SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测

目的 预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构。方法 以SARS病毒基因组序列为基础 ,采用Gar nier Robson方法、Chou Fasman方法和Karplus Schultz方法预测E蛋白质的二级结构 ;用Kyte Doolittle方案预测蛋白质的亲水性 ;用Emini方案预测蛋白质的表面可能性 ;用Jameson Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数。综合评判 ,预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位。结果 在SARS病毒E蛋白N 端的第 1～ 6、13～ 19、39～ 4 3、4 7～ 6 4区段和第 73～ 76区段有 β 折叠中心 ;第 6～ 12区段和第 6 7～ 6 9区段可能形成转角或无规则卷曲 ,是柔性区域。E蛋白N端第 2～ 13区段和第 6 1～ 74区段为B细胞优势表位区域。结论 用多参数预测SARS病毒E蛋白的二级结构和B细胞表位 。

SARS病毒S蛋白的B细胞表位预测

目的 预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。方法 基于SARS蛋白基因组序列 ,采用Kyte Doolittle的亲水性方案 ,Emini方案和Jameson Wolf抗原指数方案 ,辅以对S蛋白的二级结构中的柔性区域的分析 ,预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。结果 推测最有可能的B细胞表位位于S蛋白N端第 91～ 98区段、第 112 1～ 115 3区段和第 185～ 193区段内或它们的附近。其它 ,如S蛋白N端第 10 5 0～ 10 5 9、75 2～ 765、41～ 5 0、666～ 674、2 64～ 2 87、3 40～ 3 48、40 8～ 416区段和第 42 4～ 43 9区段内或附近也可能存在B细胞表位。结论 用多参数预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位 。

应用PCR-反向点杂交法检测β-地中海贫血基因点突变

目的对疑似β-地中海贫血的4例患者进行基因诊断。方法针对β-珠蛋白基因上17个位点突变,使用特异性带有生物素标记的引物进行PCR扩增,扩增产物与固定在膜条上的寡核苷酸探针进行杂交,并通过一系列显色反应,明确检测样品在17个位点是否发生了突变,以及是否为突变纯合子或杂合子。结果 1号和2号患者均为CD17M(A→T)/N,βEM(GAG→AAG)/N双重杂合子;D3号患者为IVS-Ⅱ-654M(C→T)/N杂合子;D4号患者为IVS-Ⅱ-654M/IVS-Ⅱ-654M(C→T)纯合子。结论利用PCR-反向点杂交法技术,能对β-地中海贫血患者进行基因诊断,对其产前诊断、临床治疗以及携带者检出具有重要意义。

SARS病毒M蛋白的二级结构和B细胞表位预测

以SARS病毒基因组序列为基础 ,采用Garnier Robson方法、Chou Fasman方法和Karplus Schulz方法预测蛋白质的二级结构 ;按Kyte Doolittle方案、Emini方案和Jameson Wolf方案预测SARS病毒M蛋白的B细胞表位。预测结果表明 ,在SARS病毒M蛋白N 端第 1 1～ 2 0、2 7～ 36区段和第 1 33～ 1 41区段可能是α 螺旋中心 ;M蛋白分子N 端第 2 0～ 2 7、34～ 37,44～ 5 6,61～ 64,70～ 76,79～ 97,1 1 7～ 1 32 ,1 42～ 1 47,1 65～ 1 76区段和第 2 1 6～ 2 2 1区段可能是β 折叠中心。在M蛋白N 端第 5～ 6、40～ 44、1 0 5～ 1 0 7、1 1 2～ 1 1 6、1 89～ 1 90、2 0 2～ 2 0 3区段和第 2 1 0～ 2 1 5区段具有较柔软的结构 ,有可能进行一定幅度的摆动或折叠而形成较复杂的三级结构。SARS病毒M蛋白N 端第 1～ 1 5、37～ 47、99～ 1 2 0、1 81～ 1 92区段和第 1 96～ 2 1 5区段内或附近很可能是B细胞表位优势区域。以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段 ,用抗原指数 ,亲水性参数和可及性参数预测SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位 。

实验动物产业化中若干策略的探讨

实验动物已成为生物技术和新医药产业的不可缺少的基础产业。实验动物事业产业化是必然趋势。本文就实验动物产业化中的若干问题和策略进行了探讨。

系统性红斑狼疮小鼠骨髓间充质干细胞的成骨、成脂分化能力下降

背景:系统性红斑狼疮患者的骨髓间充质干细胞与正常人相比是否有不同,相关报道较少。目的:对比系统性红斑狼疮模型小鼠与正常小鼠的骨髓间充质干细胞多向分化能力的差别。方法:分离培养系统性红斑狼疮模型小鼠与C57BL小鼠的骨髓间充质干细胞(对照组),分别进行成骨、成脂诱导分化,观察两种小鼠的骨髓间充质干细胞的分化能力。结果与结论:C57BL小鼠的骨髓间充质干细胞经传代后,为长梭形,呈均匀分布生长;系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞表现为生长缓慢,细胞相对C57BL小鼠要少一些。经过成骨诱导显示系统性红斑狼疮模型小鼠的钙结节和钙盐明显少于对照组,PCR检测成骨基因Runx2,碱性磷酸酶,骨钙素表达也明显下降。经过成脂诱导显示系统性红斑狼疮模型小鼠的脂滴明显少于对照组,PCR检测成脂基因PPARγ2,脂蛋白酯酶表达也明显下降。说明系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞成骨与成脂能力都低于C57BL小鼠,系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞的多向分化能力受损。

