ELISA法定量检测长春新碱诱导的K562及K562/VCR凋亡

细胞凋亡是一种不同于细胞坏死的细胞死亡方式，具有特殊的形态学及生物化学特征。其生物化学变化主要表现为内源性核酸内切酶的激活。它依赖于Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋的核酸内切酶从核小体间连接处将双链ＤＮＡ切断，形成以１８０ｂｐ为最小单位的ＤＮＡ片断，经琼脂糖电泳分...

K562及K562/VCR对长春新碱诱导凋亡的敏感性

研究人类白血病细胞株Ｋ５６２及耐长春新碱的Ｋ５６２变异株Ｋ５６２／ＶＣＲ对长春新碱诱导凋亡的敏感性的差异，以探讨抗凋亡在白血病多药耐药性（ＭＤＲ）中的作用。方法将Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ分别用浓度为０、０．００１、０．０１０μｇ／ｍｌ的长春新碱诱导２４ｈ，用流式细胞仪ＰＩ染色法、ＴＵＮＥＬ法及ＥＬＩＳＡ法分别进行细胞凋亡检测。结果经浓度为０、０．００１μｇ／ｍｌ长春新碱诱导后，Ｋ５６２细胞凋亡率分别为（４．１０±０．１７）％、（１３．３０±３．７４）％，而Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞凋亡率分别为（３．６１±０．６９）％、（９．０６±４．２４）％，统计学显示两者差异无显著性（ｎ＝３，Ｐ＞０．０５）。而长春新碱浓度达０．０１０μｇ／ｍｌ时，Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞凋亡率分别为（３６．４８±６．７０）％、（１０．４５±３．７１）％，两者差异有极显著意义（ｎ＝３，Ｐ＜０．０１）。ＴＵＮＥＬ及ＥＬＩＳＡ检测结果与此类似。结论Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ对长春新碱诱导细胞凋亡的敏感性不同，耐药细胞对药物诱导细胞凋亡的抵抗性增强可能在白血病ＭＤＲ发生中有重要作用。

凋亡调节蛋白的表达与K562/VCR多药耐药性的关系

目的 探讨K5 6 2 /VCR细胞中凋亡调节蛋白表达的变化与其多药耐药性 (MDR)的关系。方法 通过免疫细胞化学法和免疫印迹法 (westernblot)对凋亡调节蛋白Bcl- 2、Bcl -XL、Bax、Bak在多药耐药细胞K5 6 2 /VCR和药物敏感细胞K5 6 2中的表达进行分析。结果 抗凋亡调节蛋白Bcl- 2、Bcl-XL 在K5 6 2 /VCR细胞中的表达阳性率分别为 (4 0 .0± 8.0 ) %和 (6 0 .0± 10 .0 ) % ,在K5 6 2细胞中为 (1.0± 0 .3) %和 (2 0 .0± 4.0 ) % ,阳性率差异均具有显著性 (n =3,P <0 .0 5 )。促凋亡调节蛋白Bax在以上两种细胞中的表达程度无明显区别。促凋亡调节蛋白Bak在两种细胞中均不表达或表达程度极低。结论 抗凋亡调节蛋白 (Bcl- 2、Bcl-XL)在K5 6 2 /VCR细胞MDR发生中可能发挥重要作用 ,而促凋亡调节蛋白Bax、Bak可能不起主要作用。

细胞培养物中的逆转录病毒检测

本文用非放射性法测定了K562,SP2/0,L-02,SPC-A-1,SMMC-7721和Hut-102等6个细胞培养液超离心沉淀物逆转录酶的含量,间接证明细胞培养物中逆转录病毒的存在。结果表明,Hut-102细胞为阳性,其它5个细胞系为阴性。

细胞培养中支原体污染的检测

本文介绍以应用指示细胞培养物的DNA荧光染色为主,辅之以微生物培养(支原体营养肉汤和琼脂培养)的方法作为细胞培养中的支原体污染的检测系统。用该系统检测了45个细胞系,支原体等微生物污染达66.6％,其中确证支原体污染率为31％。

高纯度羊促黄体生成素(oLH)的制备

羊促黄体生成素(oLH)的β亚基(oLH_β)是一种颇有潜力的抗生育疫苗。为筛选oLH_β的抗原决定簇(epitopes),开发由hCG_β-CTP 37和oLH_β最佳片段组成的复合疫苗,制备高纯度的oLH是必要前提。本文报道用抗oLH_β-IgG免疫亲和层析柱纯化oLH的新方法,得到了生物学活性相当于3,050·hCG IU/mg的oLH精制品,其电泳图谱显示高纯度的单一色带。本法具有纯度高、重复性好、操作简单的优点。

细胞培养中支原体污染的去除

在运用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产品中,支原体污染仍是一个颇为棘手的问题。11株人的细胞SPC—A1、K562、HUT-102、BT—325、6T—CEM、NKM—45、CNE、HL—60、QGY—7701、QZG、人羊膜细胞;3株小鼠细胞P388—1、YAC—1、P815;1株绒猴细胞B95—8;和一株杂交瘤QKT3等,已污染了支原体的细胞经MC—210 1μg/ml处理7天,支原体污染全部转阴性。去除了支原体的细胞株经一年的培养、传代、冻存复苏,多次支原体检测始终阴性。对去除了支原体的SPC—A1、K562、HUT—102、B95—8等细胞株测试了其相关特性,均未见受影响。人为用口腔支原体、猪鼻支原体、精氨酸支原体分别感染小鼠骨髓瘤Sp2/0和非洲绿猴肾细胞株Vero,然后经MC—210处理,支原体全部去除,且不影响Sp2/0在制备杂交瘤时的融合率和抗体的分泌。