基于创新探索思维的生物制药综合实验课程改革

基于创新探索思维,在生物制药综合实验课程的改革中,教学团队尝试增加探究性、设计性、创新性实验项目,融入思政元素,完善混合式教学方法,健全多元化课程评价机制,形成与生命科学和药学事业发展相适应的核心实验教学体系,助力一流生物制药专业人才的培养。

南瓜多糖的提取纯化及其复方口服液的降血糖作用研究

目的 :提取和纯化南瓜、葛根及黄芪中的降糖有效成份 ,并考察由南瓜多糖、葛根黄酮及黄芪皂苷组成的复方口服液的降糖作用。方法 :采用水提、醇提及柱层析法 ,分别提取和纯化南瓜、葛根及黄芪中的降糖有效成份 ,并将其配制成 3种不同配比的复方口服液 ;建立四氧嘧啶高血糖小鼠模型 ,比较 3种复方口服液的降糖作用。结果 :提取获得南瓜多糖、葛根黄酮和黄芪皂苷 ,由其配制的 3种复方口服液均能降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值 ,并初筛出最佳的复方口服液。结论 :本文中南瓜多糖、葛根黄酮及黄芪皂苷的提取和纯化方法简便 ,得到的南瓜多糖和葛根总黄酮纯度高 ,其复方口服液具有明显的降血糖作用。

用活性碳分离纯化苯丙氨酸的研究

从用固定化细胞生产L-苯丙氨酸的反应液中，应用颗粒活性碳分离纯化L-苯丙氨酸。结果表明，该方法不受大量的无机盐干扰，纯化的L-苯丙氨酸，回收率为70％左右，产品纯度大于99．5％。

用固定化细胞生产D-氨基酸的研究

目的优化CPU 0 4 30 1菌株的发酵条件 ,提高酶活力 ,并建立D 氨基酰化酶酶活力的测定方法。方法对CPU 0 4 30 1菌株培养的碳源、氮源进行优化 ,同时观察温度、pH值、离子含量等对D 氨基酰化酶酶活力测定的影响。结果CPU 0 4 30 1经固定化后于 37℃反应 2 0h得产品 4 .78g ,纯度达 99.5 7%。结论CPU 0 4 30 1菌株经优化后 ,D 氨基酰化酶的产量和活力均明显提高 ,同时建立了准确、灵敏的酶活力测定方法。

蕲蛇抗栓酶注射液稳定性的研究

为获取对蕲蛇抗栓酶 (acutobin)注射液的酶活有保护作用且使制剂稳定的保护剂配方 ,本实验设计了 7个单方及四组正交实验共 16个保护剂处方 ,以加入保护剂的蕲蛇抗栓酶为样品 ,未加保护剂的为空白对照 ,在 37℃温度加速实验下 ,间隔一定时间观测蕲蛇抗栓酶制剂的酶活及澄明度的变化。结果 ,单方氨基酸和小肽类的加入使酶活力保存率提高 ,而多元醇类的加入使澄明度得到改善 ;

用紫外诱变和离子束注入筛选辅酶Q_(10)高产菌

实验以辅酶Q10产生菌CPU-0402为出发菌株,经紫外照射和离子束注入诱变,用含辅酶Q10结构类似物和呼吸链抑制剂的抗性平板定向筛选辅酶Q10高产菌,结果辅酶Q10产量从1819μg/g干菌重提高到2875μg/g干菌重,比原始菌株提高了58%。

L－天冬氨酸β－脱羧酶高活力菌株的培养

为了获得较高的Ｌ－天冬氨酸β－脱羧酶活力，选用ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｄａｃｕｎｈａｅＣＰＵ９００１菌株进行培养，在含有１．５％Ｌ－谷氨酸盐，０．５％富马酸铵，１％富马酸钠，３．０％玉米浆，２％蛋白陈，０．０５％ＫＨ２ＰＯ４和０．０１％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ，ｐＨ７．０～７．５的培养液中３０℃发酵２８ｈ，Ｌ－谷氨酸盐有益于Ｌ－天冬氨酸β－脱羧醇的增加。