188例宫颈病变患者HPV分型检测的结果分析

目的利用人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)分型检测宫颈病变,提高诊断率。方法对188例宫颈病变患者采集宫颈脱落细胞,利用PCR-反向点杂交法进行HPV分型检测。结果 188例标本中,52例阳性,HPV感染率27.66%;感染居前5位的高危亚型依次为16、18、66、33和58型,低危亚型由高到低依次为6、11、43、42型;多重感染以双重感染为主(17/19),16型和6型参与频率较高。结论 HPV型别分布具有地区差异性,采用PCR-反向点杂交法有利于研究本地妇女的HPV易感型别,HPV检测对于早期筛查和治疗宫颈癌具有积极意义。

1556例孕妇妊娠高血压综合征的预测及干预效果观察

目的探讨妊娠高血压综合征的预测及预防效果。方法应用SD-Ⅱ型妊娠高血压预测分析系统,对我院门诊定期产检的1556例孕妇进行妊娠高血压预防性监测,筛选出妊娠高血压疑似患者523例。随机分为干预组和观察组。其中,干预组为264例,给予药物治疗和特殊护理干预;观察组为259例,只定期产前检查,做一般护理干预。结果干预组中发展为妊娠高血压12例,发生率为4.55%;观察组中发展为妊娠高血压26例,发生率为10.16%,干预组妊娠高血压的发病率明显低于对照组(P<0.05)。结论通过应用SD-Ⅱ型妊娠高血压监测系统预测妊娠高血压,并对高危人群进行干预,能有效降低妊娠期高血压疾病的发病率。

长柔毛野豌豆编码甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析

甘油 - 3-磷酸酰基转移酶 (GPAT)基因与植物抗冷性密切相关。克隆到的长柔毛野豌豆 (Viciavillosa)GPAT基因的编码区完整的cDNA片段长 1377bp ,编码 4 5 8个氨基酸残基 ,与蚕豆 (Viciafaba)和豌豆 (Pissumsativum)比较 ,其核苷酸序列的同源性分别为 94 1%和93 3% ,氨基酸序列的同源性分别为 96 9%和 98 0 %。

FLK1_(265-2493)与C3d3融合基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建FLK1265-2 493与C3d3融合基因真核表达质粒,并在体外进行表达和鉴定。方法采用PCR技术扩增FLK1265-2 493片段,将该片段插入到pMDT-18载体中后,亚克隆至真核表达载体pSG.SS.C3d3.YL,构建FLK1265-2 493与C3d3融合基因表达质粒。经限制性酶切鉴定和DNA序列测定结果证实后,将重组质粒pSG.SS.FLK1265-2 493.C3d3.YL转染Hela细胞,检测其体外表达。结果免疫印迹和免疫细胞化学分析结果分别表明转染细胞上清液和胞浆内均有目的分子的存在。结论构建的DNA疫苗可在真核细胞内正确表达,这为进一步的动物实验打下了基础。

骨髓源性内皮祖细胞与内皮细胞共培养促进其向成熟内皮细胞分化的研究

目的:探讨共培养的内皮细胞对内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化的影响。方法:分离1～2个月龄,SD大鼠股骨髓,个核细胞(MNCs),MNCs,Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染鉴定内皮细胞的特性。应用贴块法培养大鼠腹主动脉的内皮细胞,vWF免疫组化染色进行鉴定。采用Transwell培养板,上、下室分别加入内皮祖细胞和内皮细胞,15%胎牛血清的NO.2 DMEM/F12培养液培养14 d,倒置相差显微镜观察培养内皮祖细胞的形态。RT-PCR检测eNOS、vWF mRNA,流式细胞术检测CD31及KDR的表达。结果:荧光双染显示培养的单个核细胞具有内皮祖细胞特性;共培养的内皮祖细胞呈短梭型、铺路石状,培养至4 w时有复杂的网状结构形成。RT-PCR检测显示,eNOS及vWF mRNA表达均较对照组显著增加(P<0.05)。流式细胞术分析表明,共培养组的内皮祖细胞CD31及KDR的表达,也显著高于对照组(分别为P<0.05及P<0.01)。结论:与内皮细胞共培养可促进内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化。

39对不良孕产史夫妇外周血染色体核型分析

目的探讨染色体核型异常与不良孕产史之间的关系。方法采集39对(78例)不良孕产史夫妇外周血,用常规方法制备染色体,经G显带后进行染色体核型分析。结果 39对不良孕产史夫妇中,共检查出染色体异常核型者9例,占总受检者的11.54%,其中常染色体异常者6例(包括4例染色体多态性),占总受检者的7.69%;性染色体异常者3例,占总受检者的3.85%。结论染色体核型异常是引起不良孕产史的重要原因之一,对于不明原因的不良孕产史患者,有必要进行外周血染色体检查和遗传咨询。

