恙虫病东方体目视LAMP现场化检测方法的建立

目的建立基于“染料-蜡丸”的目视LAMP检测恙螨中恙虫病东方体的方法,为恙虫病的防治提供新工具。方法选择Ot GroEL基因作为检测靶序列,在线设计并合成LAMP引物。构建r Ot-GroEL重组质粒作为阳性对照。建立基于SYBR Green I的“染料-蜡丸”目视LAMP,并联合便携式LAMP仪使其利于现场应用。结果新设计的引物针对Ot GroEL基因的237 bp靶区域,所构建的重组质粒r Ot-GroEL测序结果正确。在便携式LAMP仪上运用“染料-蜡丸”目视LAMP法,其检测下限为1×10^2拷贝质粒。结论成功建立了一种可与便携式LAMP仪联合使用的检测恙螨体内恙虫病东方体的“染料-蜡丸”目视LAMP法。

两种佐剂制备CIA大鼠模型的效果比较

目的:比较不完全弗氏佐剂(incomplete Freund′s adjuvant,IFA)和完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)分别与牛Ⅱ型胶原蛋白(calfⅡcollagen,CⅡ)构建的胶原诱导的类风湿性关节炎(collagen-induced rheumatoid arthritis,CIA)大鼠模型的效果。方法:选取30只8周龄SD大鼠,随机分为0.9%氯化钠溶液组(对照组)、IFA+CⅡ组和CFA+CⅡ组,每组10只。将IFA/CFA与CⅡ以等体积混匀,分别从鼠尾根部进行皮内注射,在第0天和第7天每只鼠分别注射200μL和100μL。采用相同方法注射0.9%氯化钠溶液作为对照组。从初次免疫开始,每7天记录1次关节炎指数(arthritis index,AI)分值。在第14天分别从3组中取5只大鼠获取踝关节,做HE染色并观察病理学变化。结果:造模第0天和第7天,3组AI值为0;初次免疫后第14天,IFA+CⅡ组和CFA+CⅡ组的AI均值分别为(6.5±0.5)和(7.4±0.4),2组差异有统计学意义(P<0.01);造模后第21天,IFA+CⅡ组和CFA+CⅡ组的AI均值分别为(8.8±0.5)和(7.8±0.8),2组差异有统计学意义(P<0.01);造模后第14天和第21天,2组差异比较均无统计学意义(P>0.05)。踝关节HE染色结果发现,IFA+CⅡ组踝关节软骨表面粗糙不平,轻微破坏;关节腔内可见炎性细胞浸润。CFA+CⅡ组关节软骨破坏明显,呈锯齿状,有明显的血管翳和大量的炎性细胞浸润。结论:使用IFA+CⅡ和CFA+CⅡ均可制备RA模型,IFA+CⅡ的炎症反应较轻,为制备RA模型的首选方案。

结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定

目的克隆并表达结核分枝杆菌HtpG分子,并鉴定其免疫反应性。方法采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌H37Ra HtpG基因,并克隆至pET22b质粒,测序筛选到重组成功的质粒。重组质粒pET22b-HtpG转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达的HtpG重组蛋白通过镍柱纯化。Western blot鉴定表达蛋白,并使用HtpG重组蛋白经ELISA法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。结果成功构建了pET22b-HtpG重组质粒;在大肠埃希菌中表达出分子质量约73kDa的重组蛋白。Western blot鉴定该重组蛋白具有良好免疫反应性,ELISA法检测肺结核患者血清中存在特异性抗HtpG抗体。结论在大肠埃希菌内成功表达HtpG重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。

HBV/HIV共感染抗反转录病毒治疗后乙型肝炎临床治愈的研究进展

由于HBV和HIV有类似的传播途径,HBV/HIV共感染现象十分普遍。值得注意的是,在接受抗病毒治疗后,HBV/HIV共感染患者中HBsAg清除率显著高于单独感染HBV的人群。然而,对于此现象背后的影响因素和具体机制,现有研究较少且结果存在差异。本文回顾了国内外关于HBV/HIV共感染的流行病学研究、临床特点以及乙型肝炎(简称乙肝)临床治愈率高的影响因素,并对未来的研究方向和趋势进行了展望。推测HBV/HIV共感染患者乙肝临床治愈率高可能与感染HBV的时间及基因型有关,但是尚未有明确的免疫学机制解释。