细胞接种密度对小鼠iPS细胞诱导效率的影响

为研究小鼠胚胎成纤维细胞的接种密度对iPS(induced pluripotent stem,iPS)细胞诱导效率的影响,采用逆转录病毒载体法将Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc4个基因或者Oct4,Sox2,Klf43个基因转入到携带有Oct4-EGFP转基因的小鼠胚胎成纤维细胞(Oct4-EGFP mouse embryonic fibroblasts,Oct4-EGFPMEF)中。感染病毒后的第4天将Oct4-EGFPMEF以500～128000个/孔(每孔面积9.6cm2)进行梯度铺盘,并分别于病毒感染后的第12天和第16天对4因子组和3因子组进行碱性磷酸酶染色和Oct4-EGFP阳性细胞比例检测。结果表明,Oct4-EGFPMEF感染病毒后的接种密度对于iPS细胞诱导效率存在较大的影响。4因子和3因子诱导产生iPS细胞的最佳接种密度分别为8000个/孔和32000个/孔。此外,通过逆转录病毒法,在最佳的接种密度下,可顺利地建立起iPS细胞系。