基于生物信息学分析探讨circRNA在口腔鳞状细胞癌中的调控作用

目的通过生物信息学方法和qRT-PCR实验筛选并验证口腔鳞状细胞癌(OSCC)中差异表达的环状RNA(circRNA),并构建OSCC中可能的circRNA-miRNA-mRNA调控网络。方法选取GEO数据库中2个OSCC的circRNA高通量数据,使用R软件识别OSCC中的差异circRNA,对筛选出的circRNA取交集后获得候选circRNA。通过qRT-PCR在人口腔黏膜角质细胞系(HOK)和OSCC细胞系中验证候选circRNA的表达水平。使用circInteractome和circBank数据库预测circRNA下游的miRNA,通过miRDB和TargetScan数据库预测miRNA的靶基因。使用DAVID在线数据库对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。通过STRING数据库和Cytoscape软件确定核心基因,采用GEPIA生存分析网站分析其与预后的关系。结果共筛选出3个差异circRNA、7个miRNA和2575个潜在靶mRNA。GO和KEGG富集分析表明,靶基因主要富集在肿瘤相关的通路和生物学过程。基于富集分析、蛋白质相互作用网络图构建和核心基因的生存分析结果,筛选出3个核心基因(EGF、STAT 5 A和LEF 1),从而建立OSCC相关的circRNA-miRNA-核心基因调控网络。结论本研究为circRNA在OSCC中的调控机制提供参考,为OSCC的诊断及靶向治疗拓宽思路。

生物活性皮肤替代物的超微结构观察

目的 :观察所培养的生物活性皮肤替代物的超微结构。方法 :以 5月龄胎儿的背部皮肤作为细胞来源 ,在牛I型胶原凝胶中立体培养成纤维细胞 ,3d后在凝胶表面接种表皮细胞 ,2d后将培养的皮肤替代物移至培养液气液面 ,促进上皮层的成熟和角化。观察HE染色后的人工皮肤组织学结构以及透射电镜下的超微结构。结果 :所培养的生物活性皮肤替代物同时含有表皮层和真皮层。表皮层中含有基底层、棘层、颗粒层和角质层。透射电镜观察结果显示 ,生物活性皮肤表皮层中 ,棘层细胞之间以桥粒连接 ,并具有天然皮肤中的板层体、张力纤维和脂滴等结构。结论 :生物活性皮肤替代物具有与天然皮肤类似的各种超微结构 。

BALB/c胎鼠面突未分化外胚间充质细胞的体外培养

目的：建立ＢＡＬＢ／ｃ近交系胎鼠面突的未分化外胚间充质细胞的体外培养模型。方法：处死妊娠１２ｄ的孕鼠，取胎鼠面突中的外胚间充质细胞，采用组织块原代培养法进行细胞培养，并进行生长曲线的测定和免疫组化的来源鉴定。结果：成功地培养出面突中未分化的外胚间充质细胞。结论：原代培养的外胚间充质细胞生长稳定，来源明确。

血清对神经嵴细胞向神经胶质细胞分化诱导的体外研究

目的 :探讨神经嵴细胞在含血清培养基中向神经细胞的自发分化过程。方法 :取妊娠第8.5天的BALB/c胎鼠的神经嵴细胞 ,分别在无血清和含血清培养基中培养。免疫组化和透射电镜鉴定和观察神经嵴细胞的分化情况。结果 :在无血清的培养基中 ,NSE染色结果阳性 ,透射电镜下未见神经内分泌颗粒 ,神经嵴细胞保持其原有的特性 ;在有血清的培养基中 ,神经嵴细胞自发分化 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经特异性烯醇化酶 (NSE)和S - 10 0染色阳性 ,透射电镜下可见大量的神经内分泌颗粒。结论 :血清可使神经嵴细胞自发的向神经胶质细胞分化。

BALB/C近交系小鼠腭裂模型的建立及形态学观察

目的：研究维甲酸和地塞米松联合用药对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠腭部发育的影响。方法：将ＢＡＬＢ／Ｃ系孕鼠分为给药组和对照组，在妊娠第１２ｄ分别给药，并于妊娠期第１３８，１３２０，１４８，１４２０，１５８，１５２０，１６８ｄ处死孕鼠，取胎鼠头部做冠状切片，ＨＥ染色，进行观察。结果：维甲酸和地塞米松联合用药可诱导ＢＡＬＢ／Ｃ系小鼠形成腭裂，其主要原因是腭突上抬延迟。结论：维甲酸和地塞米松联合应用诱导ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠形成腭裂是一种稳定的腭裂动物模型。

