纳米材料提高油基钻井液乳化剂耐温性能研究

现有的油基钻井液乳化剂主要以表面活性剂和聚合物为主,高温下分子链易断裂,长周期的稳定性不足。通过引入纳米材料,研制了耐高温的SSE-200型乳化剂。通过破乳电压法和高温老化法评价了乳化剂的性能,并建立了耐高温油基钻井液体系。研究表明:SSE-200型乳化剂耐温能力强,200℃老化48 h乳状液的破乳电压值仍然在300 V以上。以SSE-200型乳化剂为核心处理剂构建了一套油基钻井液体系,密度在0.9~2.3 g/cm^(3)之间可调,200℃老化48 h后体系的塑性黏度、动切力和滤失量基本不变,破乳电压值在750 V以上。

猪细小病毒1型河南流行毒株的遗传进化分析

【目的】监测河南省猪细小病毒1型(porcine parvovirus 1,PPV1)的变异情况。【方法】采集自河南省鹤壁市和安阳市初产母猪的流产胎儿阳性样品,利用PCR方法鉴定获得2株PPV1流行毒株,经过全基因组测序,分别命名为CH/HN-H/2021和CH/HN-3/2021。通过分析同源性和构建遗传进化树分析PPV1全基因组、NS1基因、VP2基因的变异情况,并且比对分析NS1蛋白和VP2蛋白的氨基酸变异情况及非编码区基因缺失情况。【结果】2条序列的核苷酸相似性为99.9%;与46株国内外PPV1流行毒株全基因组的核苷酸同源性为93.5%~99.9%;NS1基因核苷酸同源性为98.6%~99.9%,NS1蛋白氨基酸同源性为98.2%~99.9%;VP2基因核苷酸同源性为98.4%~99.9%,VP2蛋白氨基酸同源性为98.3%~99.9%,说明本研究鉴定的毒株呈现遗传进化稳定性。本研究鉴定株与湖南及吉林毒株亲缘关系最近,而与河南原有毒株亲缘关系较远。在对NS1蛋白与VP2蛋白的氨基酸变异分析中发现,NS1蛋白发生6处突变,VP2蛋白发生7处突变,均在经典突变位点范围内,符合PPV1遗传变异的保守性。鉴定株VP2基因后部非编码区基因与NADL-2株相比缺失127 nt。【结论】本研究鉴定的毒株呈现遗传进化稳定性,河南省存在新旧PPV1毒株同时流行的情况。

2株GⅡb亚群猪流行性腹泻病毒分离、鉴定及变异分析

为了分离猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株,了解其进化趋势及致病性,并为后续PEDV特性及疫苗研发提供候选毒株,本研究将PEDV阳性样品接种于Vero细胞传代,采用间接免疫荧光试验(IFA)对分离株进行鉴定,基于RT-PCR及第2代测序技术进行全基因组测序、同源性比对及遗传进化分析,通过动物致病性试验进行毒力测定。IFA表明2株分离株能与PEDV S蛋白抗体发生特异性反应,确定为PEDV。2株毒株与参考毒株核苷酸同源性为95.6%~98.7%,属于变异毒株GⅡb群。分离的2株毒株分别命名为CH-HNKF-03和CH-HNPDS-01株。CH-HNKF-03和CH-HNPDS-01对哺乳仔猪攻毒后18 h即可发病,于24~56 h均出现典型的水样腹泻、呕吐、消瘦、脱水等症状,96 h内全部死亡。综上所述,本研究获得2株GⅡb亚群PEDV变异强毒株,为新型PEDV疫苗研发提供了候选毒株。

PRVΔgE/TK/UL49.5基因缺失株的构建及相关特性研究

为探究UL49.5基因缺失对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株毒力的影响,本试验以PRVΔgE/TK株为亲本株,通过同源重组和Cre-loxP系统构建重组病毒PRVΔgE/TK/UL49.5,并对该毒株遗传稳定性、体外生长特性、干扰SLAⅠ抗原递呈能力及对小鼠的安全性进行初步研究。经PCR及测序确定PRVΔgE/TK/UL49.5株UL49.5基因缺失474bp。与PRV YY和PRVΔgE/TK株相比,PRVΔgE/TK/UL49.5在Vero细胞上增殖滴度相似,可稳定传代,具有良好的增殖能力。与PRV YY株相比,PRVΔgE/TK/UL49.5株感染PK-15细胞后下调SLAⅠ和TAP转录水平能力降低,并对小鼠具有安全性。本试验通过同源重组技术构建了PRVΔgE/TK/UL49.5株,为PRV基因缺失疫苗候选毒株筛选奠定了基础。