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一种新型凋亡素融合蛋白的克隆表达及活性测定
被引量:
3
1
作者
赵健
肖伟
+4 位作者
范立强
王富军
吕稼锋
袁勤生
刘建文
《食品与药品》
CAS
2009年第4期7-11,共5页
目的克隆表达EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性。方法PCR扩增出apoptin序列,与表达载体EC-SOD3-pET-28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物进行Ni2+-NTA纯化和MTT活性检测。结果表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin...
目的克隆表达EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性。方法PCR扩增出apoptin序列,与表达载体EC-SOD3-pET-28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物进行Ni2+-NTA纯化和MTT活性检测。结果表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin经酶切鉴定和序列分析,证明质粒构建正确,转化E.coliBL21(DE3)后,重组蛋白获得表达,Ni2+-NTA纯化后的凋亡素融合蛋白纯度达到85%以上,经噻唑蓝(MTT)法测定具有活性。结论成功构建了表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin,并在大肠杆菌中表达了EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,纯化的蛋白质具有诱导HeLa细胞凋亡的能力。
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关键词
EC—SOD3-凋亡蛋白
克隆表达
纯化
噻唑蓝法
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职称材料
EGFP-Arg7融合蛋白表达及在HeLa细胞中的转导活性
2
作者
肖伟
华迪
+3 位作者
汪雅雯
单含文
吕稼锋
赵健
《食品与药品》
CAS
2010年第5期158-161,共4页
目的构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子,观察表达的融合蛋白EGFP-Arg7在细胞内的转导活性。方法构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列,与pET-28a连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并经Ni2+-NTA纯化。纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光...
目的构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子,观察表达的融合蛋白EGFP-Arg7在细胞内的转导活性。方法构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列,与pET-28a连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并经Ni2+-NTA纯化。纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光显微镜观察其转导活性。结果重组pET-28a-EGFP-Arg7经酶切鉴定和序列分析,证明构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达。纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。重组蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa细胞后用荧光显微镜可观察到强绿色荧光。结论 Arg7具有很好的转导活性,能携带与其连接的蛋白质穿过HeLa细胞膜。
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关键词
多聚精氨酸
蛋白转导域
HELA细胞
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职称材料
题名
一种新型凋亡素融合蛋白的克隆表达及活性测定
被引量:
3
1
作者
赵健
肖伟
范立强
王富军
吕稼锋
袁勤生
刘建文
机构
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
浙江日升昌药业有限公司
出处
《食品与药品》
CAS
2009年第4期7-11,共5页
文摘
目的克隆表达EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性。方法PCR扩增出apoptin序列,与表达载体EC-SOD3-pET-28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物进行Ni2+-NTA纯化和MTT活性检测。结果表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin经酶切鉴定和序列分析,证明质粒构建正确,转化E.coliBL21(DE3)后,重组蛋白获得表达,Ni2+-NTA纯化后的凋亡素融合蛋白纯度达到85%以上,经噻唑蓝(MTT)法测定具有活性。结论成功构建了表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin,并在大肠杆菌中表达了EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,纯化的蛋白质具有诱导HeLa细胞凋亡的能力。
关键词
EC—SOD3-凋亡蛋白
克隆表达
纯化
噻唑蓝法
Keywords
apoptin-EC-SOD3 fusion protein
cloning and expression
purification
MTT
分类号
Q591.2 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
EGFP-Arg7融合蛋白表达及在HeLa细胞中的转导活性
2
作者
肖伟
华迪
汪雅雯
单含文
吕稼锋
赵健
机构
生物反应器工程国家重点实验室华东理工大学
浙江日升昌药业有限公司
出处
《食品与药品》
CAS
2010年第5期158-161,共4页
文摘
目的构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子,观察表达的融合蛋白EGFP-Arg7在细胞内的转导活性。方法构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列,与pET-28a连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并经Ni2+-NTA纯化。纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光显微镜观察其转导活性。结果重组pET-28a-EGFP-Arg7经酶切鉴定和序列分析,证明构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达。纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。重组蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa细胞后用荧光显微镜可观察到强绿色荧光。结论 Arg7具有很好的转导活性,能携带与其连接的蛋白质穿过HeLa细胞膜。
关键词
多聚精氨酸
蛋白转导域
HELA细胞
Keywords
polyarginine
protein transduction domain(PTD)
HeLa cell
分类号
R966 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种新型凋亡素融合蛋白的克隆表达及活性测定
赵健
肖伟
范立强
王富军
吕稼锋
袁勤生
刘建文
《食品与药品》
CAS
2009
3
下载PDF
职称材料
2
EGFP-Arg7融合蛋白表达及在HeLa细胞中的转导活性
肖伟
华迪
汪雅雯
单含文
吕稼锋
赵健
《食品与药品》
CAS
2010
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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