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导产生抗肿瘤免疫应答

目的 研究非洲爪蟾转化生长因子 β5 (aTGF β5 )基因免疫对肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的效能的影响 ,探讨所诱导免疫应答的抗肿瘤机制。方法 用aTGF β5真核表达质粒和小鼠酪氨酸酶相关蛋白 2 (mTRP 2 )真核表达质粒联合免疫野生型C5 7BL/6小鼠、CD4缺陷的C5 7BL/6小鼠和CD8缺陷的C5 7BL/6小鼠 ,于免疫前或免疫后接种黑色素瘤细胞B16F10 ,观测肿瘤生长和小鼠存活情况。结果 两种质粒联合免疫能在野生型C5 7BL/6小鼠体内诱导产生保护性和治疗性抗肿瘤免疫 ,而mTRP 2真核表达质粒单独免疫野生型C5 7BL/6小鼠及两种质粒联合免疫CD4或CD8缺陷的C5 7BL/6小鼠均不能诱导产生抗肿瘤免疫应答。结论 aTGF β5基因免疫能增强编码mTRP 2的肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的能力 ;T细胞免疫应答的诱导是抗小鼠黑色素瘤免疫应答所必需的。

肿瘤血管内皮抗原TEM8的HLA-2.1限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析

目的 初步筛选肿瘤血管内皮标志物8(tumorendothelialmarker 8,TEM 8)HLA A2 1限制性低亲和性CTL表位,并预测修饰后的表位与HLA A2 1之间亲和性的变化。方法 采用超基序、3D QSAR、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA A2 1限制性低亲和性CTL表位,并通过氨基酸置换适当修饰,最后对部分候选的多肽进行分子动力学模拟。结果 筛选出8个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA A2 1之间的亲和性均有不同程度的提高。结论 初步预测和修饰的表位系列可为下一步实验提供了依据。

干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后化学发光成像

目的研究用化学发光成像的方法观察脐带间充质干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后的情况,代替活体成像仪的可行性。方法用CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒转染树鼩脐带间充质干细胞,用最适浓度的嘌呤霉素筛选,存活的细胞用6孔板的3个孔培养,贴壁后,3个孔依次加入底物D-荧光素钾盐,用化学发光成像仪拍照,再用软件进行活体成像转换。将转染成功的细胞注入麻醉后的树鼩皮下,树鼩静脉注射底物。结果细胞加入底物后有生物发光,发光强度随底物作用时间延长而减弱。树鼩皮下也观察到发光细胞。结论 CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒能成功转染树鼩脐带间充质干细胞,转染成功的细胞用于动物模型治疗后,可进行活体成像,观察细胞在动物体内的分布。

使用白树脂优化透射电镜的制样程序

透射电镜（transmission electron microscope,TEM）是一种对亚细胞结构观察的重要方法,在医疗、科研中具有不可替代的作用,特别是近年随着对干细胞增殖分化及成体细胞的逆向分化研究的不断深入,对亚细胞结构的变化更加关注,对电镜的依赖也越来越大。

染色体异常rob(13;14)导致习惯性流产1例

病例男,20岁,布依族。表型正常。婚后其妻怀孕2次,均在40d左右出现腹痛伴随阴道流血,查B超无胎心,随后自行流产。夫妻均无明显接触有毒、有害物质和辐射史。细胞遗传学检查：患者夫妇取外周血常规制备染色体,

巨细胞病毒pp65抗原检测的新方法

目的传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光,操作麻烦,步骤较多,整个实验需要6个多小时,而且只能定性。需要寻找一种简便的可以定量的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。因此我们设计了流式的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。方法我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行了流式标记移植病人外周血中的WBC,操作步骤明显简便了,只需不到2 h就可完成检测,而且可以定量检测CMVpp65抗原阳性细胞。同时我们用荧光定量PCR检测病人尿中的CMV基因的拷贝数。结果流式检测阳性率高的标本,用间接免疫荧光方法检测也为阳性,同时流式检测强阳性的病人尿用荧光定量PCR检测到CMV基因,表明病人处于CMV病毒血症。结论我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行流式标记,成功检测了移植病人的CMVpp65抗原阳性细胞的百分比,新方法可以定量,与荧光定量PCR方法检测病人尿中的CMV基因的结果符合率较高,可以推广应用。

脐带间充质干细胞注射液治疗战创伤的疗效与机制研究

脐带间充质干细胞(UCMSC)具有强大的抗炎能力,同时可通过定向迁移、定植分化和分泌细胞因子、外分泌体等多成份、多途径发挥协同作用和整体效应,能有效促进各种局部和全身性的组织损伤修复,提高组织细胞的自噬和自我修复能力,促进血管再生、组织细胞生长,减少细胞死亡,提升机体抗氧化应激能力等,这些作用和机制符合战创伤救治原则和要求,特别是对放射伤的基因和蛋白分子修复,对挽救高新技术武器伤伤员的生命和提高救治成功率有一定帮助[1]。