FTA卡保存对虾传染性皮下和造血组织坏死病毒DNA洗脱方法的优化

传染性皮下和造血组织坏死病毒(infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus,IHHNV)是危害虾类健康养殖的重要病原,为寻找一种快捷保存及分离IHHNV DNA的方法,为后续研究提供完整的核酸材料,选用FTA(flinders technology associates)卡为保存介质,以FTA纯化试剂、TE(Tris-EDTA)缓冲液及去离子水为基础洗脱液,设计7种FTA卡黏附DNA洗脱方法,通过荧光定量PCR检测方法检验不同核酸洗脱分离效果及最低的点膜核酸量。结果显示,于4 mm2的FTA卡上,点样体积为2.5μL,用洗脱液作为模板时,最低点膜核酸浓度需要1.47×104copies/μL以上,可获得最佳的检测灵敏度和100%检出率的洗膜方法为50μL TE缓冲液于95℃下浸洗5 min;用膜片做模板,点膜核酸浓度需要1.82×103copies/μL以上,室温(20~25℃)条件下,用FTA纯化试剂洗脱3次,再用TE缓冲液洗脱2次,洗脱时间均为5 min,可获得最佳的检测灵敏度和100%的准确度。以FTA卡保存对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)、虾十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus 1,DIV1)、偷死野田村病毒(covert mortality noda virus,CMNV)、致急性肝胰腺坏死副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)核酸,测试所建洗脱方法的效果,证实了该方法对其他虾类病原核酸的洗脱具有通用性。该研究给出了FTA卡保存和洗脱IHHNV DNA的适用性方案,为野外对虾样品采集、病毒核酸样品跨区域传递的保存和运输条件提供了科学数据。

水生动物环境DNA研究概况及其在水生动物疫病传播研究中的应用前景

近年来,环境DNA技术作为一种新的生物监测方法得到了快速发展,尤其在水生动物方面的研究具有较高的关注度,但用于水生动物疫病传播风险的研究较少。本文根据已有的研究成果,对环境DNA做了简介,并从物种多样性调查、生物量评估以及稀有物种和外来物种入侵监测、种群遗传监测和疫病监测等方面,对国内外水生动物环境DNA研究状况进行了概述,并展望了环境DNA与水生动物疫病传播风险研究相结合的发展前景,为推动环境DNA技术在水生动物疫病监测领域的进一步发展和应用提供了新的思路和切入点。

环境DNA方法在水生动物疫病监测方面的应用

环境DNA(environmental DNA,eDNA)方法是一种从环境样品(土壤、沉积物、水体和生物膜等)中直接提取DNA后,利用分子生物学及测序技术开展的定性或定量分析方法,具有成本低、效率高、采样无损伤性等优点,已被广泛用于生态系统的物种多样性研究、资源生物量检测以及濒危种和入侵种检测。近年来,该技术在水生动物病原检测方面的应用也得到快速发展,尤其是针对高价值和稀有动物的疫病监测具有较强的优势。本文对eDNA在水生动物疫病监测中的应用研究现状进行了综述,指出了虽然eDNA方法仍存在一定局限性,但可适用于不同情形下的水生动物采样,有助于增强水生动物疫病主动监测。本文为深入开展eDNA方法在水生动物疫病监测方面的应用提供了参考。

双排键电子琴对古典音乐与现代音乐的演奏艺术探思

双排键电子琴音质接近真实乐器,能够演奏出不同类型的音乐风格和音色。本文主要分析双排键电子琴对古典音乐和现代音乐的演奏艺术,期望在探究过程中,帮助演奏者找到更加适合的双排键电子琴演奏艺术与风格。

口服型重组草鱼生长激素基因的创建及其原核表达最佳条件研究

生长激素是脊椎动物分泌的一种多肽激素,具有调节鱼类生长发育和代谢等作用.本研究通过将反式转录激活因子(TAT,Trans-activating transcriptional activator)、草鱼生长激素(GH,growth hormone)和细胞穿透环肽(CP,cyclic peptides)等三个基因片段,柔性拼接成一种新型口服型渔用生长激素基因(TGC)并构建其原核表达载体,再将其转化至表达菌株Escherichia coli BL21(DE3)中,获得基因工程菌(TGC-DE3),并对该基因工程菌原核表达条件进行优化.结果表明,柔性拼接后得到的TGC基因片段完整并正向整合到表达载体,TGC-DE3基因工程菌能诱导表达得到分子质量约34.0 kDa的目的蛋白.当IPTG浓度为0.05 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导转速为100 rpm,诱导表达到最佳时间1.5 h时,目的蛋白表达量最高.本研究为渔用生长激素的使用从注射走向口服提供了可能,也为口服型草鱼生长激素蛋白的规模化原核表达生产提供了技术支持.

黄伞和杨树菇发酵液对鱼类病原菌的抑菌活性分析

水生动物的细菌性病害防治急需要新型抗菌物质,而大型真菌,如黄伞和杨树菇的液态发酵液具有较好的抑菌活性.本研究采用管碟法,以嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌等四种常见水生病原菌为指示菌株,测定了黄伞与杨树菇发酵液及其加热处理后的发酵液的抑菌活性.结果表明,黄伞与杨树菇发酵液对四种病原菌均具有较强的抑菌活性,且这种抑菌活性具有较好的热稳定性;这两种真菌发酵液等量混合后对鳗弧菌和溶藻弧菌抑菌活性较单一发酵液明显增强.真菌发酵液对水产病原菌的抑菌作用,应结合具体病原菌,有针对性地应用,做到科学精准地使用.本研究结果将为水生动物的细菌性病害防治提供新的途径和方法.