白果内酯对IL-1β诱导的ATDC5软骨细胞自噬、增殖和凋亡的影响

旨在探讨白果内酯对白介素1β(IL-1β)诱导的ATDC5软骨细胞自噬、增殖和凋亡的影响。采用10 ng·mL^(-1)IL-1β诱导ATDC5软骨细胞构建体外炎症模型,随机分为对照组、IL-1β组、白果内酯组(低、中、高剂量)。利用EdU检测细胞新合成的DNA,并结合细胞核标记物(Hoechest)进行双重标记检测细胞增殖速度。使用膜Annexin-V/PI通过流式细胞仪分析ATDC5软骨细胞凋亡情况。通过mRFP-GFP-LC3双荧光系统的组合测量方法检测自噬流。蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组软骨细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1、BAX、Caspase-3和Bcl2的蛋白和mRNA表达情况。结果显示,IL-1β诱导ATDC5软骨细胞后,细胞增殖减弱,下调自噬促进凋亡,而白果内酯干预能够过促进自噬和细胞增殖,抑制凋亡。白果内酯促进ATDC5软骨细胞的增殖(P<0.05),与IL-1β组相比,抑制了LC3-II、Beclin1、BAX和Caspase-3的蛋白和mRNA表达(P<0.05),促进Bcl2蛋白和mRNA表达(P<0.05),激活自噬并上调自噬流,凋亡率显著降低(P<0.05)。结果提示,白果内酯能够促进IL-1β诱导ATDC5软骨细胞的自噬并且抑制细胞凋亡,促进细胞增殖进而发挥保护软骨细胞作用。

白介素1β对大鼠软骨细胞炎症因子和ECM降解蛋白的影响

研究探讨白介素-1β(IL-1β)刺激大鼠软骨细胞不同时间后,对炎症因子环氧合酶(COX-2)和前列腺素E2(PGE2)、软骨降解酶基质金属蛋白酶-血小板反应蛋白基序(ADAMTS-4)以及细胞外基质(ECM)降解蛋白硫酸软骨素846(CS846)和软骨寡聚蛋白(COMP)影响。试验通过体外培养大鼠软骨细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光方法鉴定软骨细胞。10 ng·mL^(-1) IL-1β分别刺激大鼠软骨细胞0、12、24和48 h后,Western blot方法检测软骨细胞COX-2和ADAMTS-4蛋白变化,ELISA方法检测细胞上清液中PGE2、CS846和COMP水平。结果表明,与对照组比较,IL-1β刺激软骨细胞COX-2、PGE2、COMP和CS846表达呈时间依赖性增加。ADAMTS-4在IL-1β刺激12和48 h时表达显著增加。研究发现,IL-1β刺激大鼠软骨细胞48 h内促进软骨细胞分泌ADAMTS-4、COX-2和PGE2蛋白,使关节软骨ECM发生降解,促进COMP和CS846含量增加并介导OA软骨退变。试验采用10 ng·mL^(-1) IL-1β对软骨细胞刺激0、12、24和48 h后检测相关炎症因子与ECM降解蛋白,为研究OA发生发展以及发病机制提供理论基础,实现对OA病情发展的评估,并为选择高效诊疗方案及相关药物提供依据。

齐墩果酸抑制骨关节炎大鼠肌肉氧化损伤及软骨下骨异常骨重建

旨在探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OLA)对于骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠肌肉氧化损伤和软骨下骨异常骨重建的作用。选取18只Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组(CON组)、模型组(OA组)和齐墩果酸给药组(OLA组)。OA组和OLA组利用前十字韧带切断联合半月板部分切除手术(ACLT+PMMx)建立大鼠膝OA模型,CON组进行假手术。OLA组大鼠每天灌胃50 mg·(kg·d)^(-1) OLA,CON组和OA组灌服等体积含20 mL·L^(-1) Tween 80的无菌生理盐水,连续给药4周后取膝关节、股四头肌和血清样本。利用伸膝发声试验和热敏感试验检测大鼠关节疼痛情况。酶联免疫吸附测定试验检测大鼠肌肉中柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)、肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)、白细胞介素1(interleukin 1,IL-1)和IL-6的水平,以及大鼠血清中骨钙素(osteocalcin,OCN)和Ⅰ型胶原羧基末端肽(C-terminal typeⅠcollagen telopeptide,CTX-Ⅰ)的水平。免疫印迹法检测肌肉组织Nrf2/NQO1/HO-1通路蛋白表达情况。微型计算机断层扫描(Micro-CT)用于软骨下骨扫描和骨组织显微结构定量分析。结果显示,与OA组比较,OLA可以降低OA疼痛评分(P<0.05),激活肌肉Nrf2/NQO1/HO-1通路,促进肌肉CS和MHC表达,并下调IL-1和IL-6水平(P<0.05)。此外,补充OLA后大鼠软骨下骨的骨体积分数(BV/TV)、骨矿物质密度(BMD)和骨小梁厚度(Tb.Th)显著升高(P<0.05),骨代谢标志物OCN和CTX-Ⅰ表达显著降低(P<0.05)。结果提示,OLA能够抑制OA大鼠关节疼痛反应,通过调控Nrf2/NQO1/HO-1通路抑制OA大鼠肌肉功能障碍,改善OA早期软骨下骨生物力学性能和微结构改变,从而延缓OA大鼠软骨下骨异常骨重建的发生。

