表面等离子体子共振传感器研究谷胱甘肽过氧化物酶模拟物与底物的结合作用

采用表面等离子体子共振(SPR)传感装置,固定入射角,以波长为变量,以CCD为检测系统,用对金有较强吸附作用的谷胱甘肽(GSH)为基底膜,研究了GSH分别与谷胱甘肽硫转移酶(GST)与小分子GPX模拟酶2-位-碲桥联-β-环糊精(2-TeCD)的动力学过程,计算得GSH与GST的结合常数为2.82×106L/mol;GSH与2-TeCD的结合常数为3.92×102L/mol。结果表明:本方法可以用来评价小分子GPX模拟酶与底物的结合程度,简便快捷,不需标记样品,可以实时监测反应过程,作用后酶与底物易于分离,分离后的酶可以继续使用等优点。

两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物抗紫外线损伤的研究

考察了紫外线照射小鼠胸腺细胞后,对细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡、脂质过氧化程度以及外源性活性氧含量变化的影响,表明紫外线对胸腺细胞有严重损伤.研究了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物2-硒桥联β-环糊精和2-碲桥联β-环糊精抵抗紫外线损伤细胞的能力,结果表明,GPX模拟物能有效地保护细胞,防止紫外线引起的损伤.

6A,6A'-苯胺-6B,6B'-硒桥联-β-CD底物的特异性

运用双酶偶联体系分别测定6A,6A'-二苯胺-6B,6B'-二硒桥联-β-CD(6-AnSeCD)催化谷胱甘肽(GSH)还原过氧化氢(H2O2)、叔丁基过氧化氢(t-BuOOH)和枯烯过氧化氢(CumOOH)3种结构不同氢过氧化物的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,并考察6-AnSeCD催化这3种氢过氧化物的稳态动力学.结果表明:6-AnSeCD还原CumOOH的GPx活力最高;6-AnSeCD的催化机制为乒乓机制;6-AnSeCD的假一级反应速度常数(k max)、米氏常数(K m)和二级反应速率常数(k)均显示CumOOH为6-AnSeCD的最适底物.

GSH对两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物活性影响的研究

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物6A,6A′-二苯胺-6B,6B′-二硒桥联-β-环糊精(6-AnSeCD).采用双酶偶联法测定GPX的活力结果显示,6A,6A′-二环己胺-6B,6B′-二硒桥联-β-环糊精(6-CySeCD)催化谷胱甘肽还原H2O2和枯烯H2O2的活力均比6-AnSeCD的高.为了进一步考察6-CySeCD和6-AnSeCD与GSH之间的相互作用,进行了分子动力学(MD)模拟和分子对接研究.结果表明,与GSH的结合使GPX模拟物的构象发生变化,这种改变可能是影响桥连GPX模拟物催化活性的关键因素.

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备

以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv).经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆.PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因.选取和GSH结合力高的克隆11的scFv编码基因组装到表达载体pPELB上,在大肠杆菌Rosetta中进行可溶性表达,用Ni2+螯合亲和层析纯化scFv-11,免疫点印迹结果证实该抗体能与GSH特异结合.通过化学突变将scFv-11的丝氨酸转变成硒代半胱氨酸(Sec)后,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的含硒(Se)人源单链抗体(Se-scFv-11),其活力为351U/μmol.

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-CySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用

考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表明:H2O2对NIH3T3细胞有严重损伤;6-CySeCD能有效保护细胞,防止紫外线引起的损伤.

具有GPX活性单链抗体的制备及其抗氧化效应

为实现单链抗体的可溶性表达,制备具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的单链抗体,在单链抗体表达载体pTMF 2F3上去除原2F3基因N端非必需的18个氨基酸,采用新的表达载体pRose质粒,在2F3的N端引入13个氨基酸的前导肽,转入BL21(lysS)中,使其分泌到大肠杆菌的周质腔中得以表达,获得可溶性表达产物.产物经过分离纯化、WesternBlot印迹和硒化测活确定具有GPX活性的鼠单链抗体,其GPX活力为2530U/μmol.以脂质过氧化、细胞存活率和细胞膜完整性为指标的抗氧化实验研究表明,具有GPX活性的单链抗体对大鼠乳鼠表皮细胞有抗紫外线损伤的作用,是膜脂质过氧化的有效抑制剂.

具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒四肽(SecRGD)

以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为基础,在N-端引入硒代半胱氨酸(Sec)设计了SecRGD序列模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),利用Fmoc固相合成法合成了SecRGD.采用ESI-MS质谱和氢化物原子荧光光谱法对硒肽进行表征,采用酶偶联法进行GPx活力测定和酶动力学分析,用噻唑蓝(MTT)比色法评价了硒肽的抗氧化效果.结果表明,该硒肽的存在形式为SecRGD的二聚体.该硒肽具有GPx活力,其催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPx活力为5.54 U/μmol,高于经典的GPx模拟物Ebselen.稳态动力学分析结果表明,该硒肽的催化机制为乒乓机制.该硒肽具有分子量小、易溶于水、毒性低及可有效保护Vero细胞免受氧化损伤的优点,具有作为抗氧化药物的应用前景.

