5天仍具有升高趋势。PCT浓度峰值出现在术后第1天,与年龄、性别、糖尿病、高血压、手术时间及内植物使用无关。CRP浓度峰值出现在术后第3天,在老年、男性、糖尿病、高血压、较长的手术时间及内植物使用的患者中显著增高。结论与传统的炎症标志物ESR、CRP相比,PCT作为脊柱手术术后尤其是发热患者是否存在感染可能性的监测指标,具有更高的敏感性和特异性。PCT与CRP相比出现峰值的时间更早,根据变化趋势对于早期判断是否存在感染具有更高的时效性。

敲低CXCR4表达抑制胃癌细胞HGC27的增殖

目的:初步探索CXCR4与胃癌细胞HGC27增殖的关系。方法:构建携带CXCR4短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体质粒,并转染至293T细胞中,48 h后收集上清感染HGC27细胞,用Western印迹鉴定其干扰CXCR4蛋白表达的效果,采用CCK8实验检测敲低CXCR4表达对HGC27细胞增殖的影响。结果:双酶切鉴定和基因测序表明敲低CXCR4慢病毒载体质粒构建成功;慢病毒感染后有效抑制HGC27细胞中CXCR4蛋白水平,敲低CXCR4表达对HGC27细胞增殖有显著的抑制作用。结论:CXCR4参与了胃癌细胞HGC27的增殖,提示CXCR4有望成为一个新的胃癌治疗靶点。

EphA3促进胃癌细胞BGC823的增殖

目的:初步探索EphA3与胃癌细胞BGC823增殖的关系。方法:用T_4DNA连接酶将EphA3的全长cDNA片段连接到酶切后的慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro中制备慢病毒,感染胃癌BGC823细胞建立过表达EphA3细胞系,Western印迹检测目的蛋白的表达,CCK8细胞生长实验和裸鼠成瘤实验检测EphA3对BGC823细胞增殖的影响。结果:双酶切鉴定与基因测序表明过表达EphA3慢病毒载体构建成功;Western印迹表明建立了过表达EphA3的BGC823细胞系,高表达EphA3对BGC823细胞的增殖和成瘤后生长有明显的促进作用。结论:EphA3促进BGC823胃癌细胞增殖,为胃癌的靶向性治疗及个性化治疗提供了线索。

依维莫司和MK-2206联合用药协同抑制肝癌细胞增殖

目的研究哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(mTOR)抑制剂与AKT激酶抑制剂联合用药对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法 mTOR抑制剂西罗莫司及衍生物依维莫司单独作用HepG2和BEL-7402肝癌细胞0,1,3,6,12和24 h,或与胰岛素样生长因子1受体抑制剂NVP-AEW541或AKT激酶抑制剂MK-2206联合作用24 h,Western蛋白质印迹法检测不同时间点mTOR激酶下游分子p70S6K和AKT激酶活性;依维莫司与MK-2206单独或联合作用肝癌细胞72 h,分别采用平板克隆和CCK8法检测细胞生长增殖和存活力。结果单用西罗莫司和依维莫司可显著抑制肝癌细胞中p70S6K激酶活性(P<0.01),并在不同时间点反馈激活AKT激酶活性(P<0.05);NVP-AEW541或MK2206和依维莫司联合作用肝癌细胞后显著抑制AKT激酶的反馈激活(P<0.01);与使用依维莫司或MK-2206相比,联合使用依维莫司和MK-2206作用肝癌细胞后,显著抑制肿瘤细胞的克隆形成能力;肝癌细胞增殖率较依维莫司单用下降>45%(P<0.01)。结论肝癌细胞对西罗莫司及衍生物的耐药可能是通过反馈激活PI3K/AKT通路导致的,依维莫司联合使用MK-2206可协同抑制肝癌细胞的生长和增殖。

STAT3对PTEN缺失的HGC27细胞增殖的影响

目的:初步探索STAT3与HGC27胃癌细胞增殖的关系。方法:用T4 DNA连接酶将外源片段与酶切后的p LKO.1载体连接,将构建的重组质粒转染293T细胞,48 h后收集上清用于感染HGC27细胞,Western印迹检测蛋白的表达,生长实验检测其对肿瘤细胞增殖的影响。结果:基因测序和双酶切鉴定表明敲低STAT3质粒构建成功;慢病毒质粒有效抑制HGC27细胞中STAT3蛋白水平,抑制STAT3对HGC27细胞的增殖有明显抑制作用。结论:在PTEN缺失的HGC27胃癌细胞中STAT3促进肿瘤增殖,但STAT3并不是在所有PTEN缺失的肿瘤细胞中都发挥抑制肿瘤形成的作用。