日本血吸虫SjIM基因克隆表达及动物免疫保护评估

目的克隆并表达日本血吸虫肌醇单磷酸酶(SjIM)编码基因cDNA,评估该重组抗原抗血吸虫感染的免疫保护效果。方法以日本血吸虫42 d虫体cDNA为模板,经PCR扩增编码SjIM蛋白的开放阅读框(ORF)基因片段。采用荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况。以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,经异丙基βD硫代吡喃半乳糖苷诱导,制备重组SjIM蛋白。Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组SjIM抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果。结果获得了编码SjIM基因ORF的cDNA片段,ORF长度为834 bp,编码278个氨基酸。荧光实时定量PCR显示该基因在35 d虫体中表达量最高。获得了SjIM重组蛋白,其具有良好的免疫原性。免疫组小鼠获得48.76%的减虫率和41.29%的肝脏减卵率。结论获得了日本血吸虫SjIM基因ORF的cDNA序列,并制备了重组SjIM蛋白,该重组抗原在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果。

日本血吸虫抱雌沟蛋白DNA疫苗的研究

为构建含日本血吸虫抱雌沟蛋白(SjGCP)完整ORF的核酸疫苗,评估该核酸疫苗在小鼠体内诱导抗血吸虫感染的免疫保护效果及其保护机制,将编码日本血吸虫大陆株抱雌沟蛋白基因ORF片段克隆到真核表达载体pVAX1中,用重组质粒pVAX1-SjGCP三次肌肉注射BALB/c小鼠,攻击感染血吸虫尾蚴,攻击感染后第42天剖杀小鼠冲虫,计算减虫率及肝和粪便的减卵率,评估其免疫保护效果。用流式细胞术(FCM)检测第3次免疫后小鼠淋巴细胞亚群CD4+、CD8+占总淋巴细胞的百分比及细胞因子IL-4、IFN-γ表达水平,探讨核酸疫苗的免疫机制。结果显示,小鼠经pVAX1-SjGCP质粒免疫后诱导了31.9%的减虫率,以及47.85%、68.04%的肝减卵率和粪便减卵率,与PBS组差异显著;pVAX1-SjGCP免疫组淋巴细胞亚群CD4+、CD8+百分比增加,细胞因子IFN-γ及特异性IgG水平提高,与pVAX1组差异显著。结果表明,血吸虫抱雌沟蛋白基因DNA疫苗能够诱导宿主细胞免疫和体液免疫应答,产生Th1/Th2型混合的细胞免疫反应,具有一定的抗血吸虫感染的免疫保护效果。

微课在高中英语教学中的应用及教学启示

作为一种全新的教学模式,微课为高中英语教学工作的开展提供了很多新的契机.本文以此为基础,围绕微课的定义、教学价值以及实际应用策略等角度进行探索,就今后的高中英语微课教学加以阐述.