氧化显色法测定L－天冬氨酸－β－脱羧酶活力

本文建立了简便准确的比色法用以测定Ｌ－天冬氨酸－β－脱羧酶的活力。即Ｌ－丙氨酸经氧化生成的乙醛能与ρ－羟基联苯形成稳定的紫色化合物，在５７６．８ｎｍ处有最大吸收，以此定量生成的微量Ｌ－丙氨酸．

石斛内生菌的筛选和培养优化

目的:筛选石斛假鳞茎中产生物碱的内生菌并通过培养优化提高次生代谢产物的含量。方法:从新鲜石斛中分离生物碱产生菌,并对其发酵条件进行研究。结果:筛选到一株产生物碱的内生细菌,属于蜡状芽胞杆菌。初步确定了最适的发酵培养基组成为:去皮土豆20%,葡萄糖2%,蛋白胨0.25%,硫酸铵0.25%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.05%,氯化锰0.01%,pH值6.5;最适的发酵条件为:接种量6%～8%,温度28～30℃,培养时间48h。结论:通过初步优化,单位体积发酵液的生物碱含量较原始条件大幅提高。

产辅酶Q_(10)细菌CPU0402的初步研究

为了实现用微生物发酵法生产辅酶Q10,筛选出一株辅酶Q10高产菌株,并对其从C源、N源、最适温度、最适pH值、通氧量、添加前体等方面进行了优化。筛选出的菌株用不同的碳源、氮源在37℃培养24h,检测其CoQ10含量;以富马酸为碳源、玉米浆为氮源、35℃、pH7.2发酵24h辅酶Q10含量达87mg/L;通氧量对该菌生长及辅酶Q10合成有促进作用;添加前体对羟基苯甲酸、异戊二烯、β胡萝卜素均可有效提高辅酶Q10产量,其中异戊二烯可提高产率178.4%。该菌辅酶Q10产量较高,经TLCUV法定量,HPLC法进行纯度检测,红外、质谱分析进行成品鉴定,其纯度达99.5%。

丹参酮IIA滴丸制备工艺的研究

研究新药丹参酮ⅡA滴丸的制备工艺,确立最佳工艺条件.设计正交实验考察滴丸制备工艺中各影响因素.以聚乙二醇4 000为基质,二甲基硅油为冷凝液,滴制工艺为:滴制温度80℃,冷凝液5～25 ℃梯度冷却,滴距4 cm,滴速60滴/min.该工艺制得的滴丸成型性好,丸种差异小,崩解时限为17 min,符合药典规定.该工艺适合丹参酮ⅡA滴丸的制备,且适宜工业化生产.

细菌CPU0402发酵生产辅酶Q_(10)的初步研究

目的:优化发酵条件提高细菌CPU0402发酵生产辅酶Q10的产量。方法:在实验室5．5 L发酵罐中考察影响辅酶Q10发酵的主要因素,采用分阶段控氧模式并通过补料流加的方式延长发酵过程中的产物合成期从而获得辅酶Q10的高产率。结果:在优化条件后的补料分批发酵中辅酶Q10的产量达到了14．5 mg·L-1,生产率达到0．392 mg·L-1·h-1,分别比分批发酵的最佳值提高了65．5％和7．4％。结论:应用分阶段控氧模式和补料流加的方法可显著提高细菌CPU0402发酵生产辅酶Q10的产量。

人血白细胞介素-2制备方法的研究

报道了一种利用人外周血灰黄层细胞大批量制备人血白细胞介素-2的方法。通过比较不同培养时间、细胞浓度、刺激物浓度的影响,发现经预培养和凝集素与病毒的联合刺激能提高白细胞介素-2的产量,且适用于批量生产。

蒙药“扎冲十三味丸”中挥发油提取包合工艺的研究

目的：对扎冲十三味药物中的挥发油成分进行共提取，同时对挥发油的包合工艺进行筛选，确立最佳工艺条件。方法：设计正交试验考察工艺中的各影响因素，同时对挥发油进行相关的质量标准的初步研究。结果：得出最佳的提取条件为：加水10倍体积，浸泡1h，粉碎2～3目，提取6h；最佳包合条件为：投料比8：1，加水量8：1，包合温度40℃，进行饱和水溶液法包合挥发油。结论：通过工艺优化，挥发油成分可以进行有效提取和包合。

