肿瘤坏死因子-α通过诱导上皮间质转化促进乳头状甲状腺癌细胞的侵袭转移

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对乳头状甲状腺癌(PTC)细胞株TPC-1侵袭转移的影响,并探讨上皮间质转化(EMT)在其中的作用。方法采用划痕愈合实验和transwell侵袭实验检测TNF-α对TPC-1侵袭转移能力的影响;实时定量PCR和免疫印记检测EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的m RNA及蛋白水平变化。采用免疫荧光检测上述标志物的定位表达。结果划痕愈合实验和transwell侵袭实验结果显示,在TNF-α诱导下,TPC-1的侵袭转移能力明显增强(P <0.05);实时定量PCR结果显示,EMT的上皮标志物E-cadherin mRNA表达水平明显下降,间质标志物N-cadherin mRNA表达上调,而Vimentin mRNA上调不明显。免疫印记结果表明,E-cadherin蛋白表达水平下降,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平上升(P <0.05)。免疫荧光结果显示,E-cadherin和Vimenin定位于细胞质,N-cadherin定位于细胞膜,且在TNF-α作用下,E-cadherin表达水平明显下降,N-cadherin和Vimenin表达水平上调。结论 TNF-α可以通过诱导EMT促进TPC-1侵袭转移,提示TNF-α在人PTC的侵袭转移中发挥重要作用。

Twist1在乳头状甲状腺癌中的表达及意义

目的:检测Twist1在乳头状甲状腺癌组织及细胞中的表达情况,并探讨其与乳头状甲状腺癌的临床病理因素和生物学行为的关系。方法:研究应用免疫组织化学方法检测120例乳头状甲状腺癌组织中Twist1的表达。体外细胞研究构建靶向Twist1的shRNA真核表达质粒,转染乳头状甲状腺癌细胞,采用MTT法检测细胞转染前后增殖能力变化,通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估甲状腺癌细胞株体外侵袭能力的变化;同时检测细胞间连接及黏附相关蛋白E-cadherin、Vimentin等的表达情况。结果:免疫组化结果显示,Twist1在乳头状甲状腺癌中的表达水平与肿瘤的淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与其他临床病理因素(如临床分期、分化程度等)没有明显相关性。RNA干扰使乳头状甲状腺癌细胞株IHH-4中Twist1的表达下调;与阴性对照组比较,Twist1蛋白表达分别降低了50%(KD-A)、60%(KD-B)和64%(KD-C)。且E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调。结论:Twist1在人乳头状甲状腺癌中表达上调,与肿瘤的淋巴结转移相关。针对Twist1的shRNA真核表达载体能明显抑制乳头状甲状腺癌细胞的Twist1表达,并有效抑制乳头状甲状腺癌细胞的体外侵袭能力。Twist1可能通过调控乳头状甲状腺癌的上皮-间质转化过程来影响其局部浸润及淋巴结转移。

RNAi沉默NFκBp65基因对肝癌细胞FAT10表达的影响

目的观察HepG2细胞中NFκB p65基因沉默对FAT10蛋白表达的影响。方法采用电穿孔法将p65 siRNA转染人肝癌细胞系HepG2细胞,采用Western blot检测各组细胞中p65和FAT10蛋白的表达变化,用染色体核型分析p65干扰对FAT10过表达而导致的非整倍体现象的阻断作用。结果 Western blot结果显示,p65 siRNA干扰可以有效抑制HepG2细胞中NFκB p65的表达,并且通过抑制p65可以有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达,进而通过有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达而阻断TNF-α诱导的非整倍体现象。结论 NFκB p65的表达下调可以抑制TNF-α诱导的FAT10高表达及非整倍体现象。

TNF-α对AKT-TWIST1信号通路诱导乳头状甲状腺癌细胞株上皮间质转化的影响

目的观察TNF-α是否可诱导乳头状甲状腺癌细胞株BCPAP的上皮间质转化,并探讨AKT-TWIST1信号通路在其中的作用。方法采用Western检测TNF-α刺激后BCPAP细胞中EMT标志物E-cadherin,N-cadherin,Vimentin以及AKT,TWIST1的蛋白水平变化。采用RT-PCR检测TWIST1的mRNA水平变化。采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测AKT抑制后TNF-α对BCPAP侵袭转移能力的影响。结果 TNF-α作用下BCPAP的E-cadherin的蛋白表达下降,而N-cadherin和Vimentin的蛋白水平上升(P<0.05),同样的,TWIST1的mRNA水平上升(P<0.05),AKT及TWIST1的蛋白水平上升(P<0.05);应用AKT抑制剂后TWIST1的mRNA及蛋白表达降低,且BCPAP细胞的侵袭转移能力下降。结论 TNF-α可能通过ATK-TWIST1信号通路诱导EMT,进而促进人乳头状甲状腺癌细胞株BCPAP的侵袭转移。

IFN-γ通过诱导上皮间质转化增强人乳头状甲状腺癌细胞株的侵袭转移能力

目的:观察IFN-γ对人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1侵袭和转移能力的影响,并探讨上皮间质转化过程(EMT)在其中的作用。方法:采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测IFN-γ对TPC-1侵袭转移能力的影响;实时定量PCR和Western检测EMT标志物E-cadherin,N-cadherin,Vimentin的m RNA水平及蛋白水平变化;免疫荧光检测上述标志物的定位表达。结果:划痕愈合实验和Transwell侵袭实验结果显示:IFN-γ增强了TPC-1的侵袭转移能力(P <0.05),实时定量PCR结果显示EMT的上皮标志物E-cad-herin的m RNA表达水平明显下降,间质标志物Vimentin的m RNA表达上调,而N-cadherin的m RNA未见明显变化。Western结果显示E-cadherin在IFN-γ作用下表达下调; N-cadherin与Vimenin表达上升;免疫荧光结果与Western结果一致。结论:INF-γ可以通过诱导EMT,促进TPC-1侵袭转移,提示炎性介质IFN-γ可能参与人乳头状甲状腺癌的侵袭转移。