三维立体培养中不同浓度的胶原凝胶对成纤维细胞生长的影响

目的 :研究在三维立体培养中不同浓度胶原对成纤维细胞生长状态的影响。方法 :分离 1～ 2dSD新生鼠背部皮肤的成纤维细胞 ,分别种入 6 4、5 3、4mg/ml的胶原中 ,光镜观察立体培养条件下成纤维细胞的生长状态和细胞数量 ,并进行统计分析。结果 :6 4mg/ml胶原中细胞的生长状态良好 ,细胞突起明显 ,和二维条件下的形态相似。 5 3mg/ml组中 ,部分细胞出现了空泡和颗粒 ,细胞的生长状态趋于不良。4mg/ml中细胞的大部分突起消失 ,细胞核固缩、溶解 ,部分细胞类似凋亡细胞。 结论 :6 4mg/ml浓度的胶原最适宜于成纤维细胞的生长。

维甲酸处理未分化间充质细胞后细胞增殖与凋亡的变化

目的：研究维甲酸处理未分化外胚间充质细胞后，细胞增殖和细胞凋亡的变化，探讨细胞增殖、凋亡与维甲酸之间的关系。方法：用５μｍｏｌ／Ｌ维甲酸处理未分化外胚间充质细胞，绘制维甲酸处理前后细胞的生长曲线，并用ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡数量的变化。结果：维甲酸处理未分化外胚间充质细胞后，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡数量显著增加。结论：维甲酸可明显抑制未分化外胚间充质细胞的增殖。

颅神经嵴细胞向成骨细胞表型分化的诱导实验

目的 :观察颅神经嵴细胞 (CNCC)在体外是否可以向成骨细胞表型进行诱导分化。方法 :用标准的无血清培养液和含 10 -8mol/L地塞米松、5 0mg/L左旋抗坏血酸和 10mmol/Lβ -磷酸甘油钠的矿化诱导培养液对CNCC进行培养。 15d后取两组细胞用于实验 ,观察两组间细胞形态 ,群体倍增时间、活力细胞数、碱性磷酸酶的活性和OC的含量等方面的变化。结果 :诱导后的CNCC形态由成纤维样转变为多角形 ,细胞群体倍增时间延长 ,细胞活力数减少 ,碱性磷酸酶的活性和OC的含量升高。结论 :CNCC在特定的矿化诱导培养液中 ,可以向成骨细胞表型分化。

小鼠颅神经嵴细胞的培养和特征

目的 :在体外原代培养Balb/c小鼠胚胎的颅神经嵴细胞 ,为颅面部各种组织细胞的发育研究提供细胞来源。方法 :采用胰酶消化法分离小鼠胚胎第 8.5天的颅神经管 ,从小鼠颅神经管中游离出来的细胞即为颅神经嵴细胞。用免疫组织化学方法鉴定细胞的来源 ,并测定细胞的生长曲线。结果 :成功地培养出小鼠的颅神经嵴细胞 ,其形态类似成纤维样细胞。免疫组化检测结果表明 ,神经特异性烯醇化酶 (NSE)抗体染色结果阳性 ,细胞的群体倍增时间为 4 3.6 5h。结论 :原代培养的小鼠颅神经嵴细胞生长稳定 ,来源明确 。

软骨肿瘤中骨形成蛋白的原位杂交定位和定量分析

目的 探讨骨形成蛋白２，３，４，５在软骨肉瘤和软骨瘤形成中的作用。方法 运用原位杂交技术，检测 软骨肉瘤和软骨瘤中 ＢＭＰ ２，３，４，５ ｍＲＮＡ的分布和定位，并采用图像分析仪对原位杂交的阳性程度进行图像分 析。结果 软骨肉瘤中分化较差的梭形细胞中检测有ＢＭＰ ２，３，４ ｍＲＮＡ的表达，而分化状态较好的圆形、卵圆形 细胞中未见阳性信号。软骨基质中未见阳性信号，而软骨瘤中的瘤细胞中只检测到ＢＭＰ ３ｍＲＮＡ的表达。结论 ＢＭＰ表达的种类与软骨肿瘤的类型密切相关，ＢＭＰ ２，４在软骨肉瘤的发生和形成过程中起重要作用．而ＢＭＰ ３ 则与软骨瘤的发生有密切关系。