溶剂法浸提玉米纤维油的工艺研究

以脱淀粉玉米纤维为原料,采用溶剂法浸提玉米纤维油。以纤维油提取率为指标,在单因素试验的基础上,以正己烷为浸提溶剂,选取料液比、浸提时间、浸提温度为影响因素。通过正交试验优化玉米纤维油浸提工艺。结果表明玉米纤维油的最佳浸提工艺为:提取溶剂为正己烷,料液比为1∶16(g/m L),浸提时间为60 min,温度40℃,此时玉米纤维油的提取率为82.58%。

生物化学实验教学课程化体系与方法的改革探索

生物化学实验课程是高等学校生物学及相关专业学生的必修实验课程。本文根据生物化学实验教学课程化的特点,结合工作实践,在生物化学实验教学体系与方法等方面进行了改革探索,制定了切实可行的有效措施,提高了生物化学实验教学的质量,培养了学生的动手能力和科学实践能力。

蒸煮法脱除玉米纤维残留淀粉的工艺研究

以单因素试验和正交试验对蒸煮法脱除玉米纤维残留淀粉的工艺进行优化,确定脱淀粉的最佳温度、时间、料水比。结果表明:脱淀粉最佳条件为将玉米纤维加水至料水比1∶17(g/m L),于120℃下蒸煮2 h,淀粉脱除率为89.06%。

龙葵果中原花青素优化提取试验研究

以野生龙葵果为原料,以原花青素提取率为考察指标,研究提取溶剂浓度、料液比、提取温度、提取时间等因素对原花青素提取效果的影响。通过正交试验,确定野生龙葵果中原花青素的最佳提取工艺条件为:提取溶剂为60%的乙醇,料液比1∶15,提取温度25℃,提取时间80 min。此优化条件下提取野生龙葵果中原花青素的含量最高,达0.055 2%。

具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含碲环糊精衍生物

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)模拟物6A,6A'-二苯胺-6B,6B'-二碲桥联-β-环糊精(6-AnTeCD),采用双酶偶联法进行GPx活力测定和酶反应动力学分析,通过噻唑蓝(MTT)比色法评价了6-AnTeCD对H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用.结果表明,6-AnTeCD催化谷胱甘肽(GSH)还原过氧化氢(H2O2)的活力高于6-AnSeCD、6,6'-二碲桥联-β-环糊精(6-TeCD)和Ebselen等GPx模拟物.稳态动力学分析显示,6-AnTeCD的催化机制为乒乓机制.6-AnTeCD分子兼具引入底物结合部位和改造催化部位的双重优点,具有分子量小、毒性低及可有效保护心肌细胞免受氧化损伤的优点.

具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒三肽

合成了由硒代半胱氨酸(U)、谷氨酰胺(Q)和色氨酸(W)组成的QUW,QWU,WQU,WUQ,UWQ和UQW 6个具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒三肽;采用双酶偶联法进行了GPx活力测定和稳态动力学分析;通过噻唑蓝(MTT)比色法、划痕愈合实验和Western blot技术表征了含硒三肽对肝癌Hep G2细胞生长和迁移能力的影响.结果表明,当U位于氨基端时,含硒三肽的GPx活力高于U位于中间位置或者羧基端时.UWQ催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的活力最高,其催化机制为乒乓机制.UWQ可使Hep G2细胞运动能力减弱,降低肝癌细胞的浸润转移能力.

酸解法提取脱淀粉玉米纤维中半纤维素的研究

通过单因素试验和正交试验对酸解法提取脱淀粉玉米纤维中半纤维素的工艺进行优化,确定酸解的最佳酸浓度、时间、温度和料液比。结果表明:半纤维素提取的最佳条件为酸解温度110℃,时间2 h,酸浓度0.5%,料液比为1∶12.5(g/m L),在此条件下半纤维素的提取率达94.45%。

2-TeCD对UVB致NIH3T3细胞损伤的保护作用

采用4,6-二脒基二苯基吲哚(DAPI)荧光染色法和流式细胞术考察谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的人工模拟物2-TeCD对UVB致NIH3T3细胞损伤的保护作用.结果表明:2-TeCD可影响UVB致NIH3T3细胞中DNA裂解率、脂质过氧化水平、活性氧体积分数、细胞周期及P53蛋白表达量等指标,可通过清除自由基发挥对UVB损伤的防护作用.

药物和食品质量控制中新型微生物测定方法概述

传统的微生物测定方法往往是劳动密集型和耗时型的。与传统方法相比,微生物测试中的快速和新颖的方法会提供更灵敏、精确和可重复的结果。在微生物学中,最快速的测试方法属于生物技术领域,如PCR、ELISA、ATP生物发光等。文献显示,微生物学的快速检测方法一般应用在药物、化妆品和环境监测等领域。基于民众对食品和药品的安全性日益关注,微生物学的快速检测方法应该继续作为有效的技术用以开发未来将要进行的新型测试,考虑的主要问题是开发方法的扩大和监管要求的提高。

细胞死亡蛋白的三维结构及活性位点的理论研究

利用同源模建和分子动力学模拟方法,构建了细胞死亡蛋白(CED-10)的三维结构,并预测了其可能的活性位点,为细胞死亡蛋白家族催化机理的深入研究提供了重要的参考信息.

谈谈模糊词语在新闻写作中的运用

谈谈模糊词语在新闻写作中的运用吕绍武许多新闻教科书几乎都强调新闻写作应当尽量少用或不用诸如“最近”、“不少”这样的模糊词。但新闻写作实践告诉我们，许多新闻免不了要用模糊词语，若用得恰当，能起到精确词语不可代替的作用。模糊词语，是指外延不确定，内涵无定...