人胸苷激酶基因cDNA克隆

目的 克隆人胸苷激酶基因cDNA。方法采用逆转录PCR方法扩增胸苷激酶cDNA ,用十二烷基氟波酯 (TPA)刺激人外周血细胞的mRNA为模板 ;扩增的PCR产物经TA克隆重组和内切酶鉴定 ,以及DNA序列分析确定克隆基因的序列。结果经逆转录PCR扩增出一个 70 0bp左右的DNA片段 ,TA克隆出现 1 6个阳性克隆 ,选择其中的一个克隆 (TKTA8)进行DNA序列分析 ,序列分析结果表明TKTA8克隆重组的序列是人胸苷激酶的cDNA序列。结论从外周血细胞中得到了hTK完整的开放读码框架。

hTK1质量放大压电石英晶体免疫传感器研究

目的研制高灵敏度的质量放大压电石英晶体免疫传感器用于人血清中癌症标志物胸苷激酶1(hTK1) 的检测.方法将半胱氨自组装膜用戊二醛活化,共价固定hTK1抗原,通过和待测抗原竞争与一定浓度的酶标抗体反应,应用4-氯-1萘酚和H2O2质量放大体系,测得样品中待测抗原的浓度.结果 hTK1 的浓度在 0.1～10 ng/ml 范围内,与传感器频率的变化之间呈良好的线性关系.应用此方法对患有不同癌症病人血清进行测定,发现正常血清与癌症血清的频移值存在显着差异.结论基于质量放大原理的压电石英晶体免疫传感器可定量测定血清中的 ng 水平的 hTK1 抗原,有望用于癌症的早期诊断和临床检测.

人胸苷激酶单克隆抗体的制备

目的制备人胸苷激酶单克隆抗体。方法用大肠杆菌表达和纯化的人胸苷激酶免疫Balb/C小鼠,免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,HAT选择培养和ELISA筛选阳性克隆,阳性克隆杂交瘤注入小鼠腹腔制备腹水,用ELISA和免疫组化鉴定胸苷激酶单克隆抗体。结果经细胞融合和筛选得到37个阳性单克隆杂交瘤,其中有二株杂交瘤可以稳定地产生人胸苷激酶的特异性抗体,制备的腹水中有高效价的抗体活性。结论用原核表达的人胸苷激酶免疫小鼠可以制备出人胸苷激酶特异性单克隆抗体。

压电免疫传感器用于人胸苷激酶及其与单克隆抗体反应亲和常数的测定

目的用自制单克隆抗体构建人胸苷激酶(hTK)压电免疫传感器,测定免疫反应亲和常数,评价抗体的活性。方法在压电石英晶体的金电极上自组装一层蛋白A,定向固定hTK单克隆抗体,测定不同浓度hTK引起的频移值。结果根据Scatchard绘图法,对免疫反应亲和常数进行了估算,为1.85×106mol/L。结论该压电免疫传感器可直接测定溶液中的hTK,得到免疫反应的亲和常数,并证实实验室制备的单克隆抗体具有较高活性。

人胸苷激酶基因在大肠杆菌中的表达

目的 在大肠杆菌中表达人胸苷激酶 (hTK)。方法 用内切酶将hTKTA克隆中的hTK基因切下 ,并与同样内切酶切的载体PET2 8a+连接 ,转化大肠杆菌 ,筛选阳性克隆 ,酶切和DNA序列分析鉴定 ,用IPTG诱导培养阳性克隆 ;SDS -PAGE鉴定hTK在大肠杆菌中的表达。结论 hTK基因重组入PET2 8a +的EcoRI和XhoI位点 ,IPTG可以明显诱导hTK在大肠杆菌中表达。

血清TK1压电石英晶片免疫传感器测定法的建立及其在恶性肿瘤诊断中的初步应用

目的建立压电石英晶片免疫传感器测定方法检测人血清中胸腺嘧啶脱氧核苷激酶-1(TK1),探索其对常见恶性肿瘤早期诊断的可行性。方法克隆人TK1基因,表达并纯化TK1基因融合蛋白,再制备并纯化TK1单克隆抗体后,用生物素标记TK1单克隆抗体。再选择并利用特殊TK1固化剂和镀金压电石英晶体制备压电石英晶体TK1免疫传感器及抗干扰反应池及屏蔽系统。最后,用此免疫传感器方法检测正常人、不同肿瘤患者血清。结果肝癌血清的TK1水平最高(2·44±0·46)ng/ml,其次为乳腺癌血清(1·16±0·24)ng/ml,二者的TK1水平均明显高于其他恶性肿瘤血清(P<0·001)。肺癌、胃肠癌、生殖系统癌以及其他恶性肿瘤血清间的TK1水平接近(P>0·05),但与良性肿瘤血清TK1存在显著性差异(P<0·001)。此外,良性肿瘤血清的TK1频移值亦显著大于正常人血清(P<0·001)。结论压电石英晶片免疫传感器可作为一种简便灵敏TK1测定新方法用于临床恶性肿瘤普查以及区分肿瘤类型,尤其是肝癌的诊断。

直管型科氏质量流量计的有限元模型及其计算

弹性管是科氏质量流量计的重要组成部分,其结构参数的设计将直接影响传感器测量的精度,灵敏度。针对直管型科氏质量流量计的实际结构,简述了其工作机理,给出了弹性直管的有限元模型,计算、分析了弹性管有关结构参数与其一、二阶固有频率的关系;