E2F-1和p21^(WAF1/CIP1)在良恶性多形性腺瘤中的定量表达和意义

目的 研究E2F - 1和 p2 1WAF1/CIP1在良、恶性多形性腺瘤中的表达和意义。方法 实验分为正常组、多形性腺瘤组 (PA)和恶性多形性腺瘤组 (MPA)。利用免疫组化和原位杂交的方法对三组分别进行E2F - 1和p2 1WAF1/CIP1的染色 ,并进行灰度值测量和统计学分析。结果 E2F - 1主要表达在肿瘤性上皮组织 ,软骨样细胞和粘液样组织中也有少量表达。在MPA组中的表达显著高于PA组 ,二者与正常组之间也有显著性差异。P2 1WAF1/CIP1主要在腺管状结构、上皮条索和团块鳞状化生结构的细胞浆中表达 ,在PA和MPA组中的表达均较弱 ,但MPA组比PA组更弱。结论 E2F - 1和p2

人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞向永生化细胞的转变

背景：颅神经嵴干细胞可以作为颌面部各种组织和器官分化研究的重要细胞来源，如何使其获得永生化具有重要意义。人类细胞自发永生化的频率非常低，而一些永生化的基因可以显著增加这种频率。目的：观察人端粒酶催化亚基基因在大鼠颅神经嵴干细胞永生化过程中的作用。设计、时间及地点：观察性实验，于2007—09／2008-06在解放军第四军医大学完成。材料：选择清洁级孕8．5dSD大鼠3只，6周，体质量180g；先天性细胞免疫缺陷动物雄性Balb／c裸小鼠，体质量18～21g，均由解放军第四军医大学实验动物中心提供。质粒PCIneo-hTERT由解放军第四军医大学口腔医院牙体牙髓科提供。方法：原代培养大鼠颅神经嵴干细胞后，将含有人端粒酶催化亚基基因的质粒PCIneo-hTERT转入大鼠颅神经嵴干细胞。经G418筛选后扩增，并连续培养。采用免疫细胞化学法观察转染细胞内人端粒酶催化亚基基因和颅神经嵴干细胞的特异标志物P75的表达，检测细胞的端粒酶活性，绘制细胞生长曲线观察其增殖能力，并通过裸鼠移植实验了解转染细胞的特性。主要观察指标：细胞克隆、特异性蛋白P75表达、端粒酶活性、增殖能力及致瘤性实验结果。结果：①质粒PCIneo—hTERT转染细胞后24h，有少量细胞死亡。加G418后48h，细胞逐步开始大量死亡。12d后出现抗性细胞克隆，共有3个细胞克隆生长良好。分别命名为克隆1、2、3。克隆1和克隆2经过20～25代的传代后，细胞发生衰老、死亡：而克隆3在体外长期培养条件下生长状态良好，稳定表达人端粒酶催化亚基和P75。经转染后颅神经嵴干细胞的端粒酶活性明显升高，且能持续表达。②人端粒酶催化亚基基因转染后，3个细胞克隆在初期的增殖能力较强，随后克隆1、2的增殖速度逐渐变慢，出现死亡，克隆3越过衰老期，且无致瘤性。结论：人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞后，细胞得以永生化，其表型稳定，可作为颅颌面部细胞分化和组织工程研究的种子细胞。

小鼠牙胚发育过程中PHEX基因的时空表达模式研究

目的:研究PHEX在Balb/c小鼠牙胚发育过程中的时空表达模式,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测小鼠牙胚发育各时期中PHEX蛋白的表达。结果:PHEX在蕾状期无表达;帽状期的内、外釉上皮细胞和牙囊细胞中,PHEX有零星的弱阳性表达;钟状早期,PHEX主要表达在内釉上皮细胞和牙囊细胞,外釉上皮层、中间层细胞和靠近基底膜的牙乳头细胞中也有少量表达。钟状晚期,PHEX在成釉细胞和成牙本质细胞中的表达随着牙胚的发育而增强。釉结中成釉细胞的阳性表达程度比其他部位的成釉细胞更强。颈环处的内釉上皮细胞有PHEX的表达,而邻近的牙乳头细胞和外釉上皮细胞中无表达。结论:PHEX在牙胚的发育中有特定的时空表达模式,提示其参与了牙胚的形成发生和矿化。

