浙江省首例14型猪链球菌人源分离株鉴定及分子特征分析

目的对浙江省首例14型猪链球菌菌株进行综合鉴定与分子分型特征研究。方法对目标菌株进行镜检、生化、血清学玻片凝集试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定,同时利用聚合酶链(PCR)技术检测该菌株链球菌属(tuf)、猪链球菌种(16S rRNA)、猪链球菌血清型基因以及毒力基因,另采用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-fieId gel electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及最小核心基因组群(minimum core genome groups,MCG群)方法分别对菌株进行分子分型检测。结果传统细菌学方法和质谱鉴定技术以及核酸检测均将这株人源分离株鉴定为14型猪链球菌;25种毒力基因检测,除salKR与89K PAI基因检测为阴性,其它均为阳性;分子分型检测该菌株为高致病性ST1及MCG Group1型,PFGE检测结果表明此菌株同浙江省主要流行毒力株在同一主分支,相似性达94.95%。结论本次检出14型人源猪链球菌强毒力株,属高致病基因型ST1/MCG Group1型菌株,属浙江省首次报道,今后应密切关注省内该型别菌株流行趋势。

Red同源重组在大肠杆菌基因敲除中的应用

大肠杆菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是Red同源重组技术在大肠杆菌基因敲除中的应用已经越来越成熟。综述了几种不同的Red同源重组技术,并分析了每种方法的原理及操作策略,指出了各种方法的特点及优势。

浙江省嘉兴市2株与手足口病相关的柯萨奇病毒B3分离株的全基因组特征分析

目的分析浙江省嘉兴市2株与手足口病相关的柯萨奇病毒B3型(CVB3)毒株的全基因组序列特征,为手足口病的监测与防控提供科学依据。方法收集2021年浙江省嘉兴市辖区内7个区、县疾病预防控制中心上送至嘉兴市疾病预防控制中心的手足口病监测样本,经实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,real-time qRT-PCR)检测后,选取肠道病毒核酸通用阳性的样本接种于人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞和人喉癌上皮(human larynx carcinoma,HEp-2)细胞进行病毒分离培养,对产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)的阳性分离株进行高通量测序(Illumina NextSeq 550平台),鉴定出2株CVB3,并获得其全基因组序列。利用DNAstar软件对核苷酸序列及所编码氨基酸进行同源性分析;用MEGA6软件对VP1区进行基因分型,同时进行系统进化树的绘制;采用Simplot3.5.1软件进行重组分析。结果2株CVB3毒株基因组全长分别为7352 bp和7367 bp,其核苷酸和编码区氨基酸相似性分别为93.3%和99.5%。与CVB3原型株相比,2株毒株在编码区无碱基插入或缺失,在非编码区存在个别碱基的插入或缺失,与原型株的核苷酸相似性分别为78.9%和79.1%,编码区氨基酸相似性分别为96.0%和96.1%。VP1区系统进化树分析结果显示,本研究的2株CVB3属于E基因型,与2020年广东省分离株同属于国内新发现的分支(相似性95.09%~98.18%),与国外澳大利亚、日本分离株亲缘性最近。2株CVB3的全基因组及其P1、P2、P3区基因序列系统进化树和Simplot重组分析结果显示,2株CVB3在P2和P3非结构编码区的不同区段与不同血清型的肠道病毒有型间重组现象。结论嘉兴市的2株CVB3毒株属于国内新发现的E基因型,有重组现象,需关注CVB3的流行潜力并加强监测。

顶空-气相色谱法检测生活饮用水11种挥发性卤代烃分析

目的建立一种快速、准确、高效的顶空毛细管柱气相色谱法检测饮用水二氯甲烷、1,1-二氯乙烷、三氯甲烷、1,1,1-三氯乙烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯、一溴二氯甲烷、二溴一氯甲烷、四氯乙烯和三溴甲烷等11种挥发性卤代烃。方法样品经40℃水浴顶空平衡40 min后,抽取液上气体进样,采用DB-17毛细管色谱柱分离,电子捕获检测器检测,外标法定量。结果在所选择的实验条件下,11种卤代烃均能得到良好的分离。在不同浓度下具有良好的线性关系,相关系数(r)为0.9969~0.9998;平均加标回收率为94.8%~107.0%,相对标准偏差(RSD)为1.3%~5.9%,检出限为0.01~10.00μg/L。结论所建立的分析方法灵敏、快速、准确,可同时检测生活饮用水中11种卤代烃,在实际检测工作中有一定应用价值。