水飞蓟宾抑制人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖及诱导凋亡作用的实验研究

目的:研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1增殖的抑制作用。方法:采用CCK-8法观察不同浓度水飞蓟宾对TPC-1细胞株增殖的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞周期分布及凋亡相关蛋白的表达变化。结果:CCK-8检测发现,水飞蓟宾呈时间-剂量依赖性地抑制TPC-1细胞株的增殖,诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,并伴有细胞周期调节蛋白CDK2和CDK6的表达水平降低和凋亡相关蛋白的升高。结论:水飞蓟宾具有抑制人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1的增殖和诱导其凋亡的作用。

FAT10过表达对HepG2肝癌细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨FAT10过表达对人肝癌细胞株HepG2生长和凋亡的影响。方法:采用脂质体法将FAT10质粒导入HepG2细胞,建立FAT10过表达的肝癌细胞系。Western blot检测细胞中FAT10表达水平,CCK-8细胞计数试剂盒,Annexin V凋亡试剂盒检测FAT10过表达对HepG2细胞生长和凋亡的影响。人类基因表达谱芯片检测FAT10下游与细胞增殖和凋亡相关基因的差异表达。结果:Western blot结果显示FAT10过表达细胞FAT10蛋白水平明显高于对照组,CCK-8检测显示FAT10过表达细胞增殖速度高于空载体组和对照组,而抗喜树碱诱导凋亡的能力FAT10过表达组较空载体组和对照组强。芯片分析显示,FAT10下游与细胞增殖和凋亡相关的若干基因表达有显著差异。结论:FAT10过表达可以促进HepG2细胞增殖和抗凋亡能力。

硒对自身免疫性甲状腺病患者TPOAb水平的影响

目的观察硒对自身免疫性甲状腺病(AITD)患者甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平的影响。方法选取TPOAb水平在300~13000 U/ml的AITD患者114例,根据患者是否接受硒治疗分为硒治疗组(64例)与对照组(50例)。对照组患者仅予常规治疗,硒治疗组患者在对照组基础上给予硒酵母治疗。比较两组患者治疗前及治疗后的[血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)]水平。结果两组患者治疗前后的FT3、FT4、TSH水平组间及组内比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗前,硒治疗组患者的TPOAb水平(2954.50±226.45)U/ml与对照组的(2933.80±213.54)U/ml比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,硒治疗组和对照组的TPOAb水平分别为(1513.80±219.56)、(2397.20±211.53)U/ml,两组患者的TPOAb水平均低于治疗前,且硒治疗组低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论硒可显著降低AITD患者TPOAb水平。

FAT10过表达促进人乳头状甲状腺癌细胞抗凋亡及集落形成能力的研究

目的探讨FAT10过表达对人乳头状甲状腺癌细胞抗凋亡及集落形成能力的影响。方法采用脂质体法将FAT10质粒导入TPC-1细胞,建立FAT10过表达的人乳头状甲状腺癌细胞,用Western blot检测细胞中的FAT10表达水平,用染色体核型分析FAT10过表达而导致的非整倍体现象,Annexin V凋亡试剂盒检测FAT10过表达对TPC-1抗凋亡能力的影响。通过集落形成实验观察其集落形成能力的变化。结果 Western blot结果显示FAT10过表达组细胞FAT10蛋白水平明显高于对照组,FAT10过表达组出现非整倍体形象,并且抗喜树碱诱导凋亡的能力和集落形成能力显著高于对照组。结论 FAT10过表达可以促进人乳头状甲状腺癌细胞抗凋亡及集落形成能力。

FAT10过表达对肝癌细胞HepG2侵袭及迁移能力的影响

目的探讨FAT10过表达对肝癌细胞HepG2侵袭及迁移的影响。方法采用脂质体转染法建立FAT10基因过表达的HepG2细胞株;采用蛋白质印迹法检测转染重组表达载体pcDNA3-FAT10后,HepG2细胞中FAT10蛋白的表达水平。体外侵袭实验及划痕实验检测FAT10基因过表达对HepG2细胞迁移及侵袭能力的改变,并采用芯片检测FAT10下游与细胞侵袭转移相关基因的差异表达。结果蛋白质印迹法检测结果显示,转染重组表达载体pcDNA3.1-FAT10的HepG2细胞中FAT10蛋白均过表达;FAT10过表达能明显提高HepG2细胞的侵袭及迁移能力。结论 FAT10基因在HepG2细胞中过表达能提高肝癌的侵袭及迁移能力,并促进肝癌的发生及发展。

甲状腺过氧化物酶抗体与维生素D

维生素D(vitamin D),不但是调节体内钙磷代谢的重要激素,而且还是各组织细胞中重要的旁分泌/自分泌因子,广泛参与细胞代谢与细胞功能的调节。其活性形式是1α,25-(OH)2D3,随着研究的深入,目前认为它是调节细胞生长、发育、增殖、中枢神经系统功能和免疫功能的最主要的旁分泌激素之一[1]。