两种根管预备方法和两种封闭剂对根尖区微渗漏的影响

目的对比2种根管预备方法及2种根管充填封闭剂对根管治疗术后根尖区微渗漏的影响。方法将收集的离体人牙随机分为对照组和A、B、C、D 4个实验组。对照组:手法根管预备,未进行根管充填;A组:Hero642机动镍钛器械根管预备和Cortisomol封闭剂;B组:手法根管预备和Cortisomol封闭剂;C组:手法根管预备和Vitapex封闭剂;D组:Hero642机动镍钛器械根管预备和Vitapex封闭剂。均采用冷侧压充填。2%亚甲蓝溶液染色后进行根尖区微渗漏长度的测量和分析。结果对照组根管内无染料渗入;各实验组均有不同程度的微渗漏。A组和C、D组之间差别有统计学意义,其余各组间未见明显差异。结论使用Hero 642机动镍钛器械进行根管预备,同时采用Cortisomol封闭剂,更能有效地减少根管治疗术后根尖区的微渗漏,可提高根管治疗的效果,其中封闭剂对于根尖区微渗漏的影响更大。

腭裂的动物模型及形成机理的研究进展

近年来，国外学者对腭裂的发生机理进行了大量的研究，并从分子水平对各种化学物质在腭裂形成中的作用做了深入的叙述。本文就有关研究进展，包括实验动物模型的建立，影响腭裂发生率的因素，腭裂发生中的细胞学变化及基因突变研究的新进展等方面进行了综述。

应用基因芯片分析牙周膜干细胞向成骨细胞分化过程中miRNA表达谱的差异

在人牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化过程中,可以利用基因芯片技术,观察miRNA表达谱的变化,从而为人牙周膜干细胞成骨分化机制提供研究基础。本研究应用基因芯片来分析牙周膜干细胞向成骨细胞分化过程中miRNA表达谱的差异,对治疗牙周炎提供了新的研究思路和方案。

rhBMP-2诱导颅神经嵴细胞向神经元分化的体外研究

目的 :观察重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP - 2 )对颅神经嵴细胞的诱导分化作用。方法 :分别用不含rhBMP - 2的无血清培养液和含有不同浓度rhBMP - 2的培养液对颅神经嵴细胞进行培养。 10d后 ,观察两组细胞的形态学差别 ,用胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经纤维细丝蛋白 (NF)、颅神经嵴细胞的特异性抗体P75等抗体进行免疫组化染色 ,鉴定细胞的分化状态 ,并计算NF阳性细胞数的百分比及进行统计分析。结果 :在含有rhBMP - 2的培养液中 ,颅神经嵴细胞的形态由成纤维细胞样向神经元样的表型进行转变 ,可见较长的细胞突起出现。NF染色结果阳性 ,而GFAP、P75染色结果阴性。 5 0ng/mL组中 ,NF的阳性细胞数比其它浓度组明显增多 ,并有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :rhBMP - 2可以诱导颅神经嵴细胞向神经元进行分化 ,5

PHEX抗体对小鼠牙胚发育影响的实验研究

目的:研究PHEX抗体对小鼠牙胚发育的影响,探讨PHEX在牙齿发育过程的作用。方法:E17孕鼠尾静脉注射浓度分别为0.1mg/kg(A组)和0.5mg/kg(B组)的PHEX抗体。对照组N组注射0.1mol/LPBS。采用Mallory三色法染色观察钟状早期(E18)、钟状晚期(P1)、牙齿硬组织形成和矿化期(P3)牙胚的发育情况。免疫组织化学染色观察牙胚中PHEX蛋白的表达情况。结果:Mallory三色法染色结果显示:3组牙胚中釉质的发育无显著差异;成牙本质细胞的分化和牙本质的形成在A、N组中未见明显区别,而在B组中则明显延迟和抑制。E18、P1、P33组成釉细胞中的PHEX蛋白在牙胚中的表达均呈强阳性。P1、P3A组和N组中成牙本质细胞中的PHEX表达也呈强阳性,但B组在P1期靠近基底膜的牙乳头细胞中表达呈弱阳性,在P3期也仅有少量的弱阳性表达。结论:0.5mg/kg浓度的PHEX抗体可显著抑制成牙本质细胞的分化以及PHEX在其中的表达,进而抑制牙本质的生成;PHEX抗体对成釉细胞的发育和釉质的矿化无明显作用。