猪源罗伊氏乳杆菌GL001的分离与益生特性研究

为了给猪源益生菌制剂的研究与开发提供更多理论依据,从小型巴马猪粪便中分离获得罗伊氏乳杆菌GL001,对该分离菌株的生长特性、产酸性能、模拟胃肠道环境下的耐受能力、药物敏感性及动物安全性进行检测。结果显示:罗伊氏乳杆菌GL001能迅速进入对数生长期,在16 h达到最高生长点后,pH值也相应变平稳;罗伊氏乳杆菌GL001在模拟的胃液环境中,1.5 h的存活率为93.84%,3 h后为88.41%;对0.3%的胆盐环境耐受性强;罗伊氏乳杆菌GL001对阿莫西林、链霉素、多西环素、氧氟沙星敏感,但对青霉素不敏感;细菌的上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用;大鼠安全性试验表明,分离的罗伊氏乳杆菌GL001对雌鼠、雄鼠的生长和脏器指数均无影响,大鼠脏器没有细菌异位情况。研究表明,分离得到的罗伊氏乳杆菌GL001可作为潜在饲用益生菌进一步研究。

基于前十字韧带切断联合部分半月板切除的大鼠创伤性骨关节炎模型的建立和试验评估

为了探究大鼠创伤性骨关节炎模型(OA)中关节疼痛反应及血清中诱导型一氧化碳合酶(iNOS)、Ⅱ型胶原降解产物(C2C、CTX-Ⅱ)的动态变化,本研究选用40只雄性SD大鼠,随机分为对照组(n=20)和模型组(n=20)。模型组经前十字韧带切断联合部分半月板切除(ACLT+PMMx)诱导OA模型,对照组实施假手术。造模后第0、7、14、21天和第28天进行行为学评估;于造模第0、10、20天和第30天对膝关节进行形态学观察、Pelletier评分和软骨病理学观察,ELISA法检测大鼠血清中iNOS、C2C和CTX-Ⅱ的浓度。结果显示,与对照组比较,模型组从造模后第7天开始疼痛极显著增加(P<0.01),第20天和第30天Pelletier评分极显著增加(P<0.01)。形态学观察和软骨病理学均显示软骨损伤逐渐加重。造模30 d内大鼠血清中iNOS、C2C和CTX-Ⅱ浓度出现不同程度的升高(P<0.05)。结果表明,在大鼠OA模型中关节损伤伴发疼痛反应,血清中iNOS、C2C和CTX-Ⅱ的水平显著增加,为动物临床OA的早期诊断和病情监测提供理论依据。

一例猫酮症性糖尿病的诊治

1只12岁雄性狸花猫,已绝育,患猫病初精神沉郁,食欲不振,轻微咳喘,送诊其他医院以心功能不全进行治疗,静脉注射50%葡萄糖注射液后患猫出现昏迷,遂转诊到东北农业大学动物医院,为了对该猫所患疾病进行诊治,试验采用临床检查、血常规指标检查、血液生化指标检查和尿常规检查的方法进行诊断。结果表明:患猫呼出的气体及后躯被尿液污染的被毛有烂苹果味,血糖、尿素氮、肌酐含量升高,尿糖和尿酮呈阳性,该猫确诊为酮症性糖尿病。给患猫静脉补液和降糖,3 d后,高血糖和尿酮症等临床症状消失,精神状况良好。说明酮症性糖尿病的确诊需要进行相关实验室检查,同时补液、降糖并纠正电解质和酸碱平衡,可以达到良好的治疗效果。