邻苯二甲酸二丁酯降解菌L6关键基因扩增及代谢产物分析

目的通过扩增邻苯二甲酸二丁酯(DBP)降解菌L6 的关键基因并分析代谢产物,了解该菌株的降解机制。方法以DBP 降解菌L6 基因组为模板,PCR 扩增邻苯二甲酸双加氧酶基因和邻苯二甲酸酯脱羧酶基因,PCR 产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测,再进行测序和分析;将DBP 降解菌L6 接种于含DBP 浓度为800 mg/L 的基础培养基中培养120 h,采用超高效液相色谱法(UPLC)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS)检测培养基中的残留物质,确定降解产物。结果通过PCR 扩增成功获得DBP 降解菌L6 的邻苯二甲酸双加氧酶基因和邻苯二甲酸酯脱羧酶基因,经NCBI 比对发现,分别与甲基杆菌属菌株arboreus clone SY117 (Accession No. KM041246.1)的邻苯二甲酸双加氧酶基因和邻苯二甲酸酯脱羧酶基因具有较高的相似性。L6 培养基中尚残留部分DBP,浓度为135 mg/L;0.7 min 时出现一个新的色谱峰,浓度为95.6 mg/L,经GC-MS 确认该物质为邻苯二酚。结论DBP 降解菌L6 的基因组内存在邻苯二甲酸双加氧酶基因和邻苯二甲酸酯脱羧酶基因,与同属菌株arboreus clone SY117 的基因有较高同源性,DBP 降解菌L6 降解DBP 的产物为邻苯二酚。

邻苯二甲酸二丁酯降解菌的筛选及降解条件研究

目的筛选并鉴定一株能以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)为唯一碳源生长的菌株,探索利用该菌株降解DBP的最优条件。方法在基础无机盐培养基中加入DBP,将土壤浸出液接种于该培养基,筛选得到目标菌株。通过菌落表型、透射电镜、PCR等方法对该菌株进行形态、生理生化特征鉴定及16Sr DNA序列分析。将目标菌株接种至p H值不同的上述培养基,于不同温度下进行培养,通过测定DBP残留和细菌含量确定最佳p H值和温度。结果通过只添加DBP作为微生物的碳源,富集培养得到一株菌株L6。通过形态、生理生化及16Sr DNA序列分析,将其鉴定为甲基杆菌属(Methylobacterium sp.)。通过优化得到DBP最佳降解条件为p H=7,温度=30℃。在最佳降解条件下,菌株L6在120 h内对含800 mg/L DBP的降解率达到85.0%。结论菌株L6对DBP有较强的降解能力,最佳降解条件为p H=7、温度=30℃,可考虑应用于DBP污染的生物修复试验。

漩涡辅助液液微萃取-GC-MS法测定水中邻苯二甲酸酯

目的建立同位素作内标、液液微萃取-GC-MS测定水中邻苯二甲酸酯的分析方法。方法考察萃取剂种类、萃取体积、萃取时间、盐浓度对萃取效率的影响,对各种影响条件进行优化,确定最佳萃取条件,在25 ml容量瓶中依次加入2 g Na Cl,20 ml水样,加100μl正己烷萃取剂,2 500 r/min旋涡3 min,静置分层,萃取层供GC-MS分析。结果该方法 DINP、DIDP的线性范围为0.5 mg/L^5 mg/L,其余为0.1 mg/L^1.0 mg/L,线性相关系数为0.995~0.999,方法检出限为0.02μg/L^0.5μg/L,DMP、DEP、DMEP、DEEP回收率为50%~76%,其余成分的回收率为90%~110%。结论该方法操作简单、快速、成本低、环保高效、富集效率高,能用于水样中邻苯二甲酸酯检测。

公共场所空气甲醛检测方法影响因素分析

目的通过分析检测方法的影响因素,建立快速稳定测定公共场所空气中甲醛的方法。方法酚试剂分光光度法测定公共场所空气中的甲醛含量。结果采样环境温度对酚试剂稳定性有较大影响,改进吸收液后试剂空白干扰明显降低,且平行样品稳定性和精密度较好;显色环境温度直接影响显色反应程度,用40℃恒温水浴加热可缩短显色反应时间。结论改进后的方法有效的解决了温度对吸收液稳定性和显色反应的影响,大大提高了检测方法的精密度和准确度。

同时测定工作场所空气中21种挥发性有机物的方法研究

目的建立一种同时测定工作场所空气中21种挥发性有机物的方法。方法采用活性碳管采集空气样品,二硫化碳溶剂解吸后进样,经DB-FFAP毛细管柱分离,FID检测器检测,保留时间定性,外标法峰面积定量。结果所建立的气相色谱检测方法分离完全,在测定范围内,具有良好的线性关系,相关系数(r)均>0.999,待测物质解吸效率为91.4%~103.6%,相对标准偏差(RSD)为0.4%~2.3%,检出限和最低检出浓度均优于GBZ/T 160的要求。使用该方法对某喷涂车间采样检测,检出主要挥发性有机物有苯(1.67 mg/m^3)、甲苯(2.53 mg/m^3)和乙酸丁酯(1.23 mg/m^3),其他均小于最低检出浓度。结论该方法可同时测定多种挥发性有机物,适用于复杂工作场所中空气毒物的测定。