微生物发酵透明质酸的制备及测定

为提高透明质酸成品质量和收率,针对透明质酸发酵液中菌体和蛋白质的物化性质,用乙醇对发酵液进行沉淀得透明质酸粗品,粗品溶解后用硅藻土、活性炭吸附,再经滤板过滤,然后加入含氯代十六烷基吡啶的氯化钠溶液沉淀,溶解,乙醇沉淀等步骤后溶液经滤膜过滤,醇沉,干燥。所得透明质酸为白色粉末,其回收率约为79%,蛋白质含量低于0.1%,相对分子质量达180万,活性炭除内毒素后,内毒素限值符合欧洲药典标准(<0.5Eu/mg)。

基于双纳米金标记的侧流免疫层析法检测人骨钙素蛋白

传统的基于纳米金的侧流免疫层析法灵敏度不高。为了克服这个缺点并且不增加额外的步骤,该研究通过双纳米金标记技术结合生物素-链霉亲和素蛋白放大系统,并利用金标定量阅读仪达到快速定量检测骨代谢标志物(以骨钙素为例)的目的。该试纸条的第一结合垫包被链霉亲和素-纳米金探针,第二结合垫包被抗骨钙素单抗Ab14318-纳米金-生物素化单链核苷酸探针,硝酸纤维素膜上的检测线包被抗骨钙素单抗Ab14319,质控线上包被羊抗鼠Ig G。通过对该侧流免疫层析试纸条与电化学免疫测定法(ECLIA)的相关性研究发现,两种方法有强相关性。该研究表明该试纸条拥有良好灵敏度、准确度和可靠性。与电化学免疫测定法相比,该方法更加简单、快速,并且不需要复杂的仪器设备,非常适合在检测现场或基层社区医院使用,应用前景非常广泛。

金钗石斛内生菌CPU0029的诱变及其次级代谢产物的纯化

以实验室筛选得到的产生物碱的金钗石斛内生菌CPU0029为出发菌株,为了提高生物碱产量对其进行紫外及亚硝酸钠复合诱变,筛选出1株正突变菌株;运用正交实验的方法对发酵液中生物碱成分进行提取优化,最后采用薄层、气相方法进行检测。结果:通过复合诱变筛选出的正突变株,生物碱产量达到6.9mg/L,比出发菌株高出63%,且其遗传性状较稳定;通过提取纯化,该生物碱纯度提高了70.6倍。

双纳米金标记的侧流免疫层析法检测人血液中骨转换标志物

骨质疏松症是中老年人的常见病、多发病,严重地危害老年人的健康。相比于骨密度检测而言,骨转换标志物监测可更早地评估骨质疏松疗效,还可早期发现对于治疗无应答的患者。骨钙素是一种灵敏度较高的骨转换标志物,其含量可以反映成骨细胞活性,同时也反映了骨吸收和骨重构的情况。因此文章构建了一种用生物素-链霉亲和素系统连接的双纳米金侧流免疫层析试纸条定量检测骨钙素的方法。骨钙素的检测限是0.1ng/mL,线性范围为0.1~200ng/mL,批内和批间的平均回收率分别为96.4%~108.4%和99.3%~107.5%,相应的变异系数分别为5.3%~8.6%和4.9%~7.7%。

骨钙素快速检测试纸的工艺优化及质量控制研究

骨钙素是一种重要的骨转换标志物,它在血清中的含量可以反应近期骨转换的效率以及成骨细胞活性,对骨质疏松症的诊断及评估疗效有重要意义。本研究构建了一种双纳米金侧流免疫层析试纸条用于定量检测骨钙素,优化了试纸条的制备工艺,并对其性能指标进行了测定,最低检测限为0.5 ng/m L,批内、批间变异系数分别为4.99%~7.12%和4.44%~10.56%,回收率为95.26%~105.9%,37℃加速老化试验结果显示试纸条两个月内稳定性良好,预测常温保质期为半年。此外,对骨钙素检测试纸条进行了质量控制研究,分别对原材料、半成品和成品建立了质控方法和标准,可供其他诊断试剂参考。