柱前衍生-顶空气相色谱法快速测定血中氰化物

目的建立简便、快速、灵敏度高的测定血中氰化物含量柱前衍生-顶空气相色谱方法。方法血中加入磷酸后,用次氯酸钠溶液(有效氯5%)将氰化物衍生为氯化氰,顶空进样,采用程序升温方式,经WAX毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm,0.50μm)分离,电子捕获检测器(ECD)测定,以保留时间定性,外标法定量。结果血中氰化物在4 min内完成检测,氰化物在1μg/L^200μg/L内线性良好,线性方程为y=14 925x+51 454,相关系数(r)为0.999 6,方法检出限(LOD)为0.5μg/L。在5.00μg/L、50.0μg/L、150μg/L 3个添加水平下进行了回收率和精密度实验,其中方法回收率为75.6%~106.4%,相对标准偏差(RSD)为4.52%~6.85%(n=9)。结论本方法简单、快速、灵敏度高,能够满足国家标准方法的要求,可准确测定血中氰化物的浓度。

嘉兴市疾病预防控制机构实验室能力建设现状及发展建议

疾病预防控制机构实验室不仅承担着公共卫生和健康危害因素监测的日常检验,在突发公共卫生事件处置中还发挥着一锤定音的作用,其能力建设是疾病预防控制机构建设和发展的重要技术支撑^([1-2])。非典疫情后,各地对照关于印发《省、地、县疾病预防控制中心实验室建设指导意见》的通知(简称《指导意见》),经过十多年建设。

纳米胶体钯-石墨炉原子吸收光谱法快速测定血中铅、镉

目的探讨纳米胶体钯在石墨炉原子吸收光谱法测定血样铅、镉中的应用,建立快速、稳定、灵敏、准确的测定方法。方法血样经稀释后,以纳米胶体钯为基体改进剂,用石墨炉原子吸收光谱法测定铅、镉的浓度。结果本法在铅浓度为0μg/L^40.0μg/L、镉浓度为0μg/L^3.0μg/L的线性相关系数均>0.999,铅的检出限为3.22μg/L,回收率为90.1%~106.2%;镉的检出限为0.28μg/L,回收率为90.6%~103.4%,相对标准偏差均<10%,同时对GBW09139和GBW09140冻干牛血国家标准物质进行测定,结果均在标准值范围内。结论该法简便快速、灵敏度高、重现性好,适用于人血液中微量铅、镉的快速批量测定。

N-甲基吡咯烷酮溶解-石墨炉原子吸收光谱法快速测定植物油中镉

目的建立N-甲基吡咯烷酮直接溶解-石墨炉原子吸收法快速测定植物油中镉的方法。方法称取1 g植物油样品,经N-甲基吡咯烷酮溶解并定容至10 ml,涡旋振荡形成微乳液后,以纳米胶体钯为基体改进剂,纯水溶液作标准曲线,用石墨炉原子吸收光谱法测定微乳液中镉的浓度。结果镉在0.025μg/L^2.0μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 4,最低检出限为0.25μg/kg,回收率为85.9%~98.2%,相对偏差<5%。应用此方法对大豆油、花生油、菜籽油、调和油进行加标回收和精密度实验,回收率均>85.0%,相对偏差均<5%,与其他前处理方法比较,结果偏差<5%。结论该方法简便快速、灵敏度高、重现性好,适用于各类型植物油中微量镉的快速批量测定。

2018年秦山核电站周边饮用水中总α和总β放射性水平的监测与分析

目的了解秦山核电站周边的饮用水中总α、总β放射性本底水平。方法根据国家卫生健康委员会方案,2018年在海盐县内距秦山核电站周围30 km范围内的11个监测点,在上半年和下半年分别采集水源水、出厂水和管网末梢水各1次,依据GB/T 5750.13-2006《生活饮用水标准检验方法放射性指标》进行采样、检测分析。检测的饮用水中总α、总β放射性水平按GB 5749-2006《生活饮用水卫生标准》进行评价,并比较2018年与2016—2017年末梢水中总α、总β放射性水平。结果11个采样点分别在2018年4月和9月共采得水样22份,测得饮用水蒸干后的残渣率与不同类型水体有关,水源水残渣率稍高,达0.033 7%。不同类型水体中总α放射性水平范围为0.008~0.040 Bq/L,平均值为(0.015±0.009)Bq/L,总β放射性水平范围为0.014~0.320 Bq/L,平均值为(0.188±0.068)Bq/L。水源水和出厂水总α放射性水平比较,差异具有统计学意义(Z=-2.286,P<0.05);残渣量与总α、总β放射性水平无线性关系,差异均无统计学意义(P>0.05)。2018年末梢水与2016—2017年比较,总α、总β放射性水平比较差异有统计学意义(Z=-2.976、-2.031,P<0.05),2017年末梢水与2016年比较,总α、总β放射性水平比较差异有统计学意义(Z=-2.042、-3.214,P<0.05),2018年末梢水与2017年比较,总α、总β放射性水平比较差异有统计学意义(Z=-20.112、-2.511,P<0.05),但均符合标准要求。结论核电站运行未对其周围饮用水的放射性水平产生影响,秦山核电站周围饮